Държавен вестник, брой 9 от 30.I

НАРЕДБА ЗА КОНТРОЛА И КООРДИНАЦИЯТА НА КОНТРОЛА ВЪРХУ ВИНАТА, СПИРТА, ДЕСТИЛАТИТЕ И СПИРТНИТЕ НАПИТКИ

Приета с ПМС № 232 от 02.11.2005 г.

Обн. ДВ. бр.99 от 9 Декември 2005г., изм. ДВ. бр.62 от 31 Юли 2007г., изм. ДВ. бр.110 от 21 Декември 2007г., изм. ДВ. бр.71 от 12 Август 2008г., изм. ДВ. бр.55 от 7 Юли 2017г., изм. ДВ. бр.9 от 30 Януари 2024г.

Глава първа.
ОБЩИ РАЗПОРЕДБИ

Чл. 1. С тази наредба се уреждат:

1. (изм. - ДВ, бр. 110 от 2007 г.) контролът и координацията на контрола върху производството, получаването, преработката и търговията на гроздето, предназначено за производство на вино, на вина и винен оцет, на продуктите, получени от грозде и вино, на спирт, дестилати и спиртни напитки, както и контролът на лозаро-винарския потенциал;

2. (изм. - ДВ, бр. 110 от 2007 г.) редът и начинът за вземане на проби и методите за физико-химичен и микробиологичен анализ на гроздето, предназначено за производство на вино, на вина и винен оцет, на продуктите, получени от грозде и вино, на спирт, дестилати и спиртни напитки.

Чл. 2. (Изм. - ДВ, бр. 62 от 2007 г., в сила от 19.07.2007 г., изм. - ДВ, бр. 71 от 2008 г., изм. - ДВ, бр. 55 от 2017 г., в сила от 07.07.2017 г., изм. - ДВ, бр. 9 от 2024 г., в сила от 01.02.2024 г.) Държавната политика в лозаро-винарския сектор се осъществява от министъра на земеделието и храните чрез Изпълнителната агенция по лозата и виното (ИАЛВ), а по отношение на производството на спирт, дестилати и спиртни напитки - от министъра на икономиката и енергетиката.

Чл. 3. (Изм. - ДВ, бр. 62 от 2007 г., в сила от 19.07.2007 г., изм. - ДВ, бр. 71 от 2008 г., изм. - ДВ, бр. 55 от 2017 г., в сила от 07.07.2017 г., изм. - ДВ, бр. 9 от 2024 г., в сила от 01.02.2024 г.) Министърът на земеделието и храните ежегодно до 31 март внася за одобряване в Министерския съвет доклад за състоянието и извършения контрол в лозаро-винарския сектор.

Глава втора.
КОНТРОЛ И КООРДИНАЦИЯ НА КОНТРОЛА ВЪРХУ ПРОИЗВОДСТВОТО, ПОЛУЧАВАНЕТО, ПРЕРАБОТКАТА И ТЪРГОВИЯТА НА ГРОЗДЕТО, ПРЕДНАЗНАЧЕНО ЗА ПРОИЗВОДСТВО НА ВИНО, НА ВИНАТА И НА ПРОДУКТИТЕ, ПОЛУЧЕНИ ОТ ГРОЗДЕ И ВИНО

Раздел I.
Общи условия

Чл. 4. (Изм. - ДВ, бр. 110 от 2007 г.) Контролът върху спазването на изискванията на Закона за виното и спиртните напитки (ЗВСН) и нормативните актове по прилагането му по отношение на лозовите насаждения, гроздето, предназначено за производство на вино, гроздовата мъст, продуктите от грозде и вино, вина и винен оцет се осъществява от ИАЛВ.

Чл. 5. (1) (Изм. - ДВ, бр. 110 от 2007 г.) За осъществяване на контрола по чл. 4 длъжностните лица от ИАЛВ извършват документални проверки и проверки на място на гроздопроизводителите, винопроизводителите и производителите на винен оцет, складовете за съхранение на грозде, вино и продукти от грозде и вино и винен оцет и на търговските обекти съгласно чл. 66а, ал. 1 и 2 ЗВСН.

(2) При извършване на проверките длъжностните лица от ИАЛВ имат правомощията, предоставени им от ЗВСН и актовете по прилагането му.

Раздел II.
Координация на контрола върху производството, получаването, преработката и търговията на гроздето, предназначено за производство на вино, на вината и на продуктите, получени от грозде и вино

Чл. 6. (1) При осъществяване на контролните си функции ИАЛВ си взаимодейства със:

1. Министерството на вътрешните работи;

2. Министерството на икономиката и енергетиката (МИЕ);

3. Министерството на транспорта;

4. регионалните и териториалните данъчни дирекции;

5. общинските служби "Земеделие и гори";

6. Агенция "Митници";

7. Министерството на здравеопазването;

8. (изм. - ДВ, бр. 110 от 2007 г.) Комисията за защита на потребителите (КЗП).

(2) Взаимодействието с органите по ал. 1 се осъществява в рамките на тяхната компетентност.

(3) Взаимодействието се осъществява както с националните, така и с регионалните структури на органите по ал. 1

(4) Освен от органите по ал. 1 ИАЛВ може да поиска съдействие от всички други централни и териториални органи и институции на изпълнителната власт и органите на местното самоуправление.

Чл. 7. (1) Преди започване на проверка изпълнителният директор на ИАЛВ писмено уведомява държавните органи по чл. 6 за вида на изискваното съдействие. В уведомлението се посочват обектът на проверката, нейният вид и продължителност и ангажираните с проверката държавни органи.

(2) Изпълнителният директор на ИАЛВ може да изиска от съответния държавен орган информация във връзка с проверката.

(3) Съответният орган предоставя на ИАЛВ исканата информация, както и заповед, с която се определят длъжностните лица, участващи в проверката. В случаите, когато обстоятелствата налагат извършването на спешни проверки, ръководителите на съответните органи осигуряват по възможност в най-кратък срок исканото от ИАЛВ съдействие.

(4) След всяка съвместна проверка участвалите в нея служители изготвят общ писмен доклад до изпълнителния директор на ИАЛВ.

Чл. 8. (1) (Изм. - ДВ, бр. 110 от 2007 г.) В случаите, когато контролен орган, различен от ИАЛВ, планира извършването на проверка на производители и/или търговци на грозде, вино, продукти от грозде и вино и винен оцет, той уведомява предварително изпълнителния директор на ИАЛВ и при необходимост изисква от него съдействие.

(2) Съдействието по ал. 1 може да бъде под формата на предоставяне на информация и/или участие на длъжностни лица от ИАЛВ при извършване на проверката.

(3) (Изм. - ДВ, бр. 110 от 2007 г.) Взаимодействието между Агенция "Митници" и ИАЛВ по отношение на прилагането на ЗВСН и подзаконовите нормативни актове се урежда със съвместна заповед за взаимодействие, подписана от ръководителите на тези ведомства.

Чл. 9. Органите по чл. 6 уведомяват ИАЛВ за наложените санкции в 7-дневен срок от налагането на санкцията.

Глава трета.
КОНТРОЛ И КООРДИНАЦИЯ НА КОНТРОЛА ВЪРХУ ПРОИЗВОДСТВОТО НА СПИРТ, ДЕСТИЛАТИ И СПИРТНИ НАПИТКИ

Раздел I.
Контрол върху производството на спирт, дестилати и спиртни напитки

Чл. 10. Контролът върху производството на спирт, дестилати и спиртни напитки се осъществява от МИЕ.

Чл. 11. (1) За осъществяване на контрола по чл. 10 длъжностните лица от МИЕ извършват документални проверки и проверки на място на производителите на спирт, дестилати и спиртни напитки съгласно чл. 46, ал. 1 и 2 от Наредбата за условията и реда за регистриране и заличаване от регистъра, данните, подлежащи на вписване, начина на водене на дневниците, съдържанието и формата на декларациите на реколтата и стоковата наличност и контрола върху регистрираните лица и дейността им, приета с Постановление № 239 на Министерския съвет от 2004 г. (обн., ДВ, бр. 81 от 2004 г.; изм. и доп., бр. 1 и 78 от 2005 г.).

(2) При извършване на проверките длъжностните лица имат правомощията, предоставени им от ЗВСН и актовете по прилагането му.

Раздел II.
Координация на контрола върху производството на спирт, дестилати и спиртни напитки

Чл. 12. (1) При осъществяване на контролните си функции МИЕ си взаимодейства със:

1. Министерството на вътрешните работи;

2. (изм. - ДВ, бр. 62 от 2007 г., в сила от 19.07.2007 г., изм. - ДВ, бр. 71 от 2008 г., изм. - ДВ, бр. 55 от 2017 г., в сила от 07.07.2017 г., изм. - ДВ, бр. 9 от 2024 г., в сила от 01.02.2024 г.) Министерството на земеделието и храните;

3. Министерството на транспорта;

4. регионалните и териториалните данъчни дирекции;

5. Агенция "Митници";

6. Министерството на здравеопазването;

7. (изм. - ДВ, бр. 110 от 2007 г.) Комисията за защита на потребителите.

(2) Взаимодействието с органите по ал. 1 се осъществява в рамките на тяхната компетентност.

(3) Взаимодействието се осъществява както с националните, така и с регионалните структури на органите по ал. 1.

(4) Освен от органите по ал. 1 МИЕ може да поиска съдействие от всички други централни и териториални органи на изпълнителната власт и органите на местното самоуправление.

Чл. 13. (1) Преди започване на проверка МИЕ писмено уведомява държавните органи по чл. 12 за вида на изискваното съдействие. В случаите, когато обстоятелствата налагат извършването на спешни проверки, ръководителите на съответните органи осигуряват по възможност в най-кратък срок исканото от МИЕ съдействие.

(2) Министерството на икономиката и енергетиката може да изиска от съответния държавен орган информация във връзка с проверката.

(3) Съответният орган предоставя на МИЕ исканата информация, както и заповед, с която се определят длъжностните лица, участващи в проверката.

Чл. 14. (1) В случаите, когато контролен орган, различен от МИЕ, планира извършването на проверка на производители и/или търговци на спирт, дестилати и спиртни напитки, той уведомява предварително МИЕ и при необходимост изисква от него съдействие.

(2) Съдействието по ал. 1 може да бъде под формата на предоставяне на информация и/или участие на длъжностни лица от МИЕ при извършване на проверката.

(3) Взаимодействието между Агенция "Митници" и МИЕ по отношение на прилагането на разпоредбите на чл. 51 ЗВСН се урежда със съвместна заповед за взаимодействие, подписана от ръководителите на тези ведомства.

Чл. 15. Органите по чл. 12 уведомяват МИЕ за наложените санкции в 7-дневен срок от налагането на санкцията.

Глава четвърта.
КОНТРОЛ И КООРДИНАЦИЯ НА КОНТРОЛА ВЪРХУ ТЪРГОВИЯТА НА ДРЕБНО С ВИНО И БУТИЛИРАНИ СПИРТНИ НАПИТКИ

Раздел I.
Контрол върху търговията на дребно с вино, винен оцет и бутилирани спиртни напитки (Загл. доп. - ДВ, бр. 110 от 2007 г.)

Чл. 16. (Изм. и доп. - ДВ, бр. 110 от 2007 г.) Контролът по спазване изискванията на чл. 44, ал. 2, чл. 44а и чл. 48, ал. 1 ЗВСН по отношение на търговията на дребно с вино, винен оцет и бутилирани спиртни напитки се извършва от КЗП към министъра на икономиката и енергетиката.

Чл. 17. (1) (Изм. - ДВ, бр. 110 от 2007 г.) За осъществяване на контрола по чл. 1 длъжностните лица от КЗП извършват документални проверки и проверки на място на търговците на вино и бутилирани спиртни напитки съгласно чл. 80 от Закона за защита на потребителите и за правилата за търговия.

Раздел II.
Координация на контрола върху търговията на дребно с вино и бутилирани спиртни напитки

Чл. 18. (1) (Изм. - ДВ, бр. 110 от 2007 г.) При осъществяване на контролните си функции КЗП си взаимодейства със:

1. Министерството на икономиката и енергетиката;

2. Министерството на вътрешните работи;

3. (изм. - ДВ, бр. 62 от 2007 г., в сила от 19.07.2007 г., изм. - ДВ, бр. 71 от 2008 г., изм. - ДВ, бр. 55 от 2017 г., в сила от 07.07.2017 г., изм. - ДВ, бр. 9 от 2024 г., в сила от 01.02.2024 г.) Министерството на земеделието и храните;

4. Министерството на транспорта;

5. регионалните и териториалните данъчни дирекции;

6. Агенция "Митници";

7. Министерството на здравеопазването.

(2) Взаимодействието с органите по ал. 1 се осъществява в рамките на тяхната компетентност.

(3) Взаимодействието се осъществява както с националните, така и с регионалните структури на органите по ал. 1.

(4) (Изм. - ДВ, бр. 110 от 2007 г.) Освен от органите по ал. 1 КЗП може да поиска съдействие от всички други централни и териториални органи на изпълнителната власт и органите на местното самоуправление.

Чл. 19. (1) (Изм. - ДВ, бр. 110 от 2007 г.) Преди започване на проверка КЗП писмено уведомява органите по чл. 18 за вида на изискваното съдействие. В случаите, когато обстоятелствата налагат извършването на спешни проверки, ръководителите на съответните органи осигуряват по възможност в най-кратък срок исканото от КЗП съдействие.

(2) (Изм. - ДВ, бр. 110 от 2007 г.) Комисията за защита на потребителите може да изиска от съответния държавен орган информация във връзка с проверката.

(3) (Изм. - ДВ, бр. 110 от 2007 г.) Съответният орган предоставя на КЗП исканата информация, както и заповед, с която се определят длъжностните лица, участващи в проверката.

Чл. 20. (1) (Изм. - ДВ, бр. 110 от 2007 г.) В случаите, когато контролен орган, различен от КЗП, планира извършването на проверка на търговци на вино и бутилирани спиртни напитки, той уведомява предварително КЗП и при необходимост изисква от нея съдействие.

(2) (Изм. - ДВ, бр. 110 от 2007 г.) Съдействието по ал. 1 може да бъде под формата на предоставяне на информация и/или участие на длъжностни лица от КЗП при извършване на проверката.

Чл. 21. (Изм. - ДВ, бр. 110 от 2007 г.) Органите по чл. 18 уведомяват КЗП за наложените санкции в 7-дневен срок от налагането на санкцията.

Глава пета.
ВЗЕМАНЕ НА ПРОБИ И МЕТОДИ ЗА АНАЛИЗ ЗА УСТАНОВЯВАНЕ НА СЪСТАВА НА ПРОДУКТИТЕ ПО ЗАКОНА ЗА ВИНОТО И СПИРТНИТЕ НАПИТКИ

Раздел I.
Общи условия и ред за вземане на проби

Чл. 22. Физико-химичен и микробиологичен анализ на продуктите, предмет на ЗВСН, се извършва върху проба от продукта, взета съгласно изискванията на наредбата.

Чл. 23. Приборите, инструментите и съдовете, които се използват за вземане на проби от напитките и продуктите по чл. 22, трябва:

1. да са изработени или вътрешно да са покрити с материали, разрешени за контакт с хранителни продукти, с антикорозионни свойства, устойчиви на въздействието на киселини, основи, дезинфекционни средства и други химически вещества;

2. да не отделят вещества, влияещи върху химическия състав, които действат антисептично, или да променят органолептиката на продукта;

3. да не създават условия за допълнително размножаване на микроорганизми и за отделяне на вещества, които да доведат до промяна на състава на пробата;

4. да се затварят така, че да изолират продукта в достатъчна степен от възможности за вторично биологично или химично замърсяване;

5. да са чисти, сухи, без механични замърсявания, здрави и да осигуряват запазване целостта на пробата.

Чл. 24. (1) Проба от продукти или напитки, налети в съдове с вместимост до 5 l, се оформя, като се вземат съдове от различни места на партидата. Броят на взетите съдове се определя от големината на производствената партида съгласно приложение № 1.

(2) Проба от продукти или напитки, налети в съдове с вместимост над 5 l, се оформя, като се вземат равни количества от горния, средния и долния слой на съдовете. Количествата се вземат с помощта на стъклена сонда с диаметър 15 - 25 mm или с бутилка, прикрепена на летва, чиято дължина е равна на дълбочината на съда. Сондата или бутилката се изплакват със същия продукт или напитка непосредствено преди вземането на пробата.

(3) Проба от продукти и напитки, разлети в бъчви до 1000 l, се оформя при условията на ал. 2 от всяка бъчва или през една до две бъчви при големи еднородни партиди.

(4) (Изм. - ДВ, бр. 110 от 2007 г.) Проба от джибри се взема, като:

1. горният пласт се отстрани и се вземат проби от различни места и различни дълбочини на съда, като всяка проба тежи 0,5 - 1 кг; отделните проби се размесват добре в широк съд;

2. средна проба се оформя от общата проба по метода на диагоналното разделяне; размесените джибри се разстилат на равен слой под форма на нисък пресечен конус, който се разделя на 4 равни части с помощта на две перпендикулярни линии, прекарани през средата на пробата; джибрите от два срещуположни сектора се изхвърлят, а останалите две части се размесват и се разстилат;

3. средната проба за анализ представлява 600 - 900 грама джибри, получени при последователно прилагане на метода по т. 2;

4. пробата по т. 3 се поставя в 6 пластмасови или в 6 стъклени съда, които се затварят и етикетират.

(5) (Нова - ДВ, бр. 110 от 2007 г.) Проба от винени утайки се взема от всеки съд с помощта на сонда или чаша в количество 0,5 - 1 литър винена утайка. Утайката се събира в общ съд, където се размесва и се оформя средна проба в количество 3 - 4 литра. От така оформената средна проба от винена утайка се напълват 6 бутилки с обем 0,75 литра при рядка консистенция или 6 стъклени буркана с обем 0,5 литра при гъста консистенция.

(6) (Предишна ал. 4 - ДВ, бр. 110 от 2007 г.) Количеството на пробата по ал. 2 и 3 не може да бъде по-малко от 8 l.

(7) (Нова - ДВ, бр. 110 от 2007 г.) Количеството на пробата по ал. 1 и 2 се взема от завършена производствена партида, която е вписана в Дневник № 6 за заприходена и реализирана продукция - приложение № 3 към чл. 31, ал. 1 от Наредбата за условията и реда за регистриране и заличаване от регистъра, данните, подлежащи на вписване, начина на водене на дневниците, съдържанието и формата на декларациите за реколтата и стоковата наличност и контрола върху регистрираните лица и дейността им, приета с Постановление № 239 на Министерския съвет от 2004 г. (обн., ДВ, бр. 81 от 2004 г.; изм., бр. 1, 78 и 90 от 2005 г.).

Чл. 25. (1) Количеството от продукта или напитката, взето по реда на чл. 24, се смесва в чист и сух съд с изключение на шумящите вина.

(2) Получената проба по ал. 1:

1. от вина и продукти от грозде и вино се налива в не по-малко от 10 бутилки с вместимост 0,70/0,75 l, изплакнати с продукта или напитката, от които е взета пробата;

2. от спирт, дестилати и спиртни напитки се налива в не по-малко от 9 бутилки с вместимост 0,70/0,75 l, изплакнати с продукта или напитката, от които е взета пробата.

(3) Бутилките се затварят с тапа или друго повторно неизползваемо затварящо устройство съгласно приложение № 2 към чл. 9, ал. 2, т. 2 от Наредбата за придружителните документи при превоз на грозде, местни и вносни вина, продукти от грозде и вино, спирт, дестилати и спиртни напитки, приета с Постановление № 208 на Министерския съвет от 2001 г. (обн., ДВ, бр. 82 от 2001 г.; изм. и доп., бр. 64 от 2003 г., бр. 81 от 2004 г. и бр. 78 от 2005 г.).

(4) Бутилките по ал. 2 се разпределят в полиетиленови пликове съобразно предназначението им. Горният край на плика се прегъва и сгъва под формата на хармоника, като сгънатата част се перфорира. През перфорирания отвор или върху прегънатия край на плика се поставя пломба с етикет, която се стяга и захваща едновременно плика с етикета.

(5) Върху бутилките по ал. 2 се поставят етикети с номер, който съответства на пломбата по ал. 4.

(6) Проба от шумящи вина се взема по реда на ал. 1, като бутилките се разпределят по реда на ал. 3.

(7) Пробата се маркира с етикет, на който се вписват следните означения:

1. наименованието на напитката или продукта;

2. наименованието, седалището и адресът на управление на производителя;

3. количеството и номерът на партидата и реколтата;

4. датата и мястото на вземане на пробата;

5. подписите на лицата, взели пробата;

6. номерът и датата на протокола за вземане на пробата.

Чл. 26. (1) Проба за извършване на физико-химичен и микробиологичен анализ могат да вземат:

1. производителят;

2. упълномощени длъжностни лица от

МИЕ вземат проби от спиртни напитки, подпомагани от длъжностни лица от Националния институт за изследване на вина и спиртни напитки;

3. упълномощени длъжностни лица от ИАЛВ;

4. (изм. - ДВ, бр. 110 от 2007 г.) упълномощени длъжностни лица от КЗП;

5. упълномощени длъжностни лица от Министерството на здравеопазването;

6. упълномощени длъжностни лица от Агенция "Митници".

(2) Производителят взема проба от продуктите или напитките по чл. 22, предназначени за вътрешния пазар или за износ, за оформяне на партида с протокол от изпитване.

(3) Проба от продуктите или напитките по чл. 22 се взема в присъствието на лицето, което извършва производство и/или търговия, на негов технолог или на упълномощено от него лице.

Чл. 27. (1) За всяка взета проба се съставя протокол. В протокола за вземане на пробата се вписват:

1. наименованието на фирмата, седалището и адресът на управление;

2. наименованието на контролния орган, седалището и адресът;

3. собственото, фамилното име, ЕГН и длъжността на лицата, взели пробата;

4. адресът на обекта, от който е взета пробата;

5. наименованието на напитката/продукта;

6. партидният номер и количеството на напитката/продукта и номерът на реколтата;

7. протоколът от изпитване на напитката/продукта, номер и датата, ако такъв вече е издаден;

8. документ за заприходяването в склада на напитката/продукта, номерът и датата;

9. начинът на вземане на пробата;

10. предназначението и маркировката на пробата;

11. вместимостта и броят на съдовете от пробата по предназначение;

12. името, фамилията, ЕГН и длъжността на лицето, присъствало на вземането на пробата;

13. мястото и датата на вземане на пробата;

14. подписите на лицата, взели пробата.

(2) В случаите по чл. 26, ал. 2 протоколът по ал. 1 се придружава от декларация по образец съгласно приложение № 2.

(3) Протоколът се съставя в три екземпляра по образец съгласно приложение № 3. Първият екземпляр от протокола остава у лицата по чл. 18, ал. 1, вторият екземпляр от протокола се изпраща в акредитирана лаборатория, в която ще се извършат изпитванията. Третият екземпляр от протокола се съхранява от производителя или търговеца.

(4) В случай че лицето, присъствало при вземането на пробата, откаже да подпише протокола по ал. 1, това обстоятелство се отбелязва в него и се удостоверява с подпис на свидетел съгласно изискванията на Закона за административните нарушения и наказания.

(5) Протоколът е официален документ. Вписаните в него обстоятелства се считат за верни до доказване на противното.

Чл. 28. (Изм. - ДВ, бр. 110 от 2007 г.) (1) Един от полиетиленовите пликове се изпраща за анализ в акредитираната лаборатория, като към него се прилага екземпляр от протокола по чл. 27.

(2) Останалите два плика се разпределят между производителя и контролния орган, когато пробата е взета в присъствието на контролен орган, или остават само за производителя - в останалите случаи.

(3) Двата плика се запазват за контролни цели и се съхраняват добре затворени в хоризонтално положение в помещение при температура от 12°С до 20°С до изчерпването на партидата за вината, продуктите от грозде и вино до 6 месеца от вземането на пробата за спирт, дестилати и спиртни напитки и до един месец - за джибрите и винените утайки.

Раздел II.
Методи за анализ

Чл. 29. (1) За извършване на физико-химичен и микробиологичен анализ се използват методи за текущо определяне и сравнителни методи за анализ съгласно приложение № 4 и/или № 5.

(2) В случай че в приложения № 4 и 5 няма методи за анализ за откриване или определяне съдържанието на вещество в даден продукт или напитка, се прилагат методи за анализ, признати с резолюция на Генералната асамблея на Международната организация по лозата и виното.

(3) В случай че няма методи за анализ по ал. 2, се прилагат методи в съответствие с препоръките на Международната организация по стандартизация (ISO), а в случай на необходимост - и други методи.

(4) Автоматизирани методи за физико-химичен и микробиологичен анализ се признават за еквивалентни на методите за анализ по приложения № 4 и 5, при условие че точността, повторяемостта и възпроизводимостта на резултатите са най-малко равни на резултатите, получени с методите за анализ по приложенията.

(5) Автоматизираните методи не се прилагат при оспорване на резултати от извършен физико-химичен и микробиологичен анализ.

(6) Автоматизираните методи за измерване на плътност, които се основават на принципа на честотния осцилатор, се признават за еквивалентни на методите за анализ за измерване на плътност по приложение № 4.

Чл. 30. За показатели, при които е допустимо използване на сравнителни методи за анализ (арбитражни методи за анализ) и методи за текущо определяне (обикновени методи за анализ), определящи са резултатите, получени при използване на сравнителните методи за анализ.

Раздел III.
Условия за извършване на физико-химичен и микробиологичен анализ

Чл. 31. Подготвената за анализ проба се съхранява при условия, които осигуряват предпазване от всякакво увреждане или разваляне.

Чл. 32. Преди извършване на физико-химичния и микробиологичния анализ пробата се хомогенизира.

Чл. 33. При физико-химичния и микробиологичния анализ за разреждане, за миене или за разтвори се използва дестилирана или деминерализирана вода със същата чистота.

Чл. 34. При физико-химичен и микробиологичен анализ се използва воден разтвор, когато се извършва разтваряне или разреждане, без допълнително указание за употреба на реактив.

Чл. 35. За физико-химичен и микробиологичен анализ се използват реактиви (вещества, препарати) с квалификация "чист за анализ" (ч.з.а.), освен ако е предвидено друго.

Чл. 36. Техническите устройства, чрез които се извършва физико-химичен и микробиологичен анализ, се състоят от апарати, предназначени за специфична употреба, и апарати, които отговарят на конкретни технически изисквания.

Чл. 37. При физико-химичния анализ се използва аналитична везна с минимална чувствителност 0,1 mg.

Чл. 38.(1) Резултатите от физико-химичния и микробиологичния анализ се изчисляват в грамове на хектолитър (g/hl), освен ако е предвидено друго.

(2) Всеки резултат се изразява с цифри толкова на брой след десетичната запетая, колкото изисква точността на използвания метод за анализ.

(3) Крайният резултат от физико-химичния и микробиологичния анализ представлява средна стойност от най-малко две определяния, които са били осъществени при посочената в приложение № 4 и/или приложение № 5 повторяемост на съответния метод.

Раздел IV.
Протокол от изпитване

Чл. 39. Резултатите от физико-химичния и микробиологичния анализ се отразяват в протокол от изпитване, издаден от акредитираната лаборатория, извършила анализа.

Чл. 40. (1) Протоколът от изпитване съдържа:

1. наименование на акредитираната лаборатория; седалище, адрес на управление;

2. номер и дата на издаване на протокола от изпитване;

3. наименование на напитката/продукта за изпитване;

4. наименование на производителя/вносителя, седалище и адрес на управление;

5. адрес на обекта, от който е взета пробата;

6. наименование на нормативния акт и/или номер на техническата спецификация или стандарта, съгласно които се извършва производството;

7. номер и количество на партидата и на реколтата;

8. брой на изпитаните бутилки от изследваната проба;

9. вид и вместимост на съда, от който е взета пробата;

10. лице, заявило изпитването, номер и дата на протокола за вземане на проба;

11. дата на получаване на пробите за изпитване;

12. наименование на показателите, физико-химични и/или микробиологични;

13. мерна единица на величината;

14. норма на показателя по действащ нормативен/стандартизационен документ;

15. резултати от изпитванията;

16. използван или използвани методи за анализ;

17. име и подпис на лицата, извършили анализа;

18. име и подпис на ръководителя на акредитираната лаборатория;

19. печат на акредитираната лаборатория, извършила анализа.

(2) Анализът по физико-химичните и микробиологичните показатели се извършва в зависимост от вида на продукта или напитката.

Чл. 41. (1) Изпитвателният протокол се издава за оформена партида.

(2) Срокът на действие на изпитвателния протокол е до изчерпването на партидата, за която е издаден.

(3) При извършване на енологични практики и обработки срокът на действие на изпитвателния протокол се прекратява преди изчерпването на партидата.

Чл. 42. (1) Контролните проби, за които е издаден изпитвателен протокол, се съхраняват при температура от 12 до 20°С.

(2) Срокът на съхранение на пробите е:

1. до изчерпване на партидата, но не по-малко от 1 година за проби, за които е издаден изпитвателен протокол по чл. 41, ал. 2;

2. до момента на извършване на енологични практики и обработки, но не по-малко от 6 месеца за проби, за които е издаден изпитвателен протокол по чл. 41, ал. 3.

Допълнителни разпоредби

§ 1. По смисъла на наредбата:

1. "Проба" е количеството вино, продукт от грозде и вино, спирт, дестилати и спиртна напитка, взето от оформена партида при условията на наредбата, притежаващо всички характеристики на партидата.

2. "Повторяемост" е стойността, под която с определена вероятност може да се очаква, че попада абсолютната разлика между два единични резултата от изпитването на проби с един и същ метод, получени от идентични изследвани вещества, при еднакви условия (в същата лаборатория, от същото лице, при използване на същата апаратура, в рамките на кратки периоди от време).

3. "Възпроизводимост" е стойността, под която с определена вероятност може да се очаква, че попада абсолютната разлика между два единични резултата от изпитването на проби с един и същ метод, при различни условия (в различни лаборатории, от различни лица, при използване на различна апаратура, в различно време).

4. "Граница на повторяемост" е стойността, под която се намира с вероятност 95 на сто абсолютната стойност на разликата между два резултата от изпитване, получени при условията на повторяемост (в същата лаборатория, от същото лице, при използване на същата апаратура, в рамките на кратък интервал от време съгласно ISO 3534-1).

5. "Граница на възпроизводимост" е стойността, под която се намира с вероятност 95 на сто абсолютната стойност на разликата между два резултата от изпитване, получени при условията на възпроизводимост (в различни лаборатории, от различни лица, при използване на различна апаратура, в различно време съгласно ISO 3534-1).

6. "Единичен резултат от изследване на проби" е стойността, получена при пълното и еднократно прилагане на използвания метод за изследване върху единична проба.

7. "Определена вероятност" е вероятността, равна на 95 на сто, освен когато е предвидено друго.

8. "Оформена партида" е количеството вино или продукти от грозде и вино, или спиртна напитка с общо търговско наименование, произведено при едни и същи условия, до 60 000 литра за вина с гарантирано и контролирано наименование за произход, до 150 000 литра за вина с гарантирано наименование за произход и трапезни вина с географско указание, до 300 000 литра за спирт и дестилати и до 150 000 литра за спиртни напитки, оформени в опаковки с максимален обем до 60 литра, затворени с неизползваеми повторно затварящи устройства или в съдове, предназначени за съхраняване и транспортиране в наливно състояние.

Заключителни разпоредби

§ 2. Наредбата се приема на основание чл. 66в, ал. 3 ЗВСН.

§ 3. (Изм. - ДВ, бр. 62 от 2007 г., в сила от 19.07.2007 г., изм. - ДВ, бр. 71 от 2008 г., изм. - ДВ, бр. 55 от 2017 г., в сила от 07.07.2017 г., изм. - ДВ, бр. 9 от 2024 г., в сила от 01.02.2024 г.) Изпълнението на наредбата се възлага на министъра на земеделието и храните и на министъра на икономиката и енергетиката.

Преходни и Заключителни разпоредби
КЪМ ПОСТАНОВЛЕНИЕ № 168 ОТ 23 ЮЛИ 2007 Г. ЗА ПРЕОБРАЗУВАНЕ НА НАЦИОНАЛНОТО УПРАВЛЕНИЕ ПО ГОРИТЕ В ДЪРЖАВНА АГЕНЦИЯ ПО ГОРИТЕ

(ОБН. - ДВ, БР. 62 ОТ 2007 Г., В СИЛА ОТ 19.07.2007 Г.)

§ 6. В нормативните актове на Министерския съвет:

1. Думите "министърът на земеделието и горите" и "министъра на земеделието и горите" се заменят съответно с "министърът на земеделието и продоволствието" и "министъра на земеделието и продоволствието".

2. Думите "Министерството на земеделието и горите" и "Министерство на земеделието и горите" се заменят съответно с "Министерството на земеделието и продоволствието" и "Министерство на земеделието и продоволствието".

3. Думите "Националното управление по горите" и "Национално управление по горите" се заменят съответно с "Държавната агенция по горите" и "Държавна агенция по горите".

4. Думите "ръководителят на Националното управление по горите" и "началникът на Националното управление по горите" и думите "ръководителя на Националното управление по горите" и "началника на Националното управление по горите" се заменят съответно с "председателят на Държавната агенция по горите" и "председателя на Държавната агенция по горите".

. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

§ 9. Постановлението влиза в сила от 19 юли 2007 г.

ПОСТАНОВЛЕНИЕ № 304 ОТ 14 ДЕКЕМВРИ 2007 Г. ЗА ИЗМЕНЕНИЕ И ДОПЪЛНЕНИЕ НА НАРЕДБАТА ЗА КОНТРОЛА И КООРДИНАЦИЯТА НА КОНТРОЛА ВЪРХУ ВИНАТА, СПИРТА, ДЕСТИЛАТИТЕ И СПИРТНИТЕ НАПИТКИ, ПРИЕТА С ПОСТАНОВЛЕНИЕ № 232 НА МИНИСТЕРСКИЯ СЪВЕТ ОТ 2005 Г.

(ОБН. - ДВ, БР. 110 ОТ 2007 Г.)

§ 11. Навсякъде в наредбата думите "Комисията по търговия и защита на потребителите" се заменят с "Комисията за защита на потребителите".

Заключителни разпоредби
КЪМ ПОСТАНОВЛЕНИЕ № 194 ОТ 5 АВГУСТ 2008 Г. ЗА ИЗМЕНЕНИЕ НА ТАРИФАТА ЗА ТАКСИТЕ, КОИТО СЕ СЪБИРАТ ОТ НАЦИОНАЛНАТА СЛУЖБА ПО ЗЪРНОТО И ФУРАЖИТЕ КЪМ МИНИСТЪРА НА ЗЕМЕДЕЛИЕТО И ХРАНИТЕ

(ОБН. - ДВ, БР. 71 ОТ 2008 Г.)

§ 5. В нормативните актове на Министерския съвет:

1. Думите "министърът на земеделието и продоволствието" и "министъра на земеделието и продоволствието" се заменят съответно с "министърът на земеделието и храните" и "министъра на земеделието и храните".

2. Думите "Министерството на земеделието и продоволствието" и "Министерство на земеделието и продоволствието" се заменят съответно с "Министерството на земеделието и храните" и "Министерство на земеделието и храните".

Заключителни разпоредби
КЪМ ПОСТАНОВЛЕНИЕ № 130 ОТ 29 ЮНИ 2017 Г. ЗА ПРИЕМАНЕ НА УСТРОЙСТВЕН ПРАВИЛНИК НА МИНИСТЕРСТВОТО НА ЗЕМЕДЕЛИЕТО, ХРАНИТЕ И ГОРИТЕ

(ОБН. - ДВ, БР. 55 ОТ 2017 Г., В СИЛА ОТ 07.07.2017 Г.)

§ 70. Постановлението влиза в сила от деня на обнародването му в "Държавен вестник".

ПОСТАНОВЛЕНИЕ № 10 ОТ 25 ЯНУАРИ 2024 Г. ЗА ИЗМЕНЕНИЕ И ДОПЪЛНЕНИЕ НА НОРМАТИВНИ АКТОВЕ НА МИНИСТЕРСКИЯ СЪВЕТ

(ОБН. - ДВ, БР. 9 ОТ 2024 Г., В СИЛА ОТ 01.02.2024 Г.)

. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

§ 37. В Наредбата за контрола и координацията на контрола върху вината, спирта, дестилатите и спиртните напитки, приета с Постановление № 232 на Министерския съвет от 2005 г. (обн., ДВ, бр. 99 от 2005 г.; изм. и доп., бр. 110 от 2007 г. и бр. 55 от 2017 г.), навсякъде думите "земеделието, храните и горите" се заменят със "земеделието и храните".

. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

Заключителни разпоредби
КЪМ ПОСТАНОВЛЕНИЕ № 10 ОТ 25 ЯНУАРИ 2024 Г. ЗА ИЗМЕНЕНИЕ И ДОПЪЛНЕНИЕ НА НОРМАТИВНИ АКТОВЕ НА МИНИСТЕРСКИЯ СЪВЕТ

(ОБН. - ДВ, БР. 9 ОТ 2024 Г., В СИЛА ОТ 01.02.2024 Г.)

§ 68. Постановлението влиза в сила от 1-во число на месеца, следващ месеца на обнародването му в "Държавен вестник".

Приложение № 1 към чл. 24, ал. 1

Таблица за количествата на взетите проби от тихи вина, продукти от грозде и вино и спиртни напитки

Големина	Количество на взетите проби
на партидата, l	(брой проби)

	за съдове	за съдове	за съдове
	с вместимост	с вместимост	с вместимост
	от 0,7 до 1,5 l	от 0,5 до 0,7 l	от 0,2 до 0,5 l
до 500	до 5%, но не по-	до 5%, но не по-	до 10%, но не по-
	малко от 10	малко от 10	малко от 30
до 1000	до 2%, но не по-	до 2%, но не по-	до 5%, но не по-
	малко от 15	малко от 15	малко от 20
до 10 000	до 1%, но не	до 1%, но не	до 1%, но не
	повече от 20	повече от 20	повече от 30
над 10 000	до 30	до 30	до 40

Таблица за количествата на взетите проби от шумящи вина

Големина на
партидата	Количество на взетите проби	Брой на анализираните
(брой бутилки)	(брой бутилки)	бутилки
до 500	6	3
до 1000	7	3
до 10 000	9	5
над 10 000	11	7

Приложение № 2 към чл. 27, ал. 2

ДЕКЛАРАЦИЯ

Долуподписаният ....................................., ЕГН

(изписват се трите имена)

от гр./с. ......................, обл. .............................. бул. ..................., ул. ....................... № ......., кв. ..........,

(излишното се зачертава)

изпълнителен директор на .......................................................................................................................,

(изписват се името на дружеството, седалището и адресът на управление)

адрес ...........................................................................................................................................................,

Декларирам, че ..........................................................................................................................................,

(изписва се търговското наименование на виното, продукта от грозде и

вино, спирт, дестилат и спиртната напитка)

регион ......................................, реколта ............, партида № .................., количество ........................,

предоставено за извършване на физико-химичен и микробиологичен анализ, е произведено в съответствие с изискванията на Закона за виното и спиртните напитки и нормативната уредба по прилагането му.

При производството му са приложени само разрешени енологични практики и обработки.

Известна ми е отговорността за деклариране на неверни данни по чл. 313, ал. 1 от Наказателния кодекс.

Дата .......................................

Декларатор : ......................................................

(подпис)

Приложение № 3 към чл. 27, ал. 3

(Изм. - ДВ, бр. 110 от 2007 г.)


ПРОТОКОЛ ЗА ВЗЕМАНЕ НА ПРОБА
№ ......../.............. г.

0 Производител/търговец	Фирма: Седалище и адрес на управление: ....................................................... .......................................................		Лица, взели пробата: (име, фамилия, ЕГН и длъжност)
0 Контролен орган	Наименование на контролния орган ............................................ Седалище и адрес на контролния орган .......................................................		....................................................

1. Наименование и адрес на обекта: .......................................................................................................

2. Наименование на напитката/продукта: ..............................................................................................
......................................................................................................................................................................
Партида № ..............; бр. бутилки: ....................; бр. съдове .............................., обем ............ литра
Изпитвателен протокол № ..................................., дата: ........................................................................
Документ за заприходяване в склада № .........................., дата ............................................................


2. НАЧИН ЗА ВЗЕМАНЕ НА ПРОБАТА
а. използван уред: 0 сонда; 0 бутилка; 0 чист, сух съд;
б. пробата взета от: 0 цистерна; 0 контейнер; 0 потребителска опаковка;
в. пробата е предназначена за ФХМА* , ОА* № пломба ......................................................................


3. ПРЕДНАЗНАЧЕНИЕ И МАРКИРОВКА НА ЛАБОРАТОРНАТА ПРОБА
0 ...... бр. бутилки от 0,70/0,75 l за анализ в акредитирана лаборатория
0 ...... бр. бутилки от 0,70/0,75 l за производителя/търговеца
0 ...... бр. бутилки от 0,70/0,75 l за контролния орган
0 ...... пробата е маркирана с етикет съгласно чл. 25, ал. 7 от Наредбата за контрол и координация на контрола по Закона за виното и спиртните напитки

4. ПРОБАТА Е ВЗЕТА В ПРИСЪСТВИЕТО НА:
0 производител/търговец 0 упълномощено лице 0 технолог
........................................................................................................................................................................
(име, фамилия, ЕГН и длъжност)

5. МЯСТО И ДАТА НА ВЗЕМАНЕ НА ПРОБАТА		Подписи на лицата, взели пробата: 1. ....................................................................... 2. .......................................................................


Място и дата .......................................		Име и подпис на декларатора: .............................................................................................

Протоколът се издава в три екземпляра		Вярното се зачертава с кръстче

* ФХМА - физико-химичен и микробиологичен анализ. OA - органолептичен анализ.

Приложение № 4 към чл. 29, ал. 1, 4 и 6

(Изм. - ДВ, бр. 110 от 2007 г.)

Методи за анализ на вина, продукти от грозде и вино и винен оцет

1. Определяне на плътността и относителната плътност при 20°С

1. Определение

Плътността е масата на единица обем вино или мъст при 20°C. Тя се изразява в грамове на милилитър и се обозначава със символа r_20°C.

Относителната плътност при 20°C (или относителната плътност 20°C/20°C) е отношението на масата на определен обем вино или мъст при 20°C към масата на същия обем вода при същата температура, изразено чрез десетично число. Обозначава се със символа d_20°C^20°C.

2. Принцип на метода

Плътността и относителната плътност при 20°C се измерват на проба за анализ чрез:

• пикнометър - сравнителен метод;

• ареометрия с използване на хидростатични везни - обикновени методи.

Забележка. За много точно измерване плътността трябва да бъде коригирана с отчитане на ефекта на серния диоксид, като се използва формулата:

r_20°C = r"_20°C - 0,0006 x S,

където:

r_20°C - коригираната плътност;

r"_20°C - наблюдаваната плътност;

S - общото количество серен диоксид в грамове на литър.

3. Предварителна обработка на пробата

Ако виното или продуктът от грозде и вино съдържа значителни количества въглероден диоксид, по-голямата част от него се отстранява чрез разбъркване на 250 ml от пробата в 1000 ml колба или чрез филтриране под вакуум с 2 g памучна вата, поставена в тръба-удължител.

4. Сравнителен метод

4.1. Апаратура

Обикновено лабораторно оборудване, в частност:

4.1.1. Пикнометър Pyrex (Могат да бъдат използвани други еквивалентни пикнометри) с вместимост приблизително 100 ml, с подвижен термометър, прикрепен чрез съединителен елемент от шлифовано стъкло, калибриран в десети от градуса в интервала от 10 до 30°C. Термометърът трябва да бъде стандартизиран (фигурата).

Фиг. Пикнометърът и неговият тариран флакон

Пикнометърът има странична тръба с дължина 25 mm и максимален вътрешен диаметър 1 mm, завършваща с коничен шлифован съединителен елемент. На тази странична тръба може да бъде поставена резервоарна пробка, състояща се от конична тръба със съединителна част от шлифовано стъкло и завършваща с изтеглена навън част. Тази пробка служи за разширителна камера.

Двете съединения от шлифовано стъкло към апарата следва да бъдат изработени много прецизно.

4.1.2. Тарираният флакон се състои от съд със същия външен обем (с точност 1 ml) както пикнометъра и с маса, равна на масата на пикнометъра, напълнен с течност с относително тегло 1,01 [разтвор на натриев хлорид 2,0% (m/v)].

Термоизолиран съд, който съответства точно на корпуса на пикнометъра.

4.1.3. Двублюдна везна с обхват поне 300 g и с чувствителност 0,1 mg или везни с едно блюдо с обхват поне 200 g и с чувствителност 0,1 mg.

4.2. Калибриране на пикнометъра

Калибрирането на пикнометъра включва определяне на:

- тарата на празния пикнометър;

- обема на пикнометъра при 20°C;

- масата на запълнения с вода пикнометър при 20°C.

4.2.1. Метод с използване на баланс на двублюдна везна

Тарираният флакон се поставя върху лявото блюдо на везните, а чистият и сух пикнометър с поставена резервоарна пробка - върху дясното блюдо. Към блюдото, в което се намира пикнометърът, се добавят тежести и се записва теглото p грама.

Пикнометърът с дестилирана вода с температура на околната среда се напълва и се поставя термометърът; пикнометърът се избърсва до сухо и се поставя в термично изолирания съд. Съдържанието му се разбърква чрез обръщане на съда, докато температурните показания на термометъра не станат постоянни. Наглася се точно нивото на горния ръб на страничната тръба. Страничната тръба се подсушава и се поставя резервоарната пробка; отчита се температурата t°C и ако е необходимо, се коригира неточността на температурната скала. Запълненият с вода пикнометър се претегля по отношение на тарата и се записва теглото p' (в грамове).

Изчисление (Пример за изчисления е даден в т. 6 на този раздел.):

Тариране на празния пикнометър:

Тарата за празния пикнометър е: p + m, където

m е масата на съдържащия се в пикнометъра въздух; m = 0,0012 (p - p').

Обемът при 20°C: V_20°C = (p + m - p') F_t, където:

F_t е коефициент, който се взема от таблица I за температура t°C.

V_20°C трябва да се знае с точност до ± 0,001 ml.

Масата на водата при 20°C:

M_20°C = 0,998203 V_20°C, където:

0,998203 е плътността на водата при 20°C.

4.2.2. Метод с използване на везни с едно блюдо

Определяне на:

• масата на чистия и сух пикнометър - P;

• масата на запълнения с вода пикнометър при t°C, следвайки процедурата, описана в т. 4.2.1 - P₁;

• масата на тарирания флакон - T₀.

Изчисления (Пример за изчисления е даден в т. 6 на този раздел.):

Отчитане на противотежестта за празния пикнометър:

Тарата на празния пикнометър е = P - m, където:

m е масата на съдържащия се в пикнометъра въздух;

m = 0,0012 (P₁ - P).

Обемът при 20°C:

V_20°C = [P₁ - (P - m)] F_t, където:

F е коефициент, който се взема от таблица I за температура t°C.

Обемът при 20°C трябва да се знае с точност до ± 0,001 ml.

Масата на водата при 20°C:

M_20°C = 0,998203 V_20°C, където:

0,998203 е плътността на водата при 20°C.

4.3. Метод чрез измерване

4.3.1. Метод с използване на баланс на двублюдна везна

Пикнометърът с пробата, подготвена за анализ съгласно т.3, се претегля и се следва процедурата, описана в т. 4.2.1.

Ако p" е теглото в грамове, необходимо, за да се установи равновесие при t°C, масата на течността, която се съдържа в пикнометъра, e p + m - p".

Измерена плътност при t°C:

r_t°C = (p + m - p") / V_20°C.

Плътността при 20°C се изчислява, като се използва една от дадените коригиращи таблици в съответствие с вида на измерваната течност: сухо вино (таблица II), естествена или концентрирана мъст (таблица III), сладко вино (таблица IV).

Относителната плътност на виното 20°C/20°C се изразява, като плътността на виното при 20°C се раздели на 0,998203.

4.3.2. Метод с използване на везни с едно блюдо

Тарираният флакон се претегля и се приема, че масата му е равна на Т₁.

dT се изчислява по формулата dT=Т₁ - Т₀.

Масата на празния пикнометър по време на измерването e P - m' + dT.

Пикнометърът с пробата, подготвена за анализ съгласно т. 3, се претегля и се следва процедурата, описана в т. 4.2.1. Ако масата му при t°C е P₂ - масата на течността, която се съдържа в пикнометъра при t°C, e = P₂ - (P - m + dT).

Плътността при t°C е:

r_t°C = (P₂ - (P - m + dT)) / V_20°C.

Плътността на анализираната течност се изчислява при 20°C: сухо вино, мъст - естествена или концентрирана, сладко вино, както е описано в т. 4.3.1.

Относителната плътност 20°C/20°C се изчислява, като плътността при 20°C се раздели на 0,998203.

4.3.3. Повторяемостта на измерването на плътността:

при сухи и полусладки вина r = 0,00010,

а за сладки вина r = 0,00018.

4.3.4. Възпроизводимостта на измерването на плътността:

при сухи и полусладки вина R = 0,00037,

а за сладки вина R = 0,00045.

5. Обикновени методи

5.1. Ареометрия

5.1.1. Апаратура

5.1.1.1. Ареометър

По отношение на техните размери и градуиране ареометрите трябва да отговарят на стандартите на ISO.

Те трябва да имат цилиндричен резервоар и продълговата част с кръгло напречно сечение и с минимален диаметър 3 mm. За сухите вина те трябва да бъдат градуирани от 0,983 до 1,003, с маркировка на всеки 0,0010 и 0,0002. Всяка маркировка на 0,0010 трябва да бъде отдалечена от следващата съответна маркировка на минимум 5 mm. За измерване на плътността на обезалкохолени вина, сладки вина или мъст трябва да се използва набор от 5 ареометъра, градуирани от 1,000 до 1,030; 1,030 до 1,060; 1,060 до 1,090; 1,090 до 1,120 и 1,120 до 1,150. Тези ареометри трябва да бъдат градуирани по отношение на плътността при 20°C с маркировка поне на всеки 0,0010 и 1,0005, като всяка маркировка на 0,0010 трябва да бъде отдалечена от следващата съответна маркировка на минимум 3 mm.

Тези ареометри трябва да са градуирани по такъв начин, че показанията да се отчитат на върха на менискуса. Върху градуираната скала или на хартиения цилиндър вътре в резервоара трябва да има указания за градуирането на плътността или на относителното тегло при 20°C и за отчитането по горния край на менискуса. Ареометрите трябва да бъдат калибрирани от компетентен държавен орган, извършващ акредитация на лабораториите.

5.1.1.2. Калибриран термометър, градуиран на минимални интервали 0,5°C.

5.1.1.3. Измервателен цилиндър с вътрешен диаметър 36 mm и височина 320 mm, поддържан вертикално от опорни нивелиращи винтове.

5.1.2. Начин на работа

Техника на измерване

В мерителния цилиндър се наливат 250 ml от пробата за анализ, приготвена съгласно т. 5.1.1.3, и в него се вкарват термометърът и ареометърът. Отчита се температурата една минута след старателно разбъркване на пробата, за да се получи изравняване на температурата. Термометърът се изважда и се отчита измерената от ареометъра плътност при t°С след интервал от още една минута.

След това измерената плътност при t°C се коригира за 20°C с помощта на таблиците, приложими в случаите на сухи вина (таблица V), мъст (таблица VI) или вина, съдържащи захар (таблица VII).

Относителната плътност 20°C/20°C се получава, като плътността при 20°C се раздели на 0,998203.

5.2. Измерване на плътността с помощта на хидростатични везни

5.2.1. Апаратура

Хидростатични везни

Хидростатични везни с максимален товар най-малко 100 g и с чувствителност 0,1 mg.

Под всяко плато се закрепва поплавък от стъкло Pyrex (огнеупорно стъкло), с обем най-малко 20 ml, чрез окачване с нишка с диаметър не по-голям от 0,1 mm. Окаченият под дясното блюдо поплавък трябва да може да влезе в мерителния цилиндър, който има маркировка, посочваща нивото. Вътрешният диаметър на мерителния цилиндър трябва да е с поне 6 mm по-голям от този на поплавъка. Поплавъкът трябва да може да попада изцяло в обема на мерителния цилиндър, намиращ се под маркировката. Повърхността на измерваната течност да се пресича само от поддържащата нишка. Температурата на течността в мерителния цилиндър се измерва с помощта на термометър, градуиран със стъпка 0,2°C.

Могат да се използват и хидростатични везни с едно блюдо.

5.2.2. Начин на работа

5.2.2.1. Калибриране на хидростатичните везни

Двата поплавъка са във въздуха, везните се уравновесяват чрез поставяне на тежести в дясното блюдо. Записва се масата p.

Мерителният цилиндър се напълва с чиста вода до нивото на маркировката и се отчита температурата t°C след разклащане и престояване в продължение на две или три минути.

Равновесието на везните се възстановява чрез поставяне на тежести в дясното блюдо. Ако масата на тези тежести е p', обемът на поплавъка при 20°C се изчислява по формулата: V_20°C = (p' - p)(F + 0,0012), където:

F е коефициентът, посочен в таблица I за температура t°C;

p и V_20°C са характеристиките на поплавъка.

5.2.2.2. Метод на измерване

Десният поплавък се потапя в мерителния цилиндър, който е напълнен с вино (или мъст) до нивото на маркировката. Отчита се температурата t°C на виното (или мъстта) и се записва.

p" e масата, необходима за установяване на равновесие на везните.

Измерената плътност r_t°C се изчислява по формулата:

r_t°C = (p" - p/V + 0.0012.

Тази плътност се коригира за 20°C с помощта на таблици II, III или IV, ако поплавъкът е от стъкло Pyrex.

6. Пример за изчисляване на плътността при 20°C и относителната плътност (20°C/20°C) (сравнителен метод)

6.1. Пикнометрия с използване на равновесие с двублюдна везна

6.1.1. Калибриране на пикнометъра:

1. Претегляне на чистия и сух пикнометър:

Тарата = пикнометър + p

p = 104,9454 g.

2. Претегляне на пикнометъра, напълнен с вода при t°C:

Тарата = пикнометър + вода + p'

p' = 1,2396 g при t_20,5°C

3. Изчисляване масата на съдържащия се в пикнометъра въздух:

m = 0,0012 (p - p')

m = 0,0012 (104,9454 - 1,2396) = 0,1244 g.

4. Специфични стойности, които следва да бъдат записани:

Тарата на празния пикнометър, p + m:

p + m = 104,9454 + 0,1244 = 105,0698 g.

Обемът при 20°C е = (p + m - p') F_t°C

F_20,5°C = 1,001900

V_20°C = (105,0698 - 1,2396) 1,001900 = 104,0275 ml

Масата на водата при 20°C е = 0,998203 V_20°C

M_20°C = 103,8405 g.

6.1.2. Определяне на плътността и на относителната плътност при 20°C/20°C на сухо вино.

p" = 1,2622 при 17,80°C

r_17,80°C = (105,0698 - 1,2622) / 104,0275 = 0,99788 g/ml

Таблица II позволява да се изчисли r_20°C, започвайки от r_t°C, като се използва зависимостта:

r_20°C = r_t°C ± c / 1000 .

За t = 17,80°C и за алкохолна концентрация 11 об. % от таблицата се отчита c = 0,54

r_20°C = 0,99788 - 0,54/1000 = 0,99734 g/ml

d_20°C^20°C = 0,99734 / 0,998203 = 0,99913.

6.2. Пикнометрия с използване на везни с едно блюдо

6.2.1. Калибриране на пикнометъра:

1. Теглото на чистия и сух пикнометър:

P = 67,7913 g.

2. Теглото на пикнометъра, напълнен с вода при t°C:

P₁ = 169,2715 при 21,65°C

3. Масата на съдържащия се в пикнометъра въздух:

m = 0,0012 (P₁ - P)

m = 0,0012 • 101,4802 = 0,1218 g.

4. Специфични стойности, които следва да бъдат запомнени:

Тарата на празния пикнометър е P - m:

P - m = 67,7913 - 0,1218 = 67,6695 g.

Обемът при 20°C = [P₁ - (P - m)]F_t°C

F_21,65°C = 1,002140

V_20°C = (169,2715 - 67,6695) 1,002140

V_20°C = 101,8194 ml

Масата на водата при 20°C е M_20°C = 0,998203 V_20°C

M_20°C = 101,6364 g

Масата на тарирания флакон - T₀:

T₀ = 171,9160 g.

6.2.2. Определяне на плътността и на относителното тегло при 20°C/20°C на сухо вино

T₁ = 171,9178 g

dT = 171,9178 - 171,9160 = 0,0018 g

P - m + dT = 67,6695 + 0,0018 = 67,6713 g

P₂ = 169,2799 при 18°C

r_18°C = 169,2799 - 67,6713 / 101,8194 = 0,99793 g/ml.

Таблица II позволява да се изчисли r_20°C от r_t°C, като се използва зависимостта:

r_20°C = r_t°C ± c/1000.

За t = 18°C и за алкохолна концентрация 11 об. % от таблицата се отчита c = 0,49

r_20°C = 0,99793 - 0,49/1000 = 0,99744 g/ml

d_20°C^20°C = 0,99744/0,998203 = 0,99923.

Таблица I

Фактор F, с който се умножава масата на водата в пикнометъра, измерена при t°С, за да се преизчисли обемът на пикнометъра при 20°C

		F	t°C	F	t°C	F	t°C	F	t°C	F	t°C	F	t°C	F
	10,0	1,000398	13,0	1,000691	16,0	1,001097	19,0	1,001608	22,0	1,002215	25,0	1,002916	28,0	1,003704
	,1	1,000406	,1	1,000703	,1	1,001113	,1	1,001627	,1	1,002238	,1	1,002941	,1	1,003731
	,2	1,000414	,2	1,000714	,2	1,001128	,2	1,001646	,2	1,002260	,2	1,002966	,2	1,003759
	,3	1,000422	,3	1,000726	,3	1,001144	,3	1,001665	,3	1,002282	,3	1,002990	,3	1,003787
	,4	1,000430	,4	1,000738	,4	1,001159	,4	1,001684	,4	1,002304	,4	1,003015	,4	1,003815
	10,5	1,000439	13,5	1,000752	16,5	1,001175	19,5	1,001703	22,5	1,002326	25,5	1,003041	28,5	1,003843
	,6	1,000447	,6	1,000764	,6	1,001191	,6	1.001722	,6	1,002349	,6	1,003066	,6	1,003871
Т	,7	1,000456	,7	1,000777	,7	1,001207	,7	1,001741	,7	1,002372	,7	1,003092	,7	1,003899
е	,8	1,000465	,8	1,000789	,8	1,001223	,8	1,001761	,8	1,002394	,8	1,003117	,8	1,003928
м	,9	1,000474	,9	1,000803	,9	1,001239	,9	1,001780	,9	1,002417	,9	1,003143	,9	1,003956
п	11,0	1,000483	14,0	1,000816	17,0	1,001257	20,0	1,001800	23,0	1,002439	26,0	1,003168	29,0	1,003984
е	,1	1,000492	,1	1,000829	,1	1,001273	,1	1,001819	,1	1,002462	,1	1,003194	,1	1,004013
р	,2	1,000501	,2	1,000842	,2	1,001290	,2	1,001839	,2	1,002485	,2	1,003222	,2	1,004042
а	,3	1,000511	,3	1,000855	,3	1,001306	,3	1,001859	,3	1,002508	,3	1,003247	,3	1,004071
т	,4	1,000520	,4	1,000868	,4	1,001323	,4	1,001880	,4	1,002531	,4	1,003273	,4	1,004099
у	11,5	1,000530	14,5	1,000882	17,5	1,001340	20,5	1,001900	23,5	1,002555	26,5	1,003299	29,5	1,004128
р	,6	1,000540	,6	1,000895	,6	1,001357	,6	1,001920	,6	1,002578	,6	1,003326	,6	1,004158
а	,7	1,000550	,7	1,000909	,7	1,001374	,7	1,001941	,7	1,002602	,7	1,003352	,7	1,004187
	,8	1,000560	,8	1,000923	,8	1,001391	,8	1,001961	,8	1,002625	,8	1,003379	,8	1,004216
в	,9	1,000570	,9	1,000937	,9	1,001409	,9	1,001982	,9	1,002649	,9	1,003405	,9	1,004245
	12,0	1,000580	15,0	1,000951	18,0	1,001427	21,0	1,002002	24,0	1,002672	27,0	1,003432	30,0	1,004275
°C	,1	1,000591	,1	1,000965	,1	1,001445	,1	1,002023	,1	1,002696	,1	1,003458
	,2	1,000601	,2	1,000979	,2	1,001462	,2	1,002044	,2	1,002720	,2	1,003485
	,3	1,000612	,3	1,000993	,3	1,001480	,3	1,002065	,3	1,002745	,3	1,003513
	,4	1,000623	,4	1,001008	,4	1,001498	,4	1,002086	,4	1,002769	,4	1,003540
	12,5	1,000634	15,5	1,001022	18,5	1,001516	21,5	1,002107	24,5	1,002793	27,5	1,003567
	,6	1,000645	,6	1,001037	,6	1,001534	,6	1,002129	,6	1,002817	,6	1,003594
	,7	1,000656	,7	1,001052	,7	1,001552	,7	1,002151	,7	1,002842	,7	1,003621
	,8	1,000668	,8	1,001067	,8	1,001570	,8	1,002172	,8	1,002866	,8	1,003649
	,9	1,000679	,9	1,001082	,9	1,001589	,9	1,002194	,9	1,002891	,9	1,003676

Таблица II

Температурна корекция (с) на плътността на сухо вино и обезалкохолено вино, измерена с пикнометър от Pyrex при t°С,

за да се отнесе резултатът към 20°C

r₂₀ = r_t ± c/1000

- изважда се, ако t°C е по-ниска от 20°С

- добавя се, ако t°С е по-висока от 20°С

Алкохол в об. %

		0	5	6	7	8	9	10	11	12	13	14	15	16	17	18	19	20	21	22	23	24	25	26	27
	10	1,59	1,64	1,67	1,71	1,77	1,84	1,91	2,01	2,11	2,22	2,34	2,46	2,60	2,73	2,88	3,03	3,19	3,35	3,52	3,70	3,87	4,06	4,25	4,44
	11	1,48	1,53	1,56	1,60	1,64	1,70	1,77	1,86	1,95	2,05	2,16	2,27	2,38	2,51	2,63	2,77	2,91	3,06	3,21	3,36	3,53	3,69	3,86	4,03
	12	1,36	1,40	1,43	1,46	1,50	1,56	1,62	1,69	1,78	1,86	1,96	2,05	2,16	2,27	2,38	2,50	2,62	2,75	2,88	3,02	3,16	3,31	3,46	3,61
Т	13	1,22	1,26	1,28	1,32	1,35	1,40	1,45	1,52	1,59	1,67	1,75	1,83	1,92	2,01	2,11	2,22	2,32	2,44	2,55	2,67	2,79	2,92	3,05	3,18
е	14	1,08	1,11	1,13	1,16	1,19	1,23	1,27	1,33	1,39	1,46	1,52	1,60	1,67	1,75	1,84	1,93	2,03	2,11	2,21	2,31	2,42	2,52	2,63	2,74
м	15	0,92	0,96	0,97	0,99	1,02	1,05	1,09	1,13	1,19	1,24	1,30	1,36	1,42	1,48	1,55	1,63	1,70	1,78	1,86	1,95	2,03	2,12	2,21	2,30
п	16	0,76	0,79	0,80	0,81	0,84	0,86	0,89	0,93	0,97	1,01	1,06	1,10	1,16	1,21	1,26	1,32	1,38	1,44	1,51	1,57	1,64	1,71	1,78	1,85
е	17	0,59	0,61	0,62	0,63	0,65	0,67	0,69	0,72	0,75	0,78	0,81	0,85	0,88	0,95	0,96	1,01	1,05	1,11	1,15	1,20	1,25	1,30	1,35	1,40
р	18	0,40	0,42	0,42	0,43	0,44	0,46	0,47	0,49	0,51	0,53	0,55	0,57	0,60	0,63	0,65	0,68	0,71	0,74	0,77	0,81	0,84	0,87	0,91	0,94
а	19	0,21	0,21	0,22	0,22	0,23	0,23	0,24	0,25	0,26	0,27	0,28	0,29	0,30	0,32	0,33	0,34	0,36	0,37	0,39	0,41	0,42	0,44	0,46	0,47
т	20
у	21	0,21	0,22	0,22	0,23	0,23	0,24	0,25	0,26	0,27	0,28	0,29	0,30	0,31	0,32	0,34	0,36	0,37	0,38	0,40	0,41	0,43	0,44	0,46	0,48
р	22	0,44	0,45	0,46	0,47	0,48	0,49	0,51	0,52	0,54	0,56	0,59	0,61	0,63	0,66	0,69	0,71	0,74	0,77	0,80	0,83	0,87	0,90	0,93	0,97
а	23	0,68	0,70	0,71	0,72	0,74	0,76	0,78	0,80	0,83	0,86	0,90	0,93	0,96	1,00	1,03	1,08	1,13	1,17	1,22	1,26	1,31	1,37	1,41	1,46
	24	0,93	0,96	0,97	0,99	1,01	1,03	1,06	1,10	1,13	1,18	1,22	1,26	1,31	1,36	1,41	1,47	1,52	1,58	1,64	1,71	1,77	1,84	1,90	1,97
в	25	1,19	1,23	1,25	1,27	1,29	1,32	1,36	1,40	1,45	1,50	1,55	1,61	1,67	1,73	1,80	1,86	1,93	2,00	2,08	2,16	2,24	2,32	2,40	2,48
	26	1,47	1,51	1,53	1,56	1,59	1,62	1,67	1,72	1,77	1,83	1,90	1,96	2,03	2,11	2,19	2,27	2,35	2,44	2,53	2,62	2,72	2,81	2,91	3,01
°C	27	1,75	1,80	1,82	1,85	1,89	1,93	1,98	2,04	2,11	2,18	2,25	2,33	2,41	2,50	2,59	2,68	2,78	2,88	2,98	3,09	3,20	3,31	3,42	3,53
	28	2,04	2,10	2,13	2,16	2,20	2,25	2,31	2,38	2,45	2,53	2,62	2,70	2,80	2,89	3,00	3,10	3,21	3,32	3,45	3,57	3,69	3,82	3,94	4,07
	29	2,34	2,41	2,44	2,48	2,53	2,58	2,65	2,72	2,81	2,89	2,99	3,09	3,19	3,30	3,42	3,53	3,65	3,78	3,92	4,05	4,19	4,33	4,47	4,61
	30	2,66	2,73	2,77	2,81	2,86	2,92	3,00	3,08	3,17	3,27	3,37	3,48	3,59	3,72	3,84	3,97	4,11	4,25	4,40	4,55	4,70	4,85	4,92	5,17

Забележка. Тази таблица може да се използва за преизчисляване на относителната плътност d'₂₀ в d₂₀²⁰.

Таблица III

Температурна корекция (с) на плътността на мъст и концентрирана мъст, измерена с пикнометър от Pyrex при t°С,

за да се отнесе резултатът към 20°C

r₂₀ = r_t ± c/1000

- изважда се, ако t°C е по-ниска от 20°С

- добавя се, ако t°С е по-висока от 20°С

Плътност

		1,05	1,06	1,07	1,08	1,09	1,10	1,11	1,12	1,13	1,14	1,15	1,16	1,18	1,20	1,22	1,24	1,26	1,28	1,30	1,32	1,34	1,36
	10°	2,31	2,48	2,66	2,82	2,99	3,13	3,30	3,44	3,59	3,73	3,88	4,01	4,28	4,52	4,76	4,98	5,18	5,42	5,56	5,73	5,90	6,05
Т	11°	2,12	2,28	2,42	2,57	2,72	2,86	2,99	3,12	3,25	3,37	3,50	3,62	3,85	4,08	4,29	4,48	4,67	4,84	5,00	5,16	5,31	5,45
е	12°	1,92	2,06	2,19	2,32	2,45	2,58	2,70	2,82	2,94	3,04	3,15	3,26	3,47	3,67	3,85	4,03	4,20	4,36	4,51	4,65	4,78	4,91
м	13°	1,72	1,84	1,95	2,06	2,17	2,27	2,38	2,48	2,58	2,69	2,78	2,88	3,05	3,22	3,39	3,55	3,65	3,84	3,98	4,11	4,24	4,36
п	14°	1,52	1,62	1,72	1,81	1,90	2,00	2,09	2,17	2,26	2,34	2,43	2,51	2,66	2,82	2,96	3,09	3,22	3,34	3,45	3,56	3,67	3,76
е	15°	1,28	1,36	1,44	1,52	1,60	1,67	1,75	1,82	1,89	1,96	2,04	2,11	2,24	2,36	2,48	2,59	2,69	2,79	2,88	2,97	3,03	3,10
р	16°	1,05	1,12	1.18	1,25	1,31	1,37	1,43	1,49	1,55	1,60	1,66	1,71	1,81	1,90	2,00	2,08	2,16	2,24	2,30	2,37	2,43	2,49
а	17°	0,80	0,86	0,90	0,95	1,00	1,04	1,09	1,13	1,18	1,22	1,26	1,30	1,37	1,44	1,51	1,57	1,62	1,68	1,72	1,76	1,80	1,84
т	18°	0,56	0,59	0,62	0,66	0,68	0,72	0,75	0,77	0,80	0,83	0,85	0,88	0,93	0,98	1,02	1,05	1,09	1,12	1,16	1,19	1,21	1,24
у	19°	0,29	0,31	0,32	0,34	0,36	0,37	0.39	0,40	0,42	0,43	0,44	0,45	0,48	0,50	0,52	0,54	0,56	0,57	0,59	0,60	0,61	0,62
р	20°
а	21°	0,29	0,30	0,32	0,34	0,35	0,37	0,38	0,40	0,41	0,42	0,44	0,46	0,48	0,50	0,53	0,56	0,58	0,59	0,60	0,61	0,62	0,62
	22°	0,58	0,61	0,64	0,67	0,70	0,73	0,76	0,79	0,81	0,84	0,87	0,90	0,96	1,00	1,05	1,09	1,12	1,15	1,18	1,20	1,22	1,23
в	23°	0,89	0,94	0,99	1,03	1,08	1,12	1,16	1,20	1,25	1,29	1,33	1,37	1,44	1,51	1,57	1,63	1,67	1,73	1,77	1,80	1,82	1,84
	24°	1,20	1,25	1,31	1,37	1,43	1,49	1,54	1,60	1,66	1,71	1,77	1,82	1,92	2,01	2,10	2,17	2,24	2,30	2,36	2,40	2,42	2,44
°C	25°	1,51	1,59	1,66	1,74	1,81	1,88	1,95	2,02	2,09	2,16	2,23	2,30	2,42	2,53	2,63	2,72	2,82	2,89	2,95	2,99	3,01	3,05
	26°	1,84	1,92	2,01	2,10	2,18	2,26	2,34	2,42	2,50	2,58	2,65	2,73	2,87	3,00	3,13	3,25	3,36	3,47	3,57	3,65	3,72	3,79
	27°	2,17	2,26	2,36	2,46	2,56	2,66	2,75	2,84	2,93	3,01	3,10	3,18	3,35	3,50	3,66	3,80	3,93	4,06	4,16	4,26	4,35	4,42
	28°	2,50	2,62	2,74	2,85	2,96	3,07	3,18	3,28	3,40	3,50	3,60	3,69	3,87	4,04	4,21	4,36	4,50	4,64	4,75	4,86	4,94	5,00
	29°	2,86	2,98	3,10	3,22	3,35	3,47	3,59	3,70	3,82	3,93	4,03	4,14	4,34	4,53	4,72	4,89	5,05	5,20	5,34	5,46	5,56	5,64
	30°	3,20	3,35	3,49	3,64	3,77	3,91	4,05	4,17	4,30	4,43	4,55	4,67	4,90	5,12	5,39	5,51	5,68	5,84	5,96	6,08	6,16	6,22

Забележка. Тази таблица може да се използва за преизчисляване на относителната плътност d'₂₀ в d₂₀²⁰.

Таблица IV

Температурна корекция (с) на плътността на вина с остатъчна захар, с алкохолно съдържание над 13 об. %, измерена с пикнометър от Pyrex при t°С,

за да се отнесе резултатът към 20°C

r₂₀ = r_t ± c/1000

- изважда се, ако t°C е по-ниска от 20°С

- добавя се, ако t°С е по-висока от 20°С

		Алкохол 13 об. %	Алкохол 15 об. %	Алкохол 17 об. %
		плътност	плътност	плътност

		1,000	1,020	1,040	1,060	1,080	1,100	1,120	1,000	1,020	1,040	1,060	1,080	1,100	1,120	1,000	1,020	1,040	1,060	1,080	1,100	1,120
	10	2,36	2,71	3,06	3,42	3,72	3,96	4,32	2,64	2,99	3,36	3,68	3,99	4,30	4,59	2,94	3,29	3,64	3,98	4,29	4,60	4,89
	11	2,17	2,49	2,80	2,99	3,39	3,65	3,90	2,42	2,73	3,05	3,34	3,63	3,89	4,15	2,69	3,00	3,32	3,61	3,90	4,16	4,41
Т	12	1,97	2,25	2,53	2,79	3,05	3,29	3,52	2,19	2,47	2,75	3,01	3,27	3,51	3,73	2,42	2,70	2,98	3,24	3,50	3,74	3,96
е	13	1,78	2,02	2,25	2,47	2,69	2,89	3,09	1,97	2,21	2,44	2,66	2,87	3,08	3,29	2,18	2,42	2,64	2,87	3,08	3,29	3,49
м	14	1,57	1,78	1,98	2,16	2,35	2,53	2,70	1,74	1,94	2,14	2,32	2,52	2,69	2,86	1,91	2,11	2,31	2,50	2,69	2,86	3,03
п	15	1,32	1,49	1,66	1,82	1,97	2,12	2,26	1,46	1,63	1,79	1,95	2,10	2,25	2,39	1,60	1,77	1,93	2,09	2,24	2,39	2,53
е	16	1,08	1,22	1,36	1,48	1,61	1,73	1,84	1,18	1,32	1,46	1,59	1,71	1,83	1,94	1,30	1,44	1,58	1,71	1,83	1,95	2,06
р	17	0,83	0,94	1,04	1,13	1,22	1,31	1,40	0,91	1,02	1,12	1,21	1,30	1,39	1,48	1,00	1,10	1,20	1,30	1,39	1,48	1,56
а	18	0,58	0,64	0,71	0,78	0,84	0,89	0,95	0,63	0,69	0,76	0,83	0,89	0,94	1,00	0,69	0,75	0,82	0,89	0,95	1,00	1,06
т	19	0,30	0,34	0,37	0,40	0,43	0,46	0,49	0,33	0,37	0,40	0,43	0,46	0,49	0,52	0,36	0,39	0,42	0,46	0,49	0,52	0,54
у	20
р	21	0,30	0,33	0,36	0,40	0,43	0,46	0,49	0,33	0,36	0,39	0,43	0,46	0,49	0,51	0,35	0,39	0,42	0,45	0,48	0,51	0,54
а	22	0,60	0,67	0,73	0,80	0,85	0,91	0,98	0,65	0,72	0,78	0,84	0,90	0,96	1,01	0,71	0,78	0,84	0,90	0,96	1,01	1,07
	23	0,93	1,02	1,12	1,22	1,30	1,39	1,49	1,01	1,10	1,20	1,29	1,38	1,46	1,55	1,10	1,19	1,29	1,38	1,46	1,55	1,63
в	24	1,27	1,39	1,50	1,61	1,74	1,84	1,95	1,37	1,49	1,59	1,72	1,84	1,95	2,06	1,48	1,60	1,71	1,83	1,95	2,06	2,17
	25	1,61	1,75	1,90	2,05	2,19	2,33	2,47	1,73	1,87	2,02	2,17	2,31	2,45	2,59	1,87	2,01	2,16	2,31	2,45	2,59	2,73
°C	26	1,94	2,12	2,29	2,47	2,63	2,79	2,95	2,09	2,27	2,44	2,62	2,78	2,94	3,10	2,26	2,44	2,61	2,79	2,95	3,11	3,26
	27	2,30	2,51	2,70	2,90	3,09	3,27	3,44	2,48	2,68	2,87	3,07	3,27	3,45	3,62	2,67	2,88	3,07	3,27	3,46	3,64	3,81
	28	2,66	2,90	3,13	3,35	3,57	3,86	4,00	2,86	3,10	3,23	3,55	3,77	3,99	4,20	3,08	3,31	3,55	3,76	3,99	4,21	4,41
	29	3,05	3,31	3,56	3,79	4,04	4,27	4,49	3,28	3,53	3,77	4,02	4,26	4,49	4,71	3,52	3,77	4,01	4,26	4,50	4,73	4,95
	30	3,44	3,70	3,99	4,28	4,54	4,80	5,06	3,68	3,94	4,23	4,52	4,79	5,05	5,30	3,95	4,22	4,51	4,79	5,07	5,32	5,57

		Алкохол 19 об. %	Алкохол 21 об. %
		плътност	плътност

		1,000	1,020	1,040	1,060	1,080	1,100	1,120	1,000	1,020	1,040	1,060	1,080	1,100	1,120
	10	3,27	3,62	3,97	4,30	4,62	4,92	5,21	3,62	3,97	4,32	4,66	4,97	5,27	5,56
	11	2,99	3,30	3,61	3,90	4,19	4,45	4,70	3,28	3,61	3,92	4,22	4,50	4,76	5,01
Т	12	2,68	2,96	3,24	3,50	3,76	4,00	4,21	2,96	3,24	3,52	3,78	4,03	4,27	4,49
е	13	2,40	2,64	2,87	3,09	3,30	3,51	3,71	2,64	2,88	3,11	3,33	3,54	3,74	3,95
м	14	2,11	2,31	2,51	2,69	2,88	3,05	3,22	2,31	2,51	2,71	2,89	3,08	3,25	3,43
п	15	1,76	1,93	2,09	2,25	2,40	2,55	2,69	1,93	2,10	2,26	2,42	2,57	2,72	2,86
е	16	1,43	1,57	1,70	1,83	1,95	2,08	2,18	1,56	1,70	1,84	1,97	2,09	2,21	2,32
р	17	1,09	1,20	1,30	1,39	1,48	1,57	1,65	1,20	1,31	1,41	1,50	1,59	1,68	1,77
а	18	0,76	0,82	0,88	0,95	1,01	1,06	1,12	0,82	0,88	0,95	1,01	1,08	1,13	1,18
т	19	0,39	0,42	0,45	0,49	0,52	0,55	0,57	0,42	0,46	0,49	0,52	0,55	0,58	0,61
у	20
р	21	0,38	0,42	0,45	0,48	0,51	0,54	0,57	0,41	0,45	0,48	0,51	0,54	0,57	0,60
а	22	0,78	0,84	0,90	0,96	1,02	1,07	1,13	0,84	0,90	0,96	1,02	1,08	1,14	1,19
	23	1,19	1,28	1,38	1,47	1,55	1,64	1,72	1,29	1,39	1,48	1,57	1,65	1,74	1,82
в	24	1,60	1,72	1,83	1,95	2,06	2,18	2,29	1,73	1,85	1,96	2,08	2,19	2,31	2,42
	25	2,02	2,16	2,31	2,46	2,60	2,74	2,88	2,18	2,32	2,47	2,62	2,76	2,90	3,04
°C	26	2,44	2,62	2,79	2,96	3,12	3,28	3,43	2,53	2,81	2,97	3,15	3,31	3,47	3,62
	27	2,88	3,08	3,27	3,42	3,66	3,84	4,01	3,10	3,30	3,47	3,69	3,88	4,06	4,23
	28	3,31	3,54	3,78	4,00	4,22	4,44	4,64	3,56	3,79	4,03	4,25	4,47	4,69	4,89
	29	3,78	4,03	4,27	4,52	4,76	4,99	5,21	4,06	4,31	4,55	4,80	5,04	5,27	5,48
	30	4,24	4,51	4,80	5,08	5,36	5,61	5,86	4,54	4,82	5,11	5,39	5,66	5,91	6,16

Таблица V

Температурна корекция (с) на плътността на сухо вино и обезалкохолено вино, измерена с пикнометър или ареометър

от обикновено стъкло при t°С, за да се отнесе резултатът към 20°C

r₂₀ = r_t ± c/1000,

- изважда се, ако t°C e по-ниска от 20°С

- добавя се, ако t°C е по-висока от 20°С.

Алкохол в об. %

		0	5	6	7	8	9	10	11	12	13	14	15	16	17	18	19	20	21	22	23	24	25	26	27
	10	1,45	1,51	1,55	1,58	1,64	1,70	1,78	1,88	1,98	2,09	2,21	2,34	2,47	2,60	2,75	2,90	3,06	3,22	3,39	3,57	3,75	3,93	4,12	4,31
	11	1,35	1,40	1,43	1,47	1,52	1,58	1,65	1,73	1,83	1,93	2,03	2,15	2,26	2,38	2,51	2,65	2,78	2,93	3,08	3,24	3,40	3,57	3,73	3,90
Т	12	1,24	1,28	1,31	1,34	1,39	1,44	1,50	1,58	1,66	1,75	1,84	1,94	2,04	2,15	2,26	2,38	2,51	2,63	2,77	2,91	3,05	3,19	3,34	3,49
е	13	1,12	1,16	1,18	1,21	1,25	1,30	1,35	1,42	1,49	1,56	1,64	1,73	1,82	1,91	2,01	2,11	2,22	2,33	2,45	2,57	2,69	2,81	2,95	3,07
м	14	0,99	1,03	1,05	1,07	1,11	1,14	1,19	1,24	1,31	1,37	1,44	1,52	1,59	1,67	1,75	1,84	1,93	2,03	2,13	2,23	2,33	2,44	2,55	2,66
п	15	0,86	0,89	0,90	0,92	0,95	0,98	1,02	1,07	1,12	1,17	1,23	1,29	1,35	1,42	1,49	1,56	1,63	1,71	1,80	1,88	1,96	2,05	2,14	2,23
е	16	0,71	0,73	0,74	0,76	0,78	0,81	0,84	0,87	0,91	0,96	0,99	1,05	1,10	1,15	1,21	1,27	1,33	1,39	1,45	1,52	1,59	1,66	1,73	1,80
р	17	0,55	0,57	0,57	0,59	0,60	0,62	0,65	0,67	0,70	0,74	0,77	0,81	0,84	0,88	0,92	0,96	1,01	1,05	1,11	1,15	1,20	1,26	1,31	1,36
а	18	0,38	0,39	0,39	0,40	0,41	0,43	0,44	0,46	0,48	0,50	0,52	0,55	0,57	0,60	0,62	0,65	0,68	0,71	0,74	0,78	0,81	0,85	0,88	0,91
т	19	0,19	0,20	0,20	0,21	0,21	0,22	0,23	0,24	0,25	0,26	0,27	0,28	0,29	0,30	0,32	0,33	0,35	0,36	0,38	0,39	0,41	0,43	0,44	0,46
у	20
р	21	0,21	0,22	0,22	0,23	0,23	0,24	0,25	0,25	0,26	0,27	0,29	0,29	0,31	0,32	0,34	0,35	0,36	0,38	0,39	0,41	0,43	0,44	0,46	0,48
а	22	0,43	0,45	0,45	0,46	0,47	0,49	0,50	0,52	0,54	0,56	0,58	0,60	0,63	0,65	0,68	0,71	0,73	0,77	0,80	0,83	0,86	0,89	0,93	0,96
	23	0,67	0,69	0,70	0,71	0,72	0,74	0,77	0,79	0,82	0,85	0,88	0,91	0,95	0,99	1,03	1,07	1,12	1,16	1,21	1,25	1,30	1,35	1,40	1,45
в	24	0,91	0,93	0,95	0,97	0,99	1,01	1,04	1,07	1,11	1,15	1,20	1,24	1,29	1,34	1,39	1,45	1,50	1,56	1,62	1,69	1,76	1,82	1,88	1,95
	25	1,16	1,19	1,21	1,23	1,26	1,29	1,33	1,37	1,42	1,47	1,52	1,57	1,63	1,70	1,76	1,83	1,90	1,97	2,05	2,13	2,21	2,29	2,37	2,45
°C	26	1,42	1,46	1,49	1,51	1,54	1,58	1,62	1,67	1,73	1,79	1,85	1,92	1,99	2,07	2,14	2,22	2,31	2,40	2,49	2,58	2,67	2,77	2,86	2,96
	27	1,69	1,74	1,77	1,80	1,83	1,88	193	1,98	2,05	2,12	2,20	2,27	2,35	2,44	2,53	2,63	2,72	2,82	2,93	3,04	3,14	3,25	3,37	3,48
	28	1,97	2,03	2,06	2,09	2,14	2,19	2,24	2,31	2,38	2,46	2,55	2,63	2,73	2,83	2,93	3,03	3,14	3,26	3,38	3,50	3,62	3,75	3,85	4,00
	29	2,26	2,33	2,37	2,40	2,45	2,50	2,57	2,64	2,73	2,82	2,91	2,99	3,11	3,22	3,34	3,45	3,58	3,70	3,84	3,97	4,11	4,25	4,39	4,54
	30	2,56	2,64	2,67	2,72	2,77	2,83	2,90	2,98	3,08	3,18	3,28	3,38	3,50	3,62	3,75	3,88	4,02	4,16	4,30	4,46	4,61	4,76	4,92	5,07

Забележка. Тази таблица може да се използва за преизчисляване на относителната плътност d'₂₀ в d₂₀²⁰.

Таблица VI

Температурна корекция (с) на плътността на мъст и концентрирана мъст, измерена с пикнометър или ареометър

от обикновено стъкло при t°C, за да се отнесе резултатът към 20°C

r₂₀ = r_t ± c/1000,

- изважда се, ако t°C е по-ниска от 20°С

- добавя се, ако t°C е по-висока от 20°С.

Плътност

		1,05	1,06	1,07	1,08	1,09	1,10	1,11	1,12	1,13	1,14	1,15	1,16	1,18	1,20	1,22	1,24	1,26	1,28	1,30	1,32	1,34	1,36
	10	2,17	2,34	2,52	2,68	2,85	2,99	3,16	3,29	3,44	3,58	3,73	3,86	4,13	4,36	4,60	4,82	5,02	5,25	5,39	5,56	5,73	5,87
	11	2,00	2,16	2,29	2,44	2,59	2,73	2,86	2,99	3,12	3,24	3,37	3,48	3,71	3,94	4,15	4,33	4,52	4,69	4,85	5,01	5,15	5,29
	12	1,81	1,95	2,08	2,21	2,34	2,47	2,58	2,70	2,82	2,92	3,03	3,14	3,35	3,55	3,72	3,90	4,07	4,23	4,37	4,52	4,64	4,77
Т	13	1,62	1,74	1,85	1,96	2,07	2,17	2,28	2,38	2,48	2,59	2,68	2,77	2,94	3,11	3,28	3,44	3,54	3,72	3,86	3,99	4,12	4,24
е	14	1,44	1,54	1,64	1,73	1,82	1,92	2,00	2,08	2,17	2,25	2,34	2,42	2,57	2,73	2,86	2,99	3,12	3,24	3,35	3,46	3,57	3,65
м	15	1,21	1,29	1,37	1,45	1,53	1,60	1,68	1,75	1,82	1,89	1,97	2,03	2,16	2,28	2,40	2,51	2,61	2,71	2,80	2,89	2,94	3,01
п	16	1,00	1,06	1,12	1,19	1,25	1,31	1,37	1,43	1,49	1,54	1,60	1,65	1,75	1,84	1,94	2,02	2,09	2,17	2,23	2,30	2,36	2,42
е	17	0,76	0,82	0,86	0,91	0,96	1,00	1,05	1,09	1,14	1,18	1,22	1,25	1,32	1,39	1,46	1,52	1,57	1,63	1,67	1,71	1,75	1,79
р	18	0,53	0,56	0,59	0,63	0,65	0,69	0,72	0,74	0,77	0,80	0,82	0,85	0,90	0,95	0,99	1,02	1,06	1,09	1,13	1,16	1,18	1,20
а	19	0,28	0,30	0,31	0,33	0,35	0,36	0,38	0,39	0,41	0,42	0,43	0,43	0,46	0,48	0,50	0,52	0,54	0,55	0,57	0,58	0,59	0,60
т	20
у	21	0,28	0,29	0,31	0,33	0,34	0,36	0,37	0,39	0,40	0,41	0,43	0,44	0,46	0,48	0,51	0,54	0,56	0,57	0,58	0,59	0,60	0,60
р	22	0,55	0,58	0,61	0,64	0,67	0,70	0,73	0,76	0,78	0,81	0,84	0,87	0,93	0,97	1,02	1,06	1,09	1,12	1,15	1,17	1,19	1,19
а	23	0,85	0,90	0,95	0,99	1,04	1,08	1,12	1,16	1,21	1,25	1,29	1,32	1,39	1,46	1,52	1,58	1,62	1,68	1,72	1,75	1,77	1,79
	24	1,15	1,19	1,25	1,31	1,37	1,43	1,48	1,54	1,60	1,65	1,71	1,76	1,86	1,95	2,04	2,11	2,17	2,23	2,29	2,33	2,35	2,37
в	25	1,44	1,52	1,59	1,67	1,74	1,81	1,88	1,95	2,02	2,09	2,16	2,22	2,34	2,45	2,55	2,64	2,74	2,81	2,87	2,90	2,92	2,96
	26	1,76	1,84	1,93	2,02	2,10	2,18	2,25	2,33	2,41	2,49	2,56	2,64	2,78	2,91	3,03	3,15	3,26	3,37	3,47	3,55	3,62	3,60
°C	27	2,07	2,16	2,26	2,36	2,46	2,56	2,65	2,74	2,83	2,91	3,00	3,07	3,24	3,39	3,55	3,69	3,82	3,94	4,04	4,14	4,23	4,30
	28	2,39	2,51	2,63	2,74	2,85	2,96	3,06	3,16	3,28	3,38	3,48	3,57	3,75	3,92	4,08	4,23	4,37	4,51	4,62	4,73	4,80	4,86
	29	2,74	2,86	2,97	3,09	3,22	3,34	3,46	3,57	3,69	3,80	3,90	4,00	4,20	4,39	4,58	4,74	4,90	5,05	5,19	5,31	5,40	5,48
	30	3,06	3,21	3,35	3,50	3,63	3,77	3,91	4,02	4,15	4,28	4,40	4,52	4,75	4,96	5,16	5,35	5,52	5,67	5,79	5,91	5,99	6,04

Забележка. Тази таблица може да се използва за преизчисляване на относителната плътност d'₂₀ в d₂₀²⁰.

Таблица VII

Температурна корекция (с) на плътността на вина с остатъчна захар, с алкохолно съдържание 13 или повече об. %,

измерена с пикнометър или ареометър от обикновено стъкло при t°С, за да се отнесе резултатът към 20°C

r₂₀ = r_t ± c/1000,

- изважда се, ако t°C e по-ниска от 20°С

- добавя се, ако t°C е по-висока от 20°С.

		Алкохол 13 об. %	Алкохол 15 об. %	Алкохол 17 об. %
		плътност	плътност	плътност

		1,000	1,020	1,040	1,060	1,080	1,100	1,120	1,000	1,020	1,040	1,060	1,080	1,100	1,120	1,000	1,020	1,040	1,060	1,080	1,100	1,120
	10	2,24	2,58	2,93	3,27	3,59	3,89	4,18	2,51	2,85	3,20	3,54	3,85	4,02	4,46	2,81	3,15	3,50	3,84	4,15	4,45	4,74
	11	2,06	2,37	2,69	2,97	3,26	3,53	3,78	2,31	2,61	2,93	3,21	3,51	3,64	4,02	2,57	2,89	3,20	3,49	3,77	4,03	4,28
	12	1,87	2,14	2,42	2,67	2,94	3,17	3,40	2,09	2,36	2,64	2,90	3,16	3,27	3,61	2,32	2,60	2,87	3,13	3,39	3,63	3,84
Т	13	1,69	1,93	2,14	2,37	2,59	2,80	3,00	1,88	2,12	2,34	2,56	2,78	2,88	3,19	2,09	2,33	2,55	2,77	2,98	3,19	3,39
е	14	1,49	1,70	1,90	2,09	2,27	2,44	2,61	1,67	1,86	2,06	2,25	2,45	2,51	2,77	1,83	2,03	2,23	2,42	2,61	2,77	2,94
м	15	1,25	1,42	1,59	1,75	1,90	2,05	2,19	1,39	1,56	1,72	1,88	2,03	2,11	2,32	1,54	1,71	1,87	2,03	2,18	2,32	2,47
п	16	1,03	1,17	1,30	1,43	1,55	1,67	1,78	1,06	1,27	1,40	1,53	1,65	1,77	1,88	1,25	1,39	1,52	1,65	1,77	1,89	2,00
е	17	0,80	0,90	1,00	1,09	1,17	1,27	1,36	0,87	0,98	1,08	1,17	1,26	1,35	1,44	0,96	1,06	1,16	1,26	1,35	1,44	1,52
р	18	0,54	0,61	0,68	0,75	0,81	0,86	0,92	0,60	0,66	0,73	0,80	0,85	0,91	0,97	0,66	0,72	0,79	0,86	0,92	0,97	1,03
а	19	0,29	0,33	0,36	0,39	0,42	0,45	0,48	0,32	0,36	0,39	0,42	0,45	0,48	0,51	0,35	0,38	0,41	0,45	0,48	0,51	0,53
т	20
у	21	0,29	0,32	0,35	0,39	0,42	0,45	0,47	0,32	0,35	0,38	0,42	0,45	0,48	0,50	0,34	0,38	0,41	0,44	0,47	0,50	0,53
р	22	0,57	0,64	0,70	0,76	0,82	0,88	0,93	0,63	0,69	0,75	0,81	0,87	0,93	0,98	0,68	0,75	0,81	0,87	0,93	0,99	1,04
а	23	0,89	0,98	1,08	1,17	1,26	1,34	1,43	0,97	1,06	1,16	1,25	1,34	1,42	1,51	1,06	1,15	1,25	1,34	1,42	1,51	1,59
	24	1,22	1,34	1,44	1,56	1,68	1,79	1,90	1,32	1,44	1,54	1,66	1,78	1,89	2,00	1,43	1,56	1,65	1,77	1,89	2,00	2,11
в	25	1,61	1,68	1,83	1,98	2,12	2,26	2,40	1,66	1,81	1,96	2,11	2,25	2,39	2,52	1,80	1,94	2,09	2,24	2,39	2,52	2,66
	26	1,87	2,05	2,22	2,40	2,56	2,71	2,87	2,02	2,20	2,37	2,54	2,70	2,85	3,01	2,18	2,36	2,53	2,71	2,86	3,02	3,17
°C	27	2,21	2,42	2,60	2,80	3,00	3,18	3,35	2,39	2,59	2,78	2,98	3,17	3,35	3,52	2,58	2,78	2,97	3,17	3,36	3,54	3,71
	28	2,56	2,80	3,02	3,25	3,47	3,67	3,89	2,75	2,89	3,22	3,44	3,66	3,86	4,07	2,97	3,21	3,44	3,66	3,88	4,09	4,30
	29	2,93	3,19	3,43	3,66	3,91	4,14	4,37	3,16	3,41	3,65	3,89	4,13	4,36	4,59	3,40	3,66	3,89	4,13	4,38	4,61	4,82
	30	3,31	3,57	3,86	4,15	4,41	4,66	4,92	3,55	3,81	4,10	4,38	4,66	4,90	5,16	3,82	4,08	4,37	4,65	4,93	5,17	5,42

		Алкохол 19 об. %	Алкохол 21 об. %
		плътност	плътност

		1,000	1,020	1,040	1,060	1,080	1,100	1,120	1,000	1,020	1,040	1,060	1,080	1,100	1,120
	10	3,14	3,48	3,83	4,17	4,48	4,78	5,07	3,50	3,84	4,19	4,52	4,83	5,12	5,41
Т	11	2,87	3,18	3,49	3,78	4,06	4,32	4,57	3,18	3,49	3,80	4,09	4,34	4,63	4,88
е	12	2,58	2,86	3,13	3,39	3,65	3,88	4,10	2,86	3,13	3,41	3,67	3,92	4,15	4,37
м	13	2,31	2,55	2,77	2,99	3,20	3,41	3,61	2,56	2,79	3,01	3,23	3,44	3,65	3,85
п	14	2,03	2,23	2,43	2,61	2,80	2,96	3,13	2,23	2,43	2,63	2,81	3,00	3,16	3,33
е	15	1,69	1,86	2,02	2,18	2,33	2,48	2,62	1,86	2,03	2,19	2,35	2,50	2,65	2,80
р	16	1,38	1,52	1,65	1,78	1,90	2,02	2,13	1,51	1,65	1,78	1,91	2,03	2,15	2,26
а	17	1,06	1,16	1,26	1,35	1,44	1,53	1,62	1,15	1,25	1,35	1,45	1,54	1,63	1,71
т	18	0,73	0,79	0,85	0,92	0,98	1,03	1,09	0,79	0,85	0,92	0,98	1,05	1,10	1,15
у	19	0,38	0,41	0,44	0,48	0,51	0,52	0,56	0,41	0,44	0,47	0,51	0,54	0,57	0,59
р	20
а	21	0,37	0,41	0,44	0,47	0,50	0,53	0,56	0,41	0,44	0,47	0,51	0,54	0,57	0,59
	22	0,75	0,81	0,87	0,93	0,99	1,04	1,10	0,81	0,88	0,94	1,00	1,06	1,10	1,17
в	23	1,15	1,30	1,34	1,43	1,51	1,60	1,68	1,25	1,34	1,44	1,63	1,61	1,70	1,78
	24	1,55	1,67	1,77	1,89	2,00	2,11	2,23	1,68	1,80	1,90	2,02	2,13	2,25	2,36
°С	25	1,95	2,09	2,24	2,39	2,53	2,67	2,71	2,11	2,25	2,40	2,55	2,69	2,83	2,97
	26	2,36	2,54	2,71	2,89	3,04	3,20	3,35	2,55	2,73	2,90	3,07	3,22	3,38	3,54
	27	2,79	2,99	3,18	3,38	3,57	3,75	3,92	3,01	3,20	3,40	3,59	3,78	3,96	4,13
	28	3,20	3,44	3,66	3,89	4,11	4,32	4,53	3,46	3,69	3,93	4,15	4,36	4,58	4,77
	29	3,66	3,92	4,15	4,40	4,64	4,87	5,08	3,95	4,20	4,43	4,68	4,92	5,15	5,36
	30	4,11	4,37	4,66	4,94	5,22	5,46	5,71	4,42	4,68	4,97	5,25	5,53	5,77	6,02

2. Определяне захарното съдържание на мъст, концентрирана мъст и концентрирана и ректифицирана гроздова мъст с рефрактометър

1. Принцип на метода

Коефициентът на пречупване при 20°C, изразен като абсолютна стойност или като процент по отношение на масата на захарозата, е даден в съответната таблица с цел да може да бъде определена концентрацията на захарта в грамове на литър и в грамове на килограм за мъст, концентрирана и концентрирана и ректифицирана гроздова мъст.

2. Апаратура

2.1. Рефрактометър на ABBE

Използваният рефрактометър трябва да има скала, по която да се отчитат:

• процентът по отношение на масата на захарозата за 0,1%, или

• коефициентите на пречупване с точност до четвъртия десетичен знак.

Рефрактометърът трябва да е снабден с термометър, чиято скала трябва да обхваща поне интервала от +15°C до +25°C, както и с приспособление за циркулираща вода, което да дава възможност да се правят измервания при температура 20 ± 5°C.

Трябва строго да се спазва инструкцията за работа с този апарат, особено по отношение на калибровката и на светлинния източник.

3. Подготовка на пробата за анализ

3.1. Мъст и концентрирана мъст

Mъстта се прекарва през суха марля, прегъната на четири, и след като се изхвърлят първите капки на филтрата, определението се извършва върху филтрувания продукт.

3.2. Концентрирана ректифицирана мъст

В зависимост от концентрацията се използва или самата концентрирана ректифицирана мъст, или разтвор, получен чрез разреждане с вода на 200 g концентрирана ректифицирана мъст до 500 g, като всички измервания на теглото трябва да са точни.

4. Начин на работа

Температурата на пробата се довежда до около 20°C. Поставя се малка проба за анализ върху долната призма на рефрактометъра (тъй като призмите са притиснати плътно една към друга), така че да покрие равномерно повърхността на стъклото. Прави се измерването съгласно работните указания за използвания уред.

Отчита се процентът по отношение на масата на захарозата с точност до 0,1% или коефициентът на рефракция с точност до четвъртия десетичен знак.

Правят се поне две измервания на всяка подготвена проба. Отбелязва се температурата, t°C.

5. Изчисления

5.1. Температурна корекция

5.1.1. Уреди, градуирани в проценти по отношение на масата на захарозата - за температурна корекция се използва таблица I.

5.1.2. Уреди, градуирани в коефициент на пречупване - от таблица II се намира коефициентът, измерен при t°C, за да се получи (колона 1) съответната стойност на масовия процент на захарозата при t°C. Тази стойност се коригира в зависимост от температурата и се изразява като концентрация при 20°C с помощта на таблица I.

5.2. Концентрация на захари в мъст и в концентрирана мъст

От таблица II се определя процентът по отношение на масата на захарозата при 20°C и от същия ред се определя концентрацията на захарите в грамове на литър и в грамове на килограм. Концентрацията на захарите се изразява в инвертна захар с точност до първия десетичен знак.

5.3. Концентрация на захари в концентрирана ректифицирана мъст

От таблица III се определя процентът по отношение на масата на захарозата при 20°C и от същия ред се определя концентрацията на захарите в грамове на литър и в грамове на килограм. Концентрацията на захарите се изразява в инвертна захар с точност до първия десетичен знак.

Ако измерването е направено върху разредена концентрирана ректифицирана мъст, резултатът се умножава с коефициента на разреждане.

5.4. Коефициент на пречупване на мъст, концентрирана мъст и концентрирана ректифицирана мъст

От таблица II се определя масата на захарозата при 20°C и от същия ред се определя коефициентът на пречупване при 20°C. Този коефициент се изразява с точност до четвъртия десетичен знак.

Таблица I

Корекция, която следва да се направи в случаите, когато съдържанието на захарозата е определено при температура, различна от 20°C

Температура в°С

Захароза в g в 100 g от продукта

Изважда се

15	0,25	0,27	0,31	0,31	0,34	0,35	0,36	0,37	0,36	0,36
16	0,21	0,23	0,27	0,27	0,29	0,31	0,31	0,32	0,31	0,23
17	0,16	0,18	0,20	0,20	0,22	0,23	0,23	0,23	0,20	0,17
18	0,11	0,12	0,14	0,15	0,16	0,16	0,15	0,12	0,12	0,09
19	0,06	0,07	0,08	0,08	0,08	0,09	0,09	0,08	0,07	0,05

Добавя се

21	0,06	0,07	0,07	0,07	0,07	0,07	0,07	0,07	0,07	0,07
22	0,12	0,14	0,14	0,14	0,14	0,14	0,14	0,14	0,14	0,14
23	0,18	0,20	0,20	0,21	0,21	0,21	0,21	0,22	0,22	0,22
24	0,24	0,26	0,26	0,27	0,28	0,28	0,28	0,28	0,29	0,29
25	0,30	0,32	0,32	0,34	0,36	0,36	0,36	0,36	0,36	0,37

Варирането на температура спрямо 20°C не трябва да превишава ± 5°C.

Таблица II

Съдържание на захари ⁽¹⁾ в мъст и концентрирана мъст в грамове на литър и грамове за килограм, определени с рефрактометър, разграфен в масови % захароза, при 20°C или в индекс на рефракция, при 20°C. Плътността е определена при 20°C

Захароза,	Индекс	Плътност,	Захари,	Захари,	Алкохол,
в %	на рефрак-	при 20° C	в g/l	в g/kg	в об. %
(m/m)	ция, при				при
	20°C				20°C
1	2	3	4	5	6
10.0	1.34781	1.0390	82.3	79.2	4,89
10.1	1.34798	1.0394	83.4	80.2	4,95
10.2	1.34814	1.0398	84.5	81.3	5,02
10.3	1.34830	1.0402	85.6	82.2	5,09
10.4	1.34845	1.0406	86.6	83.2	5,14
10.5	1.34860	1.0410	87.6	84.1	5,20
10.6	1.34875	1.0414	88.6	85.1	5,26
10.7	1.34890	1.0419	89.7	86.1	5,33
10.8	1.34906	1.0423	90.8	87.1	5,39
10.9	1.34921	1.0427	91.8	88.1	5,45
11.0	1.34936	1.0431	92.9	89.1	5,52
11.1	1.34952	1.0435	94.0	90.0	5,58
11.2	1.34968	1.0439	95.0	91.0	5,64
11.3	1.34984	1.0443	96.1	92.0	5,71
11.4	1.34999	1.0447	97.1	92.9	5,77
11.5	1.35015	1.0452	98.2	94.0	5,83
11.6	1.35031	1.0456	99.3	95.0	5,90
11.7	1.35046	1.0460	100.3	95.9	5,96
11.8	1.35062	1.0464	101.4	96.9	6,02
11.9	1.35077	1.0468	102.5	97.9	6,09
12.0	1.35092	1.0473	103.6	98.9	6,15
12.1	1.35108	1.0477	104.7	99.9	6,22
12.2	1.35124	1.0481	105.7	100.8	6,28
12.3	1.35140	1.0485	106.8	101.9	6,35
12.4	1.35156	1.0489	107.9	102.9	6,41
12.5	1.35172	1.0494	109.0	103.8	6,47
12.6	1.35187	1.0498	110.0	104.8	6,53
12.7	1.35203	1.0502	111.1	105.8	6,60
12.8	1.35219	1.0506	112.2	106.8	6,66
12.9	1.35234	1.0510	113.2	107.8	6,73
13.0	1.35249	1.0514	114.3	108.7	6,79
13.1	1.35266	1.0519	115.4	109.7	6,86
13.2	1.35282	1.0523	116.5	110.7	6,92
13.3	1.35298	1.0527	117.6	111.7	6,99
13.4	1.35313	1.0531	118.6	112.6	7,05
13.5	1.35329	1.0536	119.7	113.6	7,11
13.6	1.35345	1.0540	120.8	114.6	7,18
13.7	1.35360	1.0544	121.8	115.6	7,24
13.8	1.35376	1.0548	122.9	116.5	7,30
13.9	1.35391	1.0552	124.0	117.5	7,37
14.0	1.35407	1.0557	125.1	118.5	7,43
14.1	1.35424	1.0561	126.2	119.5	7,50
14.2	1.35440	1.0565	127.3	120.5	7,56
14.3	1.35456	1.0569	128.4	121.5	7,63
14.4	1.35472	1.0574	129.5	122.5	7,69
14.5	1.35488	1.0578	130.6	123.4	7,76
14.6	1.35503	1.0582	131.6	124.4	7,82
14.7	1.35519	1.0586	132.7	125.4	7,88
14.8	1.35535	1.0591	133.8	126.3	7,95
14.9	1.35551	1.0595	134.9	127.3	8,01
15.0	1.35567	1.0599	136.0	128.3	8,08
15.1	1.35583	1.0603	137.1	129.3	8,15
15.2	1.35599	1.0608	138.2	130.3	8,21
15.3	1.35615	1.0612	139.3	131.3	8,27
15.4	1.35631	1.0616	140.4	132.3	8,34
15.5	1.35648	1.0621	141.5	133.2	8,41
15.6	1.35664	1.0625	142.6	134.2	8,47
15.7	1.35680	1.0629	143.7	135.2	8,54
15.8	1.35696	1.0633	144.8	136.2	8,60
15.9	1.35712	1.0638	145.9	137.2	8,67
16.0	1.35728	1.0642	147.0	138.1	8,73
16.1	1.35744	1.0646	148.1	139.1	8,80
16.2	1.35760	1.0651	149.2	140.1	8,86
16.3	1.35776	1.0655	150.3	141.1	8,93
16.4	1.35793	1.0660	151.5	142.1	9,00
16.5	1.35809	1.0664	152.6	143.1	9,06
16.6	1.35825	1.0668	153.7	144.1	9,13
16.7	1.35842	1.0672	154.8	145.0	9,20
16.8	1.35858	1.0677	155.9	146.0	9,26
16.9	1.35874	1.0681	157.0	147.0	9,33
17.0	1.35890	1.0685	158.1	148.0	9.39
17.1	1.35907	1.0690	159.3	149.0	9,46
17.2	1.35923	1.0694	160.4	150.0	9,53
17.3	1.35939	1.0699	161.5	151.0	9,59
17.4	1.35955	1.0703	162.6	151.9	9,66
17.5	1.35972	1.0707	163.7	152.9	9,73
17.6	1.35988	1.0711	164.8	153.9	9,79
17.7	1.36004	1.0716	165.9	154.8	9,86
17.8	1.36020	1.0720	167.0	155.8	9,92
17.9	1.36036	1.0724	168.1	156.8	9,99
18.0	1.36053	1.0729	169.3	157.8	10,06
18.1	1.36070	1.0733	170.4	158.8	10,12
18.2	1.36086	1.0738	171.5	159.7	10,19
18.3	1.36102	1.0742	172.6	160.7	10,25
18.4	1.36119	1.0746	173.7	161.6	10,32
18.5	1.36136	1.0751	174.9	162.6	10,39
18.6	1.36152	1.0755	176.0	163.6	10,46
18.7	1.36169	1.0760	177.2	164.6	10,53
18.8	1.36185	1.0764	178.3	165.6	10,59
18.9	1.36201	1.0768	179.4	166.6	10,66
19.0	1.36217	1.0773	180.5	167.6	10,72
19.1	1.36234	1.0777	181.7	168.6	10,80
19.2	1.36251	1.0782	182.8	169.5	10,86
19.3	1.36267	1.0786	183.9	170.5	10,93
19.4	1.36284	1.0791	185.1	171.5	11,00
19.5	1.36301	1.0795	186.3	172.5	11,07
19.6	1.36318	1.0800	187.4	173.5	11,13
19.7	1.36335	1.0804	188.6	174.5	11,21
19.8	1.36351	1.0809	189.7	175.5	11,27
19.9	1.36367	1.0813	190.8	176.5	11,34
20.0	1.36383	1.0817	191.9	177.4	11,40
20.1	1.36400	1.0822	193.1	178.4	11,47
20.2	1.36417	1.0826	194.2	179.4	11,54
20.3	1.36434	1.0831	195.3	180.4	11,60
20.4	1.36451	1.0835	196.5	181.4	11,67
20.5	1.36468	1.0840	197.7	182.3	11,75
20.6	1.36484	1.0844	198.8	183.3	11,81
20.7	1.36501	1.0849	200.0	184.3	11,88
20.8	1.36518	1.0853	201.1	185.3	11,96
20.9	1.36534	1.0857	202.2	186.2	12,01
21.0	1.36550	1.0862	203.3	187.2	12,08
21.1	1.36568	1.0866	204.5	188.2	12,15
21.2	1.36585	1.0871	205.7	189.2	12,22
21.3	1.36601	1.0875	206.8	190.2	12,29
21.4	1.36618	1.0880	207.9	191.1	12,35
21.5	1.36635	1.0884	209.1	192.1	12,42
21.6	1.36652	1.0889	210.3	193.1	12,49
21.7	1.36669	1.0893	211.4	194.1	12,56
21.8	1.36685	1.0897	212.5	195.0	12,63
21.9	1.36702	1.0902	213.6	196.0	12,69
22.0	1.36719	1.0906	214.8	196.9	12,76
22.1	1.36736	1.0911	216.0	198.0	12,83
22.2	1.36753	1.0916	217.2	199.0	12,90
22.3	1.36770	1.0920	218.3	199.9	12,97
22.4	1.36787	1.0925	219.5	200.9	13,04
22.5	1.36804	1.0929	220.6	201.8	13,11
22.6	1.36820	1.0933	221.7	202.8	13,17
22.7	1.36837	1.0938	222.9	203.8	13,24
22.8	1.36854	1.0943	224.1	204.8	13,31
22.9	1.36871	1.0947	225.2	205.8	13,38
23.0	1.36888	1.0952	226.4	206.7	13,45
23.1	1.36905	1.0956	227.6	207.7	13,52
23.2	1.36922	1.0961	228.7	208.7	13,59
23.3	1.36939	1.0965	229.9	209.7	13,66
23.4	1.36956	1.0970	231.1	210.7	13,73
23.5	1.36973	1.0975	232.3	211.6	13,80
23.6	1.36991	1.0975	233.4	212.6	13,87
23.7	1.37008	1.0984	234.6	213.6	13,94
23.8	1.37025	1.0988	235.8	214.6	14,01
23.9	1.37042	1.0993	237.0	215.6	14,08
24.0	1.37059	1.0998	238.2	216.6	14,15
24.1	1.37076	1.1007	239.3	217.4	14,22
24.2	1.37093	1.1011	240.3	218.2	14,28
24.3	1.37110	1.1016	241.5	219.4	14,35
24.4	1.37128	1.1022	243.0	219.5	14,44
24.5	1.37145	1.1026	244.0	221.3	14,50
24.6	1.37162	1.1030	245.0	222.1	14,56
24.7	1.37180	1.1035	246.4	223.2	14,64
24.8	1.37197	1.1041	247.7	224.4	14,72
24.9	1.37214	1.1045	248.7	225.2	14,78
25.0	1.37232	1.1049	249.7	226.0	14,84
25.1	1.37249	1.1053	250.7	226.8	14,90
25.2	1.37266	1.1057	251.7	227.6	14,96
25.3	1.37283	1.1062	253.0	228.7	15,03
25.4	1.37300	1.1068	254.4	229.9	15,11
25.5	1.37317	1.1072	255.4	230.7	15,17
25.6	1.37335	1.1076	256.4	231.5	15,23
25.7	1.37353	1.1081	257.8	232.6	15,32
25.8	1.37370	1.1087	259.1	233.7	15,39
25.9	1.37387	1.1091	260.1	234.5	15,45
26.0	1.37405	1.1095	261.1	235.3	15,51
26.1	1.37423	1.1100	262.5	236.4	15,60
26.2	1.37440	1.1106	263.8	237.5	15,67
26.3	1.37457	1.1110	264.8	238.3	15,73
26.4	1.37475	1.1114	265.8	239.2	15,79
26.5	1.37493	1.1119	267.2	240.3	15,88
26.6	1.37510	1.1125	268.5	241.4	15,95
26.7	1.37528	1.1129	269.5	242.2	16,01
26.8	1.37545	1.1133	270.5	243.0	16,07
26.9	1.37562	1.1138	271.8	244.1	16,15
27.0	1.37580	1.1144	273.2	245.2	16,23
27.1	1.37598	1.1148	274.2	246.0	16,29
27.2	1.37615	1.1152	275.2	246.8	16,35
27.3	1.37632	1.1157	276.5	247.9	16,43
27.4	1.37650	1.1163	277.9	249.0	16,51
27.5	1.37667	1.1167	278.9	249.8	16,57
27.6	1.37685	1.1171	279.9	250.6	16,63
27.7	1.37703	1.1176	281.3	251.6	16,71
27.8	1.37721	1.1182	282.6	252.7	16,79
27.9	1.37739	1.1186	283.6	253.5	16,85
28.0	1.37757	1.1190	284.6	254.3	16,91
28.1	1.37775	1.1195	286.0	255.4	16,99
28.2	1.37793	1.1201	287.3	256.5	17,07
28.3	1.37810	1.1205	288.3	257.3	17,13
28.4	1.37828	1.1209	289.3	258.1	17,19
28.5	1.37846	1.1214	290.7	259.2	17,27
28.6	1.37863	1.1220	292.0	260.3	17,35
28.7	1.37881	1.1224	293.0	261.0	17,41
28.8	1.37899	1.1228	294.0	261.8	17,47
28.9	1.37917	1.1233	295.3	262.9	17,55
29.0	1.37935	1.1239	296.7	264.0	17,63
29.1	1.37953	1.1244	298.1	265.1	17,71
29.2	1.37971	1.1250	299.4	266.1	17,79
29.3	1.37988	1.1254	300.4	266.9	17,85
29.4	1.38006	1.1258	301.4	267.7	17,91
29.5	1.38024	1.1263	302.8	268.8	17,99
29.6	1.38042	1.1269	304.1	269.9	18,07
29.7	1.38060	1.1273	305.1	270.6	18,13
29.8	1.38078	1.1277	306.1	271.4	18,19
29.9	1.38096	1.1282	307.4	272.5	18,26
30.0	1.38114	1.1288	308.8	273.6	18,35
30.1	1.38132	1.1293	310.0	274.5	18,42
30.2	1.38150	1.1298	311.2	275.5	18,49
30.3	1.38168	1.1302	312.4	276.4	18,56
30.4	1.38186	1.1307	313.6	277.3	18,63
30.5	1.38204	1.1312	314.8	278.3	18,70
30.6	1.38222	1.1317	316.0	279.2	18,77
30.7	1.38240	1.1322	317.2	280.2	18,85
30.8	1.38258	1.1327	318.4	281.1	18,92
30.9	1.38276	1.1332	319.6	282.0	18,99
31.0	1.38294	1.1336	320.8	283.0	19,06
31.1	1.38312	1.1341	322.0	283.9	19,13
31.2	1.38330	1.1346	323.2	284.9	19,20
31.3	1.38349	1.1351	324.4	285.8	19,27
31.4	1.38367	1.1356	325.6	286.8	19,35
31.5	1.38385	1.1361	326.8	287.7	19,42
31.6	1.38403	1.1366	328.1	288.6	19,49
31.7	1.38421	1.1371	329.3	289.6	19,56
31.8	1.38440	1.1376	330.5	290.5	19,64
31.9	1.38458	1.1380	331.7	291.5	19,71
32.0	1.38476	1.1385	332.9	292.4	19,78
32.1	1.38494	1.1391	334.2	293.4	19,86
32.2	1.38513	1.1396	335.5	294.4	19,93
32.3	1.38531	1.1401	336.7	295.4	20,00
32.4	1.38550	1.1406	338.0	296.4	20,08
32.5	1.38568	1.1411	339.3	297.3	20,16
32.6	1.38586	1.1416	340.6	298.3	20,24
32.7	1.38605	1.1422	341.9	299.3	20,31
32.8	1.38623	1.1427	343.1	300.3	20,38
32.9	1.38642	1.1432	344.4	301.3	20,46
33.0	1.38660	1.1437	345.7	302.3	20,54
33.1	1.38678	1.1442	346.9	303.2	20,61
33.2	1.38697	1.1447	348.1	304.1	20,68
33.3	1.38715	1.1452	349.3	305.0	20,75
33.4	1.38734	1.1457	350.5	305.9	20,82
33.5	1.38753	1.1461	351.7	306.9	20,90
33.6	1.38771	1.1466	352.9	307.8	20,97
33.7	1.38790	1.1471	354.1	308.7	21,04
33.8	1.38808	1.1476	355.3	309.6	21,11
33.9	1.38827	1.1481	356.5	310.5	21,18
34.0	1.38845	1.1486	357.7	311.4	21,25
34.1	1.38864	1.1491	359.0	312.4	21,33
34.2	1.38882	1.1496	360.3	313.4	21,41
34.3	1.38901	1.1501	361.5	314.3	21,48
34.4	1.38919	1.1506	362.8	315.3	21,55
34.5	1.38938	1.1512	364.1	316.3	21,63
34.6	1.38957	1.1517	365.4	317.3	21,71
34.7	1.38975	1.1522	366.7	318.2	21,79
34.8	1.38994	1.1527	367.9	319.2	21,86
34.9	1.39012	1.1532	369.2	320.2	21,94
35.0	1.39031	1.1537	370.5	321.1	22,01
35.1	1.39050	1.1543	371.8	322.1	22,09
35.2	1.39069	1.1548	373.0	323.0	22,16
35.3	1.39087	1.1553	374.3	324.0	22,24
35.4	1.39106	1.1558	375.6	325.0	22,32
35.5	1.39125	1.1563	376.9	325.9	22,39
35.6	1.39144	1.1568	378.1	326.9	22,45
35.7	1.39163	1.1573	379.4	327.8	22,54
35.8	1.39181	1.1579	380.7	328.8	22,62
35.9	1.39200	1.1584	381.9	329.7	22,69
36.0	1.39219	1.1589	383.2	330.7	22,77
36.1	1.39238	1.1594	384.5	331.6	22,85
36.2	1.39257	1.1599	385.8	332.6	22,92
36.3	1.39276	1.1604	387.0	333.5	22,99
36.4	1.39295	1.1610	388.3	334.5	23,07
36.5	1.39314	1.1615	389.6	335.4	23,15
36.6	1.39332	1.1620	390.9	336.4	23,22
36.7	1.39351	1.1625	392.2	337.3	23,30
36.8	1.39370	1.1630	393.4	338.3	23,37
36.9	1.39389	1.1635	394.7	339.2	23,45
37.0	1.39408	1.1641	396.0	340.2	23,53
37.1	1.39427	1.1646	397.3	341.1	23,60
37.2	1.39446	1.1651	398.6	342.1	23,68
37.3	1.39465	1.1656	399.8	343.0	23,75
37.4	1.39484	1.1661	401.1	344.0	23,83
37.5	1.39504	1.1666	402.4	344.9	23,91
37.6	1.39523	1.1672	403.7	345.9	23,99
37.7	1.39542	1.1677	405.0	346.8	24,06
37.8	1.39561	1.1682	406.2	347.7	24,13
37.9	1.39580	1.1687	407.5	348.7	24,21
38.0	1.39599	1.1692	408.8	349.6	24,29
38.1	1.39618	1.1698	410.1	350.6	24,37
38.2	1.39637	1.1703	411.3	351.5	24,44
38.3	1.39657	1.1708	412.6	352.4	24,51
38.4	1.39676	1.1713	413.9	353.4	24,59
38.5	1.39695	1.1718	415.2	354.3	24,67
38.6	1.39714	1.1723	416.4	355.2	24,74
38.7	1.39733	1.1728	417.7	356.1	24,82
38.8	1.39753	1.1733	419.0	357.1	24,90
38.9	1.39772	1.1739	420.2	358.0	24,97
39.0	1.39791	1.1744	421.5	358.9	25,04
39.1	1.39810	1.1749	422.8	359.8	25,12
39.2	1.39830	1.1754	424.1	360.8	25,20
39.3	1.39849	1.1759	425.3	361.7	25,27
39.4	1.39869	1.1764	426.6	362.6	25,35
39.5	1.39888	1.1770	427.9	363.6	25,42
39.6	1.39907	1.1775	429.2	364.5	25,50
39.7	1.39927	1.1780	430.5	365.4	25,58
39.8	1.39946	1.1785	431.7	366.3	25,65
39.9	1.39966	1.1790	433.0	367.3	25,73
40.0	1.39985	1.1796	434.3	368.2	25,80
40.1	1.40004	1.1801	435.6	369.2	25,88
40.2	1.40024	1.1806	437.0	370.1	25,96
40.3	1.40043	1.1812	438.3	371.1	26,04
40.4	1.40063	1.1817	439.7	372.1	26,12
40.5	1.40083	1.1823	441.0	373.0	26,20
40.6	1.40102	1.1828	442.3	374.0	26,28
40.7	1.40122	1.1833	443.7	374.9	26,36
40.8	1.40141	1.1839	445.0	375.9	26,44
40.9	1.40161	1.1844	446.4	376.9	26,52
41.0	1.40180	1.1850	447.7	377.8	26,60
41.1	1.40200	1.1855	449.0	378.7	26,68
41.2	1.40219	1.1860	450.2	379.6	26,75
41.3	1.40239	1.1865	451.5	380.5	26,83
41.4	1.40259	1.1870	452.8	381.4	26,90
41.5	1.40279	1.1875	454.1	382.3	26,98
41.6	1.40298	1.1881	455.3	383.2	27,05
41.7	1.40318	1.1886	456.6	384.2	27,13
41.8	1.40338	1.1891	457.9	385.1	27,21
41.9	1.40357	1.1896	459.1	386.0	27,28
42.0	1.40377	1.1901	460.4	386.9	27,35
42.1	1.40397	1.1907	461.7	387.8	27,43
42.2	1.40417	1.1912	463.1	388.8	27,52
42.3	1.40436	1.1917	464.4	389.7	27,59
42.4	1.40456	1.1923	465.8	390.7	27,68
42.5	1.40476	1.1928	467.2	391.6	27,76
42.6	1.40496	1.1934	468.5	392.6	27,84
42.7	1.40516	1.1939	469.9	393.5	27,92
42.8	1.40535	1.1945	471.2	394.5	28,00
42.9	1.40555	1.1950	472.6	395.4	28,08
43.0	1.40575	1.1956	473.9	396.4	28,16
43.1	1.40595	1.1961	475.2	397.3	28,23
43.2	1.40615	1.1967	476.6	398.3	28,32
43.3	1.40635	1.1972	477.9	399.2	28,40
43.4	1.40655	1.1977	479.3	400.1	28,48
43.5	1.40675	1.1983	480.6	401.1	28,56
43.6	1.40695	1.1988	481.9	402.0	28,63
43.7	1.40715	1.1994	483.3	402.9	28,72
43.8	1.40735	1.1999	484.6	403.9	28,79
43.9	1.40755	1.2005	486.0	404.8	28,88
44.0	1.40775	1.2010	487.3	405.7	28,95
44.1	1.40795	1.2015	488.6	406.7	29,03
44.2	1.40815	1.2021	490.0	407.6	29,11
44.3	1.40836	1.2026	491.3	408.5	29,19
44.4	1.40856	1.2032	492.7	409.5	29,27
44.5	1.40876	1.2037	494.0	410.4	29,35
44.6	1.40896	1.2042	495.3	411.3	29,43
44.7	1.40916	1.2048	496.7	412.3	29,51
44.8	1.40937	1.2053	498.0	413.2	29,59
44.9	1.40957	1.2059	499.4	414.1	29,67
45.0	1.40977	1.2064	500.7	415.0	29,75
45.1	1.40997	1.2070	502.1	416.0	29,83
45.2	1.41018	1.2076	503.5	417.0	29,92
45.3	1.41038	1.2081	504.9	417.9	30,00
45.4	1.41058	1.2087	506.3	418.9	30,08
45.5	1.41079	1.2093	507.8	419.9	30,17
45.6	1.41099	1.2098	509.2	420.9	30,25
45.7	1.41119	1.2104	510.6	421.8	30,34
45.8	1.41139	1.2110	512.0	422.8	30,42
45.9	1.41160	1.2115	513.4	423.7	30,50
46.0	1.41180	1.2121	514.8	424.7	30,59
46.1	1.41200	1.2127	516.1	425.6	30,66
46.2	1.41221	1.2132	517.5	426.5	30,75
46.3	1.41241	1.2137	518.8	427.5	30,82
46.4	1.41262	1.2143	520.2	428.4	30,91
46.5	1.41282	1.2148	521.5	429.3	30,99
46.6	1.41302	1.2154	522.8	430.2	31,06
46.7	1.41323	1.2159	524.2	431.1	31,15
46.8	1.41343	1.2165	525.5	432.0	31,22
46.9	1.41364	1.2170	526.9	432.9	31,31
47.0	1.41384	1.2175	528.2	433.8	31,38
47.1	1.41405	1.2181	529.6	434.8	31,47
47.2	1.41425	1.2187	531.0	435.7	31,55
47.3	1.41446	1.2192	532.4	436.7	31,63
47.4	1.41466	1.2198	533.8	437.6	31,72
47.5	1.41487	1.2204	535.3	438.6	31,81
47.6	1.41508	1.2210	536.7	439.5	31.89
47.7	1.41528	1.2215	538.1	440.5	31,97
47.8	1.41549	1.2221	539.5	441.4	32,05
47.9	1.41569	1.2227	540.9	442.4	32,14
48.0	1.41590	1.2232	542.3	443.3	32,22
48.1	1.41611	1.2238	543.6	444.2	32,30
48.2	1.41632	1.2243	545.0	445.1	32,38
48.3	1.41652	1.2249	546.3	446.0	32,46
48.4	1.41673	1.2254	547.7	446.9	32,59
48.5	1.41694	1.2260	549.1	447.8	32,63
48.6	1.41715	1.2265	550.4	448.7	32,70
48.7	1.41736	1.2271	551.8	449.7	32,79
48.8	1.41756	1.2276	553.1	450.6	32,86
48.9	1.41777	1.2282	554.5	451.4	32,95
49.0	1.41798	1.2287	555.8	452.3	33,02
49.1	1.41819	1.2293	557.2	453.3	33,11
49.2	1.41840	1.2298	558.6	454.2	33,19
49.3	1.41861	1.2304	560.0	455.1	33,27
49.4	1.41882	1.2310	561.4	456.1	33,36
49.5	1.41903	1.2315	562.8	457.0	33,44
49.6	1.41924	1.2321	564.2	457.9	33,52
49.7	1.41945	1.2327	565.6	458.8	33,61
49.8	1.41966	1.2332	567.0	459.8	33,69
49.9	1.41987	1.2338	568.4	460.7	33,77
50.0	1.42008	1.2344	569.8	461.6	33,86
50.1	1.42029	1.2349	571.2	462.5	11,94
50.2	1.42050	1.2355	572.6	463.5	34,02
50.3	1.42071	1.2361	574.0	464.4	34,10
50.4	1.42092	1.2366	575.4	465.1	14,19
50.5	1.42114	1.2372	576.9	466.2	34,28
50.6	1.42135	1.2378	578.3	467.2	34,36
50.7	1.42156	1.2384	579.7	468.1	34,44
50.8	1.42177	1.2389	581.1	469.0	34,53
50.9	1.42198	1.2395	582.5	469.9	34,61
51.0	1.42219	1.2401	583.9	470.9	34,69
51.1	1.42240	1.2407	585.4	471.8	34,78
51.2	1.42261	1.2413	586.9	472.8	34,87
51.3	1.42283	1.2419	588.3	473.8	34,95
51.4	1.42304	1.2425	589.8	474.7	35,04
51.5	1.42325	1.2431	591.3	475.7	35,13
51.6	1.42346	1.2437	592.8	476.6	35,22
51.7	1.42367	1.2443	594.3	4776	35,31
51.8	1.42389	1.2449	595.7	478.6	15,39
51.9	1.42410	1.2455	597.2	479.5	35,48
52.0	1.42431	1.2461	598.7	480.5	35,57
52.1	1.42452	1.2466	600.1	481.4	35,65
52.2	1.42474	1.2472	601.5	482.3	35,74
52.3	1.42495	1.2478	602.9	483.2	35,82
52.4	1.42517	1.2483	604.3	484.1	35,91
52.5	1.42538	1.2489	605.8	485.0	35,99
52.6	1.42559	1.2495	607.2	485.9	16,08
52.7	1.42581	1.2500	608.6	486.8	36,16
52.8	1.42602	1.2506	610.0	487.7	36,24
52.9	1.42624	1.2512	611.4	488.6	36,33
53.0	1.42645	1.2518	612.8	489.6	36,41
53.1	1.42666	1.2524	614.3	490.5	36,50
51 2	1.42686	1.2530	615.8	491.4	36,59
53.3	1.42707	1.2536	617.2	492.4	36,67
53.4	1.42727	1.2542	618.7	493.3	36,76
53.5	1.42748	1.2548	620.2	494.3	36,85
53.6	1.42769	1.2554	621.7	495.2	36,94
53.7	1.42789	1.2560	623.2	496.2	37,03
53.8	1.42810	1.2566	624.6	497.1	37,11
53.9	1.42830	1.2571	626.1	498.0	37,20
54.0	1.42851	1.2577	627.6	499.0	37,29
54.1	1.42874	1.2583	629.0	499.9	37,37
54 2	1.42897	1.2589	630.4	500.8	37,45
54.3	1.42919	1.2595	631.8	501.7	37,54
54.4	1.42942	1.2600	633.2	502.6	37,62
54.5	1.42965	1.2606	634.7	503.5	37,71
54.6	1.42988	1.2612	636.1	504.3	37,79
54.7	1.43011	1.2617	637.5	505.2	37,88
54.8	1.43033	1.2623	638.9	506.1	37,96
54.9	1.43056	1.2629	640.3	507.0	38,04
55.0	1.43079	1.2635	641.7	507.9	38,11
55.1	1.43101	1.2640	643.2	508.8	38,22
55.2	1.43123	1.2646	644.6	509.7	38,30
55.3	1.43145	1.2652	646.1	510.7	38,39
55.4	1.43167	1.2658	647.6	511.6	38,48
55.5	1.43189	1.2664	649.1	512.5	38,57
55.6	1.43210	1.2670	650.5	513.4	38,65
55.7	1.43232	1.2676	652.0	514.3	38,74
55.8	1.43254	1.2682	653.5	515.3	38,83
55.9	1.43276	1.2688	654.9	516.2	38,91
56.0	1.43298	1.2694	656.4	517.1	39,00
56.1	1.43320	1.2700	657.9	518.0	39,09
56.2	1.43342	1.2706	659.4	518.9	39,18
56.3	1.43364	1.2712	660.8	519.9	39,26
56.4	1.43386	1.2718	662.3	520.8	39,35
56.5	1.43409	1.2724	663.8	521.7	39,44
56.6	1.43431	1.2730	665.3	522.6	39,53
56.7	1.43453	1.2736	666.8	523.5	39,62
56.8	1.43475	1.2742	668.2	524.4	39,70
56.9	1.43497	1.2748	669.7	525.4	39,79
57.0	1.43519	1.2754	671.2	526.3	39,88
57.1	1.43541	1.2760	672.7	527.2	39,97
57.2	1.43563	1.2766	674.3	528.2	40,06
57.3	1.43586	1.2773	675.8	529.1	40,15
57.4	1.43608	1.2779	677.4	530.1	40,25
57.5	1.43630	1.2785	678.9	531.0	40,34
57.6	1.43652	1.2791	680.4	532.0	40,43
57.7	1.43674	1.2797	682.0	532.9	40,52
57.8	1.43697	1.2804	683.5	533.8	40,61
57.9	1.43719	1.2810	685.1	534.8	40,70
58.0	1.43741	1.2816	686.6	535.7	40,80
58.1	1.43763	1.2822	688.1	536.6	40,88
58.2	1.43786	1.2828	689.6	537.5	40,97
58.3	1.43808	1.2834	691.0	538.4	41,06
58.4	1.43831	1.2840	692.5	539.3	41,14
58.5	1.43854	1.2846	694.0	540.2	41,23
58.6	1.43876	1.2852	695.5	541.1	41,32
58.7	1.43899	1.2858	697.0	542.0	41,41
58.8	1.43921	1.2864	698.4	542.9	41,50
58.9	1.43944	1.2870	699.9	543.8	41,58
59.0	1.43966	1.2876	701.4	544.7	41,67
59.1	1.43989	1.2882	702.9	545.7	41,76
59.2	1.44011	1.2888	704.5	546.6	41,86
59.3	1.44034	1.2895	706.0	547.5	41,95
59.4	1.44056	1.2901	707.6	548.5	42,04
59.5	1.44079	1.2907	709.1	549.4	42,13
59.6	1.44102	1.2913	710.6	550.3	42,22
59.7	1.44124	1.2920	712.2	551.2	42,32
59.8	1.44147	1.2926	713.7	552.2	42,41
59 9	1.44169	1.2932	715.3	553.1	42,50
60.0	1.44192	1.2938	716.8	554.0	42,59
60.1	1.44215	1.2944	718.3	554.9	42,68
60.2	1.44237	1.2950	719.8	555.8	42,77
60.3	1.44260	1.2956	721.2	556.7	42,85
60.4	1.44283	1.2962	722.7	557.6	42,94
60.5	1.44306	1.2968	724.2	558.4	43,03
60.6	1.44328	1.2974	725.7	559.3	43,12
60.7	1.44351	1.2980	727.2	560.2	43,21
60.8	1.44374	1.2986	728.6	561.1	43,29
60.9	1.44396	1.2992	730.1	562.0	43,38
61.0	1.44419	1.2998	731.6	562.8	43,47
61.1	1.44442	1.3004	733.1	563.8	43,56
61.2	1.44465	1.3011	734.7	564.7	43,65
61.3	1.44488	1.3017	736.2	565.6	43,74
61.4	1.44511	1.3023	737.8	566.5	43,84
61.5	1.44533	1.3030	739.4	567.4	43,93
61.6	1.44556	1.3036	740.9	568.4	44,02
61.7	1.44579	1.3042	742.5	569.3	44,12
61.8	1.44602	1.3048	744.0	570.2	44,21
61.9	1.44625	1.3055	745.6	571.1	44,30
62.0	1.44648	1.3061	747.1	572.0	44,39
62.1	1.44671	1.3067	748.6	572.9	44,48
62.2	1.44694	1.3073	750.2	573.8	44,57
62.3	1.44717	1.3080	751.7	574.7	44,66
62.4	1.44740	1.3086	753.3	575.6	44,76
62.5	1.44764	1.3092	754.8	576.5	44,85
62.6	1.44787	1.3098	756.3	577.4	44,94
62.7	1.44810	1.3104	757.9	578.3	45,03
62.8	1.44833	1.3111	759.4	579.2	45,12
62.9	1.44856	1.3117	761.0	580.1	45,21
63.0	1.44879	1.3123	762.5	581.0	45,31
63.1	1.44902	1.3130	764.1	582.0	45,40
63.2	1.44926	1.3136	765.7	582.9	45,49
63.3	1.44949	1.3143	767.3	583.8	45,59
63.4	1.44972	1.3149	768.9	584.8	45,69
63.5	1.44996	1.3156	770.6	585.7	45,79
63.6	1.45019	1.3162	772.2	586.6	45,88
63.7	1.45042	1.3169	773.8	587.6	45,98
63.8	1.45065	1.3175	775.4	588.5	46,07
63.9	1.45089	1.3182	777.0	589.4	46,17
64.0	1.45112	1.3188	778.6	590.4	46,26
64.1	1.45135	1.3195	780.1	591.3	46,35
64.2	1.45159	1.3201	781.7	592.1	46,45
64.3	1.45183	1.3207	783.2	593.0	46,53
64.4	1.45206	1.3213	784.8	593.9	46,63
64.5	1.45230	1.3219	786.3	594.8	46,72
64.6	1.45253	1.3226	787.8	595.7	46,81
64.7	1.45276	1.3232	789.4	596.6	46,90
64.8	1.45300	1.3238	790.9	597.5	46,99
64.9	1.45324	1.3244	792.5	598.3	47,09
65.0	1.45347	1.3251	794.0	599.2	47,18
65.1	1.45371	1.3257	795.6	600.1	47,27
65.2	1.45394	1.3264	797.2	601.1	47,37
65.3	1.45418	1.3270	798.8	602.0	47,46
65.4	1.45441	1.3277	800.4	602.9	47,56
65.5	1.45465	1.3283	802.1	603.8	47,66
65.6	1.45489	1.3290	803.7	604.7	47,75
65.7	1.45512	1.3296	805.3	605.6	47,85
65.8	1.45536	1.3303	806.9	606.6	47,94
65.9	1.45559	1.3309	808.5	607.5	48,04
66.0	1.45583	1.3316	810.1	608.4	48,13
66.1	1.45607	1.3322	811.6	609.3	48,22
66.2	1.45630	1.3328	813.2	610.1	48,32
66.3	1.45654	1.3335	814.8	611.0	48,41
66.4	1.45678	1.3341	816.3	611.9	48,50
66.5	1.45702	1.3347	817.9	612.8	48,60
66.6	1.45725	1.3353	819.4	613.6	48,69
66.7	1.45749	1.3360	820.9	614.5	48,77
66.8	1.45773	1.3366	822.5	615.4	48,87
66.9	1.45796	1.3372	824.1	616.2	48,97
67.0	1.45820	1.3378	825.6	617.1	49,05
67.1	1.45844	1.3385	827.2	618.0	49,15
67.2	1.45868	1.3391	828.8	618.9	49,24
67.3	1.45892	1.3398	830.4	619.8	49,34
67.4	1.45916	1.3404	832.0	620.7	49,43
67.5	1.45940	1.3411	833.7	621.6	49,53
67.6	1.45964	1.3418	835.3	622.5	49,63
67.7	1.45988	1.3424	836.9	623.4	49,73
67.8	1.46012	1.3431	838.5	624.3	49,82
67.9	1.46036	1.3437	840.1	625.2	49,92
68.0	1.46060	1.3444	841.7	626.1	50,01
68.1	1.46084	1.3450	843.4	627.0	50,11
68.2	1.46108	1.3457	845.1	628.0	50,21
68.3	1.46132	1.3464	846.7	628.9	50,31
68.4	1.46156	1.3471	848.4	629.8	50,41
68.5	1.46181	1.3478	850.1	630.8	50,51
68.6	1.46205	1.3484	851.8	631.7	50,61
68.7	1.46229	1.3491	853.5	632.6	50,71
68.8	1.46253	1.3498	855.1	633.5	50,81
68.9	1.46277	1.3505	856.8	634.5	50,91
69.0	1.46301	1.3512	858.5	635.4	51,01
69.1	1.46325	1.3518	860.1	636.3	51,10
69.2	1.46350	1.3525	861.7	637.2	51,20
69.3	1.46374	1.3531	863.3	638.0	51,29
69.4	1.46398	1.3538	864.9	638.9	51,39
69.5	1.46423	1.3544	866.6	639.8	51,49
69.6	1.46447	1.3551	868.2	640.7	51,58
69.7	1.46471	1.3557	869.8	641.6	51,68
69.8	1.46495	1.3564	871.4	642.4	51,78
69.9	1.46520	1.3570	873.0	643.3	51,87
70.0	1.46544	1.3577	874.6	644.2	51,97
70.1	1.46568	1.3583	876.2	645.1	52,06
70.2	1.46593	1.3590	877.8	645.9	52,15
70.3	1.46618	1.3596	879.4	646.8	52,25
70.4	1.46642	1.3603	881.0	647.7	52,35
70.5	1.46667	1.3609	882.7	648.6	52,45
70.6	1.46691	1.3616	884.3	649.4	52,54
70.7	1.46715	1.2622	885.9	650.3	52,64
70.8	1.46740	1.3629	887.5	651.2	52,73
70.9	1.46765	1.3635	889.1	652.1	52,83
71.0	1.46789	1.3642	890.7	652.9	52,92
71.1	1.46814	1.3649	892.4	653.8	53,02
71.2	1.46838	1.3655	894.1	654.7	53,12
71.3	1.46863	1.3662	895.7	655.6	53,22
71.4	1.46888	1.3669	897.4	656.5	53,32
71.5	1.46913	1.3676	899.1	657.4	53,42
71.6	1.46937	1.3683	900.8	658.3	53,52
71.7	1.46962	1.3689	902.5	659.2	53,62
71.8	1.46987	1.3696	904.1	660.1	53,72
71.9	1.47011	1.3703	905.8	661.0	53,82
72.0	1.47036	1.3710	907.5	661.9	53,92
72.1	1.47061	1.3717	909.2	662.8	54,02
72.2	1.47086	1.3723	910.8	663.7	54,12
72.3	1.47110	1.3730	912.5	664.6	54,22
72.4	1.47135	1.3737	914.2	665.5	54,32
72.5	1.47160	1.3744	915.9	666.4	54,42
72.6	1.47185	1.3750	917.5	667.3	54,51
72.7	1.47210	1.3757	919.2	668.2	54,62
72.8	1.47234	1.3764	920.9	669.0	54,72
72.9	1.47259	1.3771	922.5	669.9	54,81
73.0	1.47284	1.3777	924.2	670.8	54,91
73.1	1.47309	1.3784	925.9	671.7	55,01
73.2	1.47334	1.3791	927.6	672.6	55,11
73.3	1.47359	1.3798	929.2	673.5	55,21
73.4	1.47384	1.3804	930.9	674.4	55,31
73.5	1.47409	1.3811	932.6	675.2	55,41
73.6	1.47434	1.3818	934.3	676.1	55,51
73.7	1.47459	1.3825	936.0	677.0	55,61
73.8	1.47484	1.3832	937.6	677.9	55,71
73.9	1.47509	1.3838	939.3	678.8	55,81
74.0	1.47534	1.3845	941.0	679.7	55,91
74.1	1.47559	1.3852	942.7	680.5	56,01
74.2	1.47584	1.3859	944.4	681.4	56,11
74.3	1.47609	1.3866	946.0	682.3	56,21
74.4	1.47634	1.3872	947.7	683.2	56,31
74.5	1.47660	1.3879	949.4	684.0	56,41
74.6	1.47685	1.3886	951.1	684.9	56,51
74.7	1.47710	1.3893	952.8	685.8	56,61
74.8	1.47735	1.3900	954.4	686.7	56,71
74.9	1.47760	1.3906	956.1	687.5	56,81

⁽¹⁾ Съдържанието на захари е изразено като инвертна захар

Таблица III

Съдържание на захари ⁽¹⁾ в концентрирана и ректифицирана мъст в грамове на литър и грамове за килограм, определени с рефрактометър, разграфен в масови % захароза, при 20°C или в индекс на рефракция, при 20°C. Плътността е определена при 20°C

Захароза,	Индекс	Плътност,	Захари,	Захари,	Алкохол,
в%	на рефрак-	при 20° C	в g/l	в g/kg	в об. %
(m/m)	ция, при				при
	20°C				20°C
1	2	3	4	5	6
50.0	1.42008	1.2342	627.6	508.5	37,28
50.1	1.42029	1.2348	629.3	509.6	37,38
50.2	1.42050	1.2355	630.9	510.6	37,48
50.3	1.42071	1.2362	632.4	511.6	37,56
50.4	1.42092	1.2367	634.1	512.7	37,66
50.5	1.42113	1.2374	635.7	513.7	37,76
50.6	1.42135	1.2381	637.3	514.7	37,85
50.7	1.42156	1.2386	638.7	515.7	37,94
50.8	1.42177	1.2391	640.4	516.8	38,04
50.9	1.42198	1.2396	641.9	517.8	38,13
51.0	1.42219	1.2401	643.4	518.8	38,22
51.1	1.42240	1.2406	645.0	519.9	38,31
51.2	1.42261	1.2411	646.5	520.9	38,40
51.3	1.42282	1.2416	648.1	522.0	38,50
51.4	1.42304	1.2421	649.6	523.0	38,59
51.5	1.42325	1.2427	651.2	524.0	38,68
51.6	1.42347	1.2434	652.9	525.1	38,78
51.7	1.42368	1.2441	654.5	526.1	38,88
51.8	1.42389	1.2447	656.1	527.1	38,97
51.9	1.42410	1.2454	657.8	528.2	39,07
52.0	1.42432	1.2461	659.4	529.2	39,17
52.1	1.42453	1.2466	661.0	530.2	39,26
52.2	1.42475	1.2470	662.5	531.3	39,35
52.3	1.42496	1.2475	664.1	532.3	39,45
52.4	1.42517	1.2480	665.6	533.3	39,54
52.5	1.42538	1.2486	667.2	534.4	39,63
52.6	1.42560	1.2493	668.9	535.4	39,73
52.7	1.42581	1.2500	670.5	536.4	39,83
52.8	1.42603	1.2506	672.2	537.5	39,93
52.9	1.42624	1.2513	673.8	538.5	40,02
53.0	1.42645	1.2520	675.5	539.5	40,12
53.1	1.42667	1.2525	677.1	540.6	40,22
53.2	1.42689	1.2530	678.5	541.5	40,30
53.3	1.42711	1.2535	680.2	542.6	40,40
53.4	1.42733	1.2540	681.8	543.7	40,50
53.5	1.42754	1.2546	683.4	544.7	40,59
53.6	1.42776	1.2553	685.1	545.8	40,69
53.7	1.42797	1.2560	686.7	546.7	40,79
53.8	1.42819	1.2566	688.4	547.8	40,89
53.9	1.42840	1.2573	690.1	548.9	40,99
54.0	1.42861	1.2580	691.7	549.8	41,09
54.1	1.42884	1.2585	693.3	550.9	41,18
54.2	1.42906	1.2590	694.9	551.9	41,28
54.3	1.42927	1.2595	696.5	553.0	41,37
54.4	1.42949	1.2600	698.1	554.0	41,47
54.5	1.42971	1.2606	699.7	555.1	41,56
54.6	1.42993	1.2613	701.4	556.1	41,66
54.7	1.43014	1.2620	703.1	557.1	41,76
54.8	1.43036	1.2625	704.7	558.2	41,86
54.9	1.43058	1.2630	706.2	559.1	41,95
55.0	1.43079	1.2635	707.8	560.2	42,04
55.1	1.43102	1.2639	709.4	561.3	42,14
55.2	1.43124	1.2645	711.0	562.3	42,23
55.3	1.43146	1.2652	712.7	563.3	42,33
55.4	1.43168	1.2659	714.4	564.3	42,44
55.5	1.43189	1.2665	716.1	565.4	42,54
55.6	1.43211	1.2672	717.8	566.4	42,64
55.7	1.43233	1.2679	719.5	567.5	42,74
55.8	1.43255	1.2685	721.1	568.5	42,83
55.9	1.43277	1.2692	722.8	569.5	42,93
56.0	1.43298	1.2699	724.5	570.5	43,04
56.1	1.43321	1.2703	726.1	571.6	43,13
56.2	1.43343	1.2708	727.7	572.6	43,23
56.3	1.43365	1.2713	729.3	573.7	43,32
56.4	1.43387	1.2718	730.9	574.7	43,42
56.5	1.43409	1.2724	732.6	575.8	43,52
56.6	1.43431	1.2731	734.3	576.8	43,62
56.7	1.43454	1.2738	736.0	577.8	43,72
56.8	1.43476	1.2744	737.6	578.8	43,81
56.9	1.43498	1.2751	739.4	579.9	43,92
57.0	1.43519	1.2758	741.1	580.9	44,02
57.1	1.43542	1.2763	742.8	582.0	44,12
57.2	1.43564	1.2768	744.4	583.0	44,22
57.3	1.43586	1.2773	745.9	584.0	44,31
57.4	1.43609	1.2778	747.6	585.1	44,41
57.5	1.43631	1.2784	749.3	586.1	44,51
57.6	1.43653	1.2791	751.0	587.1	44,61
57.7	1.43675	1.2798	752.7	588.1	44,71
57.8	1.43698	1.2804	754.4	589.2	44,81
57.9	1.43720	1.2810	756.1	590.2	44,91
58.0	1.43741	1.2818	757.8	591.2	45,01
58.1	1.43764	1.2822	759.5	592.3	45,11
58.2	1.43784	1.2827	761.1	593.4	45,21
58.3	1.43809	1.2832	762.6	594.3	45,30
58.4	1.43832	1.2837	764.3	595.4	45,40
58.5	1.43854	1.2843	766.0	596.4	45,50
58.6	1.43877	1.2850	767.8	597.5	45,61
58.7	1.43899	1.2857	769.5	598.5	45,71
58.8	1.43922	1.2863	771.1	599.5	45,80
58.9	1.43944	1.2869	772.9	600.6	45,91
59.0	1.43966	1.2876	774.6	601.6	46,01
59.1	1.43988	1.2882	776.3	602.6	46,11
59.2	1.44011	1.2889	778.1	603.7	46,22
59.3	1.44034	1.2896	779.8	604.7	46,32
59.4	1.44057	1.2902	781.6	605.8	46,43
59.5	1.44079	1.2909	783.3	606.8	46,53
59.6	1.44102	1.2916	785.2	607.9	46,64
59.7	1.44124	1.2921	786.8	608.9	46,74
59.8	1.44147	1.2926	788.4	609.9	46,83
59.9	1.44169	1.2931	790.0	610.9	46,93
60.0	1.44192	1.2936	791.7	612.0	47,03
60.1	1.44215	1.2942	793.3	613.0	47,12
60.2	1.44238	1.2949	795.2	614.1	47,23
60.3	1.44260	1.2956	796.9	615.1	47,34
60.4	1.44283	1.2962	798.6	616.1	47,44
60.5	1.44305	1.2969	800.5	617.2	47,55
60.6	1.44328	1.2976	802.2	618.2	47,65
60.7	1.44351	1.2981	803.9	619.3	47,75
60.8	1.44374	1.2986	805.5	620.3	47,85
60.9	1.44397	1.2991	807.1	621.3	47,94
61.0	1.44419	1.2996	808.7	622.3	48,04
61.1	1.44442	1.3002	810.5	623.4	48,14
61.2	1.44465	1.3009	812.3	624.4	48,25
61.3	1.44488	1.3016	814.2	625.5	48,36
61.4	1.44511	1.3022	815.8	626.5	48,46
61.5	1.44534	1.3029	817.7	627.6	48,57
61.6	1.44557	1.3036	819.4	628.6	48,67
61.7	1.44580	1.3042	821.3	629.7	48,79
61.8	1.44603	1.3049	823.0	630.7	48,89
61.9	1.44626	1.3056	824.8	631.7	48,99
62.0	1.44648	1.3062	826.6	632.8	49,10
62.1	1.44672	1.3068	828.3	633.8	49,20
62.2	1.44695	1.3075	830.0	634.8	49,30
62.3	1.44718	1.3080	831.8	635.9	49,40
62.4	1.44741	1.3085	833.4	636.9	49,50
62.5	1.44764	1.3090	835.1	638.0	49,60
62.6	1.44787	1.3095	836.8	639.0	49,71
62.7	1.44810	1.3101	838.5	640.0	49,81
62.8	1.44833	1.3108	840.2	641.0	49,91
62.9	1.44856	1.3115	842.1	642.1	50,02
63.0	1.44879	1.3121	843.8	643.1	50,12
63.1	1.44902	1.3128	845.7	644.2	50,23
63.2	1.44926	1.3135	847.5	645.2	50,34
63.3	1.44949	1.3141	849.3	646.3	50,45
63.4	1.44972	1.3148	851.1	647.3	50,56
63.5	1.44995	1.3155	853.0	648.4	50,67
63.6	1.45019	1.3161	854.7	649.4	50,77
63.7	1.45042	1.3168	856.5	650.4	50,88
63.8	1.45065	1.3175	858.4	651.5	50,99
63.9	1.45088	1.3180	860.0	652.5	51,08
64.0	1.45112	1.3185	861.6	653.5	51,18
64.1	1.45135	1.3190	863.4	654.6	51,29
64.2	1.45158	1.3195	865.1	655.6	51,39
64.3	1.45181	1.3201	866.9	656.7	51,49
64.4	1.45205	1.3208	868.7	657.7	51,60
64.5	1.45228	1.3215	870.6	658.8	51,71
64.6	1.45252	1.3221	872.3	659.8	51,81
64.7	1.45275	1.3228	874.1	660.8	51,92
64.8	1.45299	1.3235	876.0	661.9	52,03
64.9	1.45322	1.3241	877.8	662.9	52,14
65.0	1.45347	1.3248	879.7	664.0	52,25
65.1	1.45369	1.3255	881.5	665.0	52,36
65.2	1.45393	1.3261	883.2	666.0	52,46
65.3	1.45416	1.3268	885.0	667.0	52,57
65.4	1.45440	1.3275	886.9	668.1	52,68
65.5	1.45463	1.3281	888.8	669.2	52,79
65.6	1.45487	1.3288	890.6	670.2	52,90
65.7	1.45510	1.3295	892.4	671.2	53,01
65.8	1.45534	1.3301	894.2	672.3	53,12
65.9	1.45557	1.3308	896.0	673.3	53,22
66.0	1.45583	1.3315	898.0	674.4	53,34
66.1	1.45605	1.3320	899.6	675.4	53,44
66.2	1.45629	1.3325	901.3	676.4	53,54
66.3	1.45652	1.3330	903.1	677.5	53,64
66.4	1.45676	1.3335	904.8	678.5	53,75
66.5	1.45700	1.3341	906.7	679.6	53,86
66.6	1.45724	1.3348	908.5	680.6	53,96
66.7	1.45747	1.3355	910.4	681.7	54,08
66.8	1.45771	1.3361	912.2	682.7	54,18
66.9	1.45795	1.3367	913.9	683.7	54,29
67.0	1.45820	1.3374	915.9	684.8	54,40
67.1	1.45843	1.3380	917.6	685.8	54,51
67.2	1.45867	1.3387	919.6	686.9	54,62
67.3	1.45890	1.3395	921.4	687.9	54,73
67.4	1.45914	1.3400	923.1	688.9	54,83
67.5	1.45938	1.3407	925.1	690.0	54,95
67.6	1.45962	1.3415	927.0	691.0	55,06
67.7	1.45986	1.3420	928.8	692.1	55,17
67.8	1.46010	1.3427	930.6	693.1	55,28
67.9	1.46034	1.3434	932.6	694.2	55,40
68.0	1.46060	1.3440	934.4	695.2	55,50
68.1	1.46082	1.3447	936.2	696.2	55,61
68.2	1.46106	1.3454	938.0	697.2	55,72
68.3	1.46130	1.3460	939.9	698.3	55,83
68.4	1.46154	1.3466	941.8	699.4	55,94
68.5	1.46178	1.3473	943.7	700.4	56,06
68.6	1.46202	1.3479	945.4	701.4	56,16
68.7	1.46226	1.3486	947.4	702.5	56,28
68.8	1.46251	1.3493	949.2	703.5	56,38
68.9	1.46275	1.3499	951.1	704.6	56,50
69.0	1.46301	1.3506	953.0	705.6	56,61
69.1	1.46323	1.3513	954.8	706.6	56,72
69.2	1.46347	1.3519	956.7	707.7	56,81
69.1	1.46371	1.3526	958.6	708.7	56,94
69.4	1.46396	1.3533	960.6	709.8	57,06
69.5	1.46420	1.3539	962.4	710.8	57,17
69.6	1.46444	1.3546	964.3	711.9	57,28
69.7	1.46468	1.3553	966.2	712.9	57,39
69.8	1.46493	1.3560	968.2	714.0	57,51
69.9	1.46517	1.3566	970.0	715.0	57,62
70.0	1.46544	1.3573	971.8	716.0	57,72
70.1	1.46565	1.3579	973.8	717.1	57,84
70.2	1.46590	1.3586	975.6	718.1	57,95
70.3	1.466614	1.3593	977.6	719.2	58,07
70.4	1.46639	1.3599	979.4	720.2	58,18
70.5	1.46663	1.3606	981.3	721.2	58,29
70.6	1.46688	1.3613	983.3	722.3	58,41
70.7	1.46712	1.3619	985.2	723.4	58,52
70.8	1.46737	1.3626	987.1	724.4	58,63
70.9	1.46761	1.3633	988.9	725.4	58,74
71.0	1.46789	1.3639	990.9	726.5	58,86
71.1	1.46810	1.3646	992.8	727.5	58,97
71.2	1.46835	1.3653	994.8	728.6	59,09
71.3	1.46859	1.3659	996.6	729.6	59,20
71.4	1.46884	1.3665	998.5	730.7	59,31
71.5	1.46908	1.3672	1000.4	731.7	59,42
71.6	1.46933	1.3678	1002.2	732.7	59,53
71.7	1.46957	1.3685	1004.2	733.8	59,65
71.8	1.46982	1.3692	1006.1	734.8	59,76
71.9	1.47007	1.3698	1008.0	735.9	59,88
72.0	1.47036	1.3705	1009.9	736.9	59,99
72.1	1.47056	1.3712	1012.0	738.0	60,11
72.2	1.47081	1.3718	1013.8	739.0	60,22
72.3	1.47106	1.3725	1015.7	740.0	60,33
72.4	1.47131	1.3732	1017.7	741.1	60,45
72.5	1.47155	1.3738	1019.5	742.1	60,56
72.6	1.47180	1.3745	1021.5	743.2	60,68
72.7	1.47205	1.3752	1023.4	744.2	60,79
72.8	1.47230	1.3758	1025.4	745.3	60,91
72.9	1.47254	1.3765	1027.3	746.3	61,02
73.0	1.47284	1.3772	1029.3	747.4	61,14
73.1	1.47304	1.3778	1031.2	748.4	61,25
73.2	1.47329	1.3785	1033.2	749.5	61,37
73.3	1.47354	1.3792	1035.1	750.5	61,48
73.4	1.47379	1.3798	1037.1	751.6	61,60
73.5	1.47404	1.3805	1039.0	752.6	61,72
73.6	1.47429	1.3812	1040.0	753.6	61,83
73.7	1.47454	1.3818	1042.8	754.7	61,94
73.8	1.47479	1.3825	1044.8	755.7	62,06
73.9	1.47504	1.3832	1046.8	756.8	62,18
74.0	1.47534	1.3838	1048.6	757.8	62,28
74.1	1.47554	1.3845	1050.7	758.9	62,41
74.2	1.47579	1.3852	1052.6	759.9	62,52
74.1	1.47606	1.3858	1054.6	761.0	62,64
74.4	1.47629	1.3865	1056.5	762.0	62,76
74.5	1.47654	1.3871	1058.5	763.1	62,87
74.6	1.47679	1.3878	1060.4	764.1	62,99
74.7	1.47704	1.3885	1062.3	765.1	63,10
74.8	1.47730	1.3892	1064.4	766.2	63,23
74.9	1.47755	1.3898	1066.3	767.2	63,33
75.0	1.47785	1.3905	1068.3	768.3	63,46

⁽¹⁾ Съдържанието на захари е изразено като инвертна захар

3. Определяне алкохолното съдържание

1. Определение

Алкохолното съдържание е равно на литрите етилов алкохол, съдържащи се в 100 литра продукт, измерени при 20°C. Обозначава се със символа "об. %".

Забележка. Хомолозите на етиловия алкохол заедно с производните му като етилови естери, включени в алкохолното съдържание, остават, тъй като преминават в дестилата.

2. Принцип на метода

2.1. Методът се основава на дестилация на вино, алкализирано с калциев хидроксид, и измерване на алкохолното съдържание на дестилата.

2.2. Сравнителен метод - измерване плътността на дестилата с помощта на пикнометър.

2.3. Обикновени методи:

2.3.1. Измерване на алкохолното съдържание на дестилата с помощта на ареометър.

2.3.2. Измерване на алкохолното съдържание на дестилата чрез денситометрия с използване на хидростатични везни.

2.3.3. Измерване на алкохолното съдържание на дестилата чрез рефрактометрия.

Забележка. За да се изчисли алкохолното съдържание от плътността на дестилата, се използват таблици I, II и III, приети от OIV (Обща асамблея, 1974 г.).

Таблица I дава общата формула, изразяваща връзката между алкохолното съдържание спрямо обема и плътността на смеси на алкохол и вода като функция от температурата.

3. Получаване на дестилат

3.1. Апаратура

3.1.1. Дестилираща апаратура, състояща се от:

- колба от един литър с кръгло дъно, със съединителни елементи от шлифовано стъкло;

- ректификационна колона с височина около 20 cm или друго устройство, предотвратяващо загубите;

- източник на топлина; чрез подходяща конструкция трябва да се предотврати възникването на пиролиза на извлеченото вещество;

- хладник с изтеглен край, който отвежда дестилата до дъното на мерителна колба, съдържаща няколко милилитра вода.

3.1.2. Устройство за парна дестилация, състоящо се от:

• парогенератор;

• парна тръба;

• капкоуловител;

• хладник.

Може да бъде използвано устройство за дестилация или за парна дестилация от всякакъв тип, при условие че то изпълнява следните изисквания: дестилират се пет пъти последователно смес от етилов алкохол и вода с алкохолно съдържание 10 об. %; след петата дестилация дестилатът да има алкохолно съдържание поне 9,9 об. %, т.е. загубата на алкохол при всяка отделна дестилация да не надхвърля 0,02 об. %.

3.2. Реактиви

3.2.1. Суспензия на 2M калциев хидроксид.

Получава се чрез внимателно заливане на 120 g негасена вар (CaO) с един литър вода с температура 60°C - 70°C.

3.3. Подготовка на пробата

Основната част от въглеродния диоксид от младите и газирани вина се отстранява чрез разбъркване на 250 - 300 ml вино в колба от 500 ml.

3.4. Процедура

В мерителна колба от 200 ml се отмерват 200 ml вино. Записва се температурата на виното.

Прелива се виното в дестилационната колба и се поставя парната тръба на устройството за дестилация с водна пара. Изплаква се градуираната колба четири пъти с последователни 5-милилитрови промивки с вода, които се добавят към колбата или към барбутьора. Добавят се 10 ml калциев хидроксид (3.2.1) и няколко стъклени перли.

Дестилатът се събира в колба от 200 ml, която се използва за измерване на виното.

Ако се използва дестилация, се събира количество, съответстващо на около три четвърти от първоначалния обем, или обем между 198 и 199 ml - ако се използва парна дестилация. Разрежда се до 200 ml с дестилирана вода, като трябва да се поддържа температура на дестилата в границите на ± 2°C от първоначалните температури.

Разбърква се много внимателно с кръгови движения.

Забележка. В случаите, когато вината съдържат изключително големи концентрации на амониеви йони, дестилатът може да бъде повторно дестилиран при посочените условия, като суспензията на калциев хидроксид се заменя с един милилитър сярна киселина, разредена в съотношение 10 части в 100 части (v:v).

4. Сравнителен метод

Измерване на алкохолното съдържание на дестилата с използване на пикнометър

4.1. Апаратура

4.1.1. Използва се еталониран пикнометър, както е описано в метод "1. Определяне на плътността и относителната плътност при 20°С".

4.2. Процедура

Измерва се наблюдаваната плътност r_t на дестилата (3.4) при t°C,. както е описано в метод "1. Определяне на плътността и относителната плътност при 20°С", т. 4.3.1 и 4.3.2.

4.3. Изразяване на резултатите

4.3.1. Начин на изчисляване

С помощта на таблица I се определя алкохолното съдържание при 20°C. В хоризонталния ред на тази таблица, съответстващ на температурата T (изразена като цяло число), непосредствено под t°C се намира най-малката плътност, която е по-голяма от r_t. Отчита се табличната разлика непосредствено под тази плътност за изчисляване на плътността r при тази температура T.

В реда за температурата T се намира плътността r', непосредствено по-висока от r', и се изчислява разликата между плътностите r и r'. Тази разлика се разделя на табличната разлика, вдясно от плътността r'. Частното дава десетичната част на алкохолното съдържание, а цялата част на алкохолното съдържание е посочено отгоре на колоната, в която се намира плътността r'.

Примерът за изчисление на алкохолното съдържание e даден в края на метода.

Забележка. Температурната корекция се влага в компютърна програма и може да се извършва автоматично.

4.3.2. Повторяемост, r:

r = 0,10 об. %.

4.3.3. Възпроизводимост, R

R = 0,19 об. %.

5. Обикновени методи

5.1. Ареометрия

5.1.1. Апаратура

5.1.1.1. Спиртомер

Спиртомерът трябва да отговаря на изискванията за оборудване клас I или клас II и да е еталониран от акредитиращата организация (в съответствие с изискванията за "Спиртомери и алкохолни ареометри" на OIML - Международната организация по законодателна метрология).

5.1.1.2. Термометър, разграфен в десети от градуса между 0 - 40°C, калибриран до 1/20 от градуса.

5.1.1.3. Измервателен цилиндър с диаметър 36 mm и височина 320 mm, поддържан вертикално от опорни нивелиращи винтове.

5.1.2. Начин на работа

Дестилатът (3.4) се налива в мерителния цилиндър, който трябва да бъде във вертикално положение. Вкарват се термометърът и спиртомерът. Отчита се температурата по термометъра една минута след разбъркване на пробата, за да се получи равновесие на температурите на мерителния цилиндър, термометъра, спиртомера и дестилата. Изважда се термометърът и се отчита след интервал една минута измереното алкохолно съдържание. Правят се поне три отчитания, използвайки лупа. С помощта на таблица II се коригира измерената при t°C концентрация, като се отчита ефектът на температурата.

Температурата на течността трябва да се различава от температурата на околната среда (с не повече от 5°C).

5.2. Определяне на плътността с използване на хидростатични везни

5.2.1. Апаратура

5.2.1.1. Хидростатичните везни се използват по начина, описан в метод "1. Определяне на плътността и относителната плътност при 20°С".

5.2.2. Начин на работа

Наблюдаваната плътност на дестилата при t°C се измерва по начина, описан в метод "1. Определяне на плътността и относителната плътност при 20°С", т. 5.2.2.

5.2.3. Изразяване на резултатите

Алкохолното съдържание при 20°C се определя, следвайки метода, описан в 4.3.1, като се използва таблица I, ако поплавъкът е изработен от стъкло Pyrex, или таблица III, ако е изработен от обикновено стъкло.

5.3. Рефрактометрия

5.3.1. Апаратура

5.3.1.1. Рефрактометър, който позволява да се измерва коефициентът на пречупване в диапазона от 1,330 до 1,346.

В зависимост от вида на оборудването измерванията се извършват:

- при 20°C с подходящ уред;

- при температура t°C на околната среда с уред, който е снабден с термометър, позволяващ определяне на температурата с точност поне до 0,05°C; заедно с уреда се предоставя и таблица за температурна корекция.

5.3.2. Начин на работа

Коефициентът на пречупване на винения дестилат, получен съгласно т. 3.4, се измерва, като се следва процедурата, предписана за използвания тип устройство.

5.3.3. Изразяване на резултатите

Таблица IV се използва за определяне на алкохолното съдържание, съответстващо на индекса на рефракция при 20°C.

Забележка. Таблица IV съдържа алкохолното съдържание, съответстващо на коефициентите на пречупване както за чисти смеси на алкохол и вода, така и за винени дестилати. В случая на винени дестилати в таблицата е отчетено наличието на примеси в дестилата (предимно висши алкохоли). Присъствието на метилов алкохол намалява коефициента на пречупване, следователно се намалява и алкохолното съдържание.

6. Пример за изчисляване на алкохолното съдържание на вино

6.1. Измерване чрез пикнометър на везни с две еднакви блюда

6.1.1. Константите на пикнометъра са определени и изчислени по начина, описан в метод "1. Определяне на плътността и относителната плътност при 20°С", т. 6.1.1.

6.1.2. Претегляне на пикнометър, който е пълен с дестилат

Числен пример:

Тара = пикнометър + дестилат при t°C + p"

p + m - p' = масата на дестилата при t°C

105,0698 - 2,8074 = 102,2624 g.

Измерена плътност при t°C

6.1.3. Изчисляване на алкохолното съдържание

Използва се таблицата	/ На ред 18°С на таблица I за
за плътностите на во-	измерените плътности най-
доалкохолните смеси,	малката плътност, която е по-
измерени при различни	голяма от наблюдаваната плът-
температури, както е	ност от 0,983076, е 0,98398 в
посочено в т. 6.1.1.	колона 11 об. %.
<	Плътността при 18°С е:
	(98307,6 + 0,7 x 22) 10(-5) = 0,98323
	0,98398 - 0,98323 = 0,00075.
	Десетичната част на алкохолното
	съдържание в об. % е 75 / 114 = 0,65.
	\ Алкохолното съдържание е 11,65 об. %.

6.2. Измерване чрез пикнометър на везни с едно блюдо

6.2.1. Константите на пикнометъра са определени и изчислени по начина, описан в метод "1. Определяне на плътността и относителната плътност при 20°С" в т. 6.2.1.

6.2.2. Претегляне на пикнометър, който е пълен с дестилат

Тегло на тарата по време на измерването (в грамове):

T₁ = 171,9178.

Пикнометърът, напълнен с дестилат при 20,50°C (в грамове):

P₂ = 167,8438.

Корекция от теглото на въздушния стълб:

dT = 171,9178 - 171,9160 = + 0,0018.

Маса на дестилата при 20,50°C:

L_t = 167,8438 - (67,6695 + 0,0018) = 100,1725.

Наблюдавана плътност на дестилата:

r_20,50°C = 100,1725/101,8194 = 0,983825.

6.2.3. Изчисляване на алкохолното съдържание

Използва се таблицата	/ На ред 20°С на таблица I за
за плътностите на водо-	измерените плътности най-
алкохолните смеси, из-	малката плътност, която е по-
мерени при различни	голяма от наблюдаваната плът-
температури, както е	ност от 0,983825, е 0,98471 в ко-
посочено в т.6.2.1.	лона 10 об. %.
<	Плътността при 20°С е:
	(98382,5 + 0,50 x 24) 10(-5) = 0,983945
	0,98471 - 0,983945 = 0,000765.
	Десетичната част на алкохолното съдържание
	в об. % е 76,5 / 119 = 0,64.
	\ Алкохолното съдържание е 10,64 об. %.

Формула за изчисляване на алкохолното съдържание от таблиците на смесите на етилов алкохол и вода

Плътността "r", изразена в килограми на кубически метър (kg/m³), за смес от етилов алкохол и вода при температура t, в градуси по Целзий (°C), се изразява със следната формула като функция на:

- тегловното съдържание (p), изразено като десетично число ⁽¹⁾;

- температурата t, в градуси Целзий;

- посочените числени коефициенти.

Формулата е валидна за температури между -20 и +40°C.

n = 5, m₃ = 9, m₁ = 11, m₄ = 4, m₂ = 10, m₅ = 2.

________________________

⁽¹⁾ Пример: за 12 тегловни части алкохол в 100 тегловни части смес алкохол - вода: р = 0,12.

Числени коефициенти на формулата

Таблица I

Международна таблица за отчитане на алкохолното съдържание при 20°С. Таблица на плътността на водоалкохолни смеси, измерени с пикнометър от стъкло Pyrex. Плътностите при t°C, коригирани с отчитане на теглото на въздушния стълб

t°C	Алкохол в об. %

0	999,64	1,50	998,14	1,44	996,70	1,40	995,30	1,35	993,95	1,30	992,65	1,24	991,41	1,19	990,22	1,14	989,08	1,10	987,98	1,05	986,93	1,00	985,93	0,95
	-0,07		-0,06		-0,06		-0,06		-0,06		-0,06		-0,06		-0,05		-0,04		-0,03		-0,02		-0,01
1	999,71	1,51	998,20	1,44	996,76	1,40	995,36	1,35	994,01	1,30	992,71	1,24	991,47	1,20	990,27	1,15	989,12	1,11	988,01	1,06	986,95	1,01	985,94	0,97
	-0,05		-0,05		-0,04		-0,04		-0,04		-0,04		-0,03		-0,03		-0,02		-0,02		-0,01		0,00
2	999,76	1,51	998,25	1,45	996,80	140	995,40	1,35	994,05	1,30	992,75	1,25	991,50	1,20	990,30	1,16	989,14	1,11	988,03	1,07	986,96	1,02	985,94	0,98
	-0,03		-003		-0,03		-0,02		-0,02		-0,02		-0,02		-0,01		-0,01		0,00		0,01		0,02
3	999,79	1,51	998,28	1,45	996,83	1,41	995,42	1,35	994,07	1,30	992,77	1,25	991,52	1,21	990,31	1,16	989,15	1,12	988,03	1,08	986,95	1,03	985,92	1,00
	-0,02		-0,02		-0,01		-0,02		-0,01		-0,01		0,00		0,00		0,01		0,02		0,03		0,04
4	999,81	1,51	948,30	1,46	996,84	1,40	995,44	1,36	994,08	1,30	992,78	1,26	991,52	1,21	990,31	1,17	989,14	1,13	988,01	1,09	986,92	1,04	985,88	1,00
	0,00		0,00		0,00		0,00		0,01		0,02		0,02		0,02		0,02		0,03		0,04		0,05
5	999,81	1,51	998,30	1,46	996,84	1,40	995,44	1,37	994,07	1,31	992,76	1,26	991,50	1,21	990,29	1,17	989,12	1,14	987,98	1,10	986,88	1,05	985,83	1,01
	0,01		0,01		0,01		0,02		0,01		0,02		0,03		0,04		0,05		0,05		0,05		0,06
6	999,80	1,51	998,29	1,46	996,83	1,41	995,42	1,36	994,06	1,32	992,74	1,27	991,47	1,22	990,25	1,18	989,07	1,14	987,93	1,10	986,83	1,06	985,77	1,03
	0,03		0,03		0,03		0,03		0,04		0,04		0,04		0,05		0,06		0,07		0,08		0,09
7	999,77	1,51	998,26	1,46	996,80	1,41	995,39	1,37	994,02	1,32	992,70	1,27	991,43	1,23	990,20	1,19	989,01	1,15	987,86	1,11	986,75	1,07	985,68	1,03
	0,05		0,04		0,04		0,05		0,05		0,05		0,05		0,06		0,06		0,07		0,08		0,09
8	999,72	1,50	998,22	1,46	996,76	1,42	995,34	1,37	993,97	1,32	992,65	1,27	991,38	1,24	990,14	1,19	988,95	1,16	987,79	1,12	986,67	1,08	985,59	1,05
	0,05		0,06		0,06		0,06		0,06		0,06		0,07		0,07		0,08		0,09		0,10		0,11
9	999,67	1,51	998,16	1,46	996,70	1,42	995,28	1,37	993,91	1,32	992,59	1,28	991,31	1,24	990,07	1,20	988,87	1,17	987,70	1,13	986,57	1,09	985,48	1,06
	0,07		0,07		0,07		0,07		0,07		0,08		0,08		0,09		0,09		0,10		0,11		0,12
10	999,60	1,51	948,04	1,46	996,63	1,42	995,21	1,37	993,84	1,33	992,51	1,28	991,23	1,25	989,98	1,20	988,78	1,17	987,60	1,14	986,46	1,10	485,36	1,06
	0,09		0,09		0,09		0,08		0,09		0,09		0,10		0,10		0,11		0,11		0,12		0,13
11	999,51	1,51	998,09	1,46	996,54	1,41	995,13	1,38	993,75	1,33	992,42	1,29	991,13	1,25	989,88	1,21	988,67	1,18	987,49	1,15	986,34	1,11	985,23	1,07
	0,10		0,09		009		0,10		0,10		0,11		0,11		0,11		0,12		0,13		0,13		0,14
12	999,41	1,50	997,91	1,46	996,45	1,42	995,03	1,38	993,65	1,34	992,31	1,29	991,02	1,25	989,77	1,22	988,55	1,19	987,36	1,15	986,21	1,12	985,09	1,09
	0,11		0,11		0,11		0,11		0,11		0,11		0,12		0,12		0,13		0,14		0,15		0,16
13	999,30	1,50	997,80	1,46	996,34	1,42	994,92	1,38	993,54	1,34	992,20	1,30	990,90	1,25	989,65	1,23	988,42	1,20	987,22	1,16	986,06	1,13	984,93	1,09
	0,12		0,12		0,12		0,13		0,13		0,13		0,13		0,14		0,14		0,15		0,16		0,16
14	999,18	1,50	997,68	1,46	996,22	1,43	994,79	1,38	993,41	1,34	942,07	1,30	990,77	1,26	989,51	1,23	988,28	1,21	987,07	1,17	985,90	1,13	984,77	1,10
	0,13		0,14		0,14		0,13		0,13		0,14		0,14		0,15		0,16		0,16		0,17		0,18
15	999,05	1,51	997,54	1,46	996,08	1,42	994,66	1,38	993,28	1,35	991,93	1,30	990,63	1,27	989,36	1,24	988,12	1,21	986,91	1,18	985,73	1,14	984,59	1,12
	0,15		0,14		0,14		0,15		0,15		0,15		0,16		0,16		0,17		0,17		0,18		0,19
16	998,90	1,50	997,40	1,46	995,94	1,43	994,51	1,38	993,13	1,35	991,78	1,31	990,47	1,27	989,20	1,25	987,95	1,21	986,74	1,19	985,55	1,15	984,40	1,13
	0,16		0,16		0,10		0,16		0,16		0,17		0,17		0,18		0,18		0,19		0,19		0,20
17	998,74	1,50	997,24	1,46	995,78	1,43	994,35	1,38	942,47	1,36	991,61	1,31	990,30	1,28	989,02	1,25	987,77	1,22	986,55	1,19	985,36	1,16	985,20	1,14
	0,17		0,17		0,17		0,16		0,17		0,17		0,18		0,18		0,19		0,20		0,21		0,22
18	998,57	1,50	947,07	1,46	995,61	1,42	994,19	1,39	992,80	1,36	991,44	1,32	990,12	1,28	988,84	1,26	987,58	1,23	986,35	1,20	985,15	1,17	983,98	1,14
	0,18		0,18		0,18		0,19		0,19		0,19		0,19		0,20		0,20		0,20		0,21		0,22
19	998,39	1,50	996,89	1,46	995,43	1,43	994,00	1,39	992,61	1,36	991,25	1,32	989,93	1,29	988,64	1,26	987,38	1,23	986,15	1,21	984,94	1,10	983,76	1,16
	0,19		0,19		0,19		0,19		0,19		0,19		0,20		0,20		0,21		0,22		0,23		0,24
20	998,20	1,50	996,70	1,46	995,24	1,43	993,81	1,39	992,42	1,36	991,06	1,33	989,73	1,29	988,44	1,27	987,17	1,24	985,93	1,22	984,71	1,19	983,52	1,16
	0,20		0,20		0,20		0,20		0,21		0,21		0,21		0,22		0,22		0,23		0,24		0,24
21	998,00	1,50	996,50	1,46	995,04	1,43	993,61	1,40	992,21	1,36	990,85	1,33	989,52	1,30	988,22	1,27	986,95	1,25	985,70	1,23	984,47	1,19	983,28	1,18
	0,21		0,21		0,21		0,21		0,21		0,22		0,22		0,23		0,24		0,24		0,24		0,26
22	997,79	1,50	996,29	1,46	994,83	1,4,3	993,40	1,40	992,00	1,37	990,63	1,33	989,30	1,31	987,99	1,28	986,71	1,25	985,46	1,23	984,23	1,21	983,02	1,22
	0,22		0,22		0,23		0,23		0,23		0,23		0,24		0,24		0,24		0,25		0,26		0,25
23	997,57	1,50	946,07	1,47	994,60	1,43	993,17	1,40	991,77	1,37	990,40	1,34	989,06	1,31	987,75	1,28	986,47	1,26	985,21	1,24	983,97	1,20	982,77	1,20
	0,24		0,23		0,23		0,23		0,24		0,24		0,24		0,25		0,26		0,26		0,27		0,29
24	997,33	1,49	995,84	1,47	994,37	1,43	992,94	1,41	991,53	1,37	990,16	1,34	988,82	1,32	987,50	1,29	986,21	1,26	984,95	1,25	983,70	1,22	982,48	1,20
	0,24		0,25		0,24		0,25		0,24		0,25		0,26		0,26		0,26		0,27		0,28		0,28
25	997,09	1,50	995,59	1,46	994,13	1,44	992,69	1,40	991,29	1,38	989,91	1,35	988,56	1,32	987,24	1,29	985,95	1,27	984,68	1,26	983,42	1,22	982,20	1,21
	0,25		0,25		0,26		0,25		0,26		0,26		0,26		0,26		0,28		0,28		0,28		0,30
26	996,84	1,50	995,34	1,47	993,87	1,43	992,44	1,41	991,03	1,38	989,65	1,35	988,30	1,32	986,98	1,31	985,67	1,27	484,40	1,26	983,14	1,24	981,90	1,22
	0,26		0,26		0,26		0,27		0,27		0,27		0,27		0,28		0,28		0,29		0,30		0,30
27	996,58	1,50	995,08	1,47	993,61	1,44	992,17	1,41	990,76	1,38	989,38	1,35	988,03	1,33	986,70	1,31	985,39	1,28	984,11	1,27	982,84	1,24	981,60	1,23
	0,27		0,27		0,27		0,27		0,28		0,28		0,29		0,29		0,29		0,30		0,31		0,32
28	996,31	1,50	994,81	1,47	993,34	1,44	991,90	1,42	990,48	1,38	989,10	1,36	987,74	1,33	986,41	1,31	985,10	1,29	983,81	1,28	982,53	1,25	981,28	1,23
	0,28		0,28		0,28		0,29		0,28		0,29		0,29		0,30		0,31		0,31		0,31		0,32
29	996,03	1,50	994,53	1,47	993,06	1,45	991,61	1,41	990,20	1,39	988,81	1,36	987,45	1,34	986,11	1,32	984,79	1,29	983,50	1,28	982,22	1,26	980,96	1,24
	0,28		0,29		0,29		0,29		0,30		0,30		0,31		0,31		0,31		0,32		0,32		0,33
30	995,75	1,51	994,24	1,47	992,77	1,45	991,32	1,42	989,90	1,39	988,51	1,37	987,14	1,34	985,80	1,32	984,48	1,30	983,18	1,28	981,90	1,27	980,63	1,25
	0,30		0,30		0,30		0,30		0,31		0,31		0,31		0,31		0,32		0,33		0,34		0,34
31	995,45	1,51	993,94	1,47	992,47	1,45	991,02	1,43	989,59	1,39	988,20	1,37	986,83	1,34	985,49	1,33	984,16	1,31	982,85	1,29	981,56	1,27	980,29	1,26
	0,31		0,31		0,31		0,32		0,31		0,32		0,32		0,33		0,33		0,34		0,35		0,36
32	995,14	1,51	993,63	1,47	992,16	1,46	990,70	1,42	989,28	1,40	987,88	1,37	986,51	1,35	985,16	1,33	983,83	1,32	982,51	1,30	981,21	1,28	979,93	1,26
	0,31		0,31		0,32		0,32		0,32		0,33		0,33		0,34		0,35		0,35		0,35		0,35
33	994,83	1,51	993,32	1,48	991,84	1,46	990,38	1,42	988,96	1,41	987,55	1,37	986,18	1,36	984,82	1,34	983,48	1,32	982,16	1,30	980,86	1,28	979,58	1,28
	0,32		0,33		0,33		0,33		0,35		0,34		0,35		0,35		0,34		0,35		0,36		0,37
34	994,51	1,52	992,99	1,48	991,51	1,46	990,05	1,44	988,61	1,40	487,21	1,38	985,83	1,36	984,47	1,33	983,14	1,33	981,81	1,31	980,50	1,29	979,21	1,28
	0,33		0,33		0,34		0,35		0,34		0,35		0,35		0,35		0,36		0,36		0,36		0,37
35	994,18	1,52	992,66	1,49	991,17	1,47	989,70	1,43	988,27	1,41	986,86	1,38	985,48	1,36	984,12	1,34	982,78	1,33	981,45	1,31	980,14	1,30	978,84	1,29
	0,34		0,35		0,35		0,35		0,36		0,36		0,37		0,37		0,38		0,37		0,37		0,38
36	993,84	1,53	992,31	1,49	990,82	1,47	989,35	1,43	987,92	1,41	986,51	1,38	985,13	1,37	983,76	1,34	982,42	1,34	981,08	1,31	979,77	1,31	978,46	1,29
	0,35		0,35		0,36		0,35		0,36		0,36		0,37		0,37		0,38		0,37		0,39		0,39
37	993,49	1,53	991,96	1,50	990,46	1,46	989,00	1,44	987,56	1,41	986,15	1,39	984,76	1,37	983,39	1,35	982,04	1,33	980,71	1,33	979,38	1,31	978,07	1,30
	0,36		0,36		0,36		0,37		0,37		0,37		0,37		0,37		0,38		0,39		0,38		0,39
38	993,13	1,53	991,60	1,50	990,10	1,47	988,63	1,44	987,19	1,41	985,78	1,39	984,39	1,37	983,02	1,36	981,66	1,34	980,32	1,32	979,00	1,32	977,68	1,31
	0,36		0,37		0,37		0,37		0,38		0,38		0,38		0,39		0,38		0,39		0,40		0,40
39	992,77	1,54	991,23	1,50	989,73	1,47	988,26	1,45	986,81	1,41	985,40	1,39	984,01	1,38	982,63	1,35	981,28	1,35	979,93	1,33	978,60	1,32	977,28	1,32
	0,37		0,37		0,38		0,39		0,38		0,39		0,39		0,39		0,40		0,39		0,40		0,41
40	992,40	1,54	990,86	1,51	989,35	1,48	987,87	1,44	986,43	1,42	985,01	1,39	983,62	1,38	983,24	1,36	980,88	1,34	979,54	1,34	978,20	1,33	976,87	1,32

t°C	Алкохол в об. %

0	986,93	1,00	985,93	0,95	984,98	0,92	984,06	0,88	983,18	0,84	982,34	0,80	981,54	0,78	980,76	0,75	980,01	0,73	979,28	0,72	978,56	0,70	977,86	0,70
	-0,02		-0,01		0,01		0,01		0,03		0,04		0,07		0,08		0,10		0,12		0,14		0,17
1	986,95	1,01	985,94	0,97	984,97	0,92	984,05	0,90	983,15	0,85	982,30	0,83	981,47	0,79	980,68	0,77	979,91	0,75	979,16	0,74	978,42	0,73	977,69	0,72
	-0,01		0,00		0,01		0,03		0,04		0,07		0,08		0,10		0,12		0,14		0,16		0,18
2	986,96	1,02	985,94	0,98	984,96	0,94	984,02	0,91	983,11	0,88	982,23	0,84	981,39	0,81	980,58	0,79	979,79	0,77	979,02	0,76	978,2	0,75	977,51	0,74
	0,01		0,02		0,04		0,05		0,06		0,07		0,09		0,11		0,13		0,15		0,17		0,19
3	986,95	1,03	985,92	1,00	984,92	0,95	983,97	0,92	983,05	0,89	982,16	0,86	981,30	0,83	980,47	0,81	979,66	0,79	978,87	0,78	978,09	0,77	977,32	0,77
	0,03		0,04		0,04		0,06		0,07		0,09		0,10		0,12		0,14		0,16		0,18		0,20
4	986,92	1,04	985,88	1,00	984,88	0,97	983,91	0,93	982,98	0,91	982,07	0,87	981,20	0,85	980,35	0,83	979,52	0,81	978,71	0,80	977,91	0,79	977,12	0,79
	0,04		0,05		0,06		0,07		0,09		0,10		0,12		0,14		0,15		0,17		0,19		0,22
5	986,88	1,05	985,83	1,01	984,82	0,98	983,84	0,95	982,89	0,92	981,97	0,89	981,08	0,87	980,21	0,84	979,37	0,83	978,54	0,82	977,72	0,82	976,90	0,80
	0,05		0,06		0,08		0,09		0,10		0,12		0,13		0,14		0,17		0,19		0,21		0,22
6	986,83	1,06	985,77	1,03	984,74	0,99	983,75	0,96	982,79	0,94	981,85	0,90	980,95	0,88	980,07	0,87	979,20	0,85	978,35	0,84	977,51	0,83	976,68	0,83
	0,08		0,09		0,09		0,10		0,12		0,13		0,15		0,16		0,18		0,19		0,21		0,23
7	986,75	1,07	985,68	1,03	984,65	1,00	983,65	0,98	982,67	0,95	981,72	0,92	980,80	0,89	979,91	0,89	979,02	0,86	978,16	0,86	977,30	0,85	976,45	0,85
	0,08		0,09		0,11		0,13		0,13		0,14		0,15		0,18		0,19		0,21		0,23		0,25
8	986,67	1,08	985,59	1,05	984,54	1,02	983,52	0,98	982,54	0,96	981,58	0,93	980,65	0,92	979,73	0,90	978,83	0,88	977,95	0,88	977,07	0,87	976,20	0,87
	0,10		0,11		0,12		0,12		0,14		0,16		0,18		0,19		0,21		0,22		0,24		0,26
9	986,57	1,09	985,48	1,06	984,42	1,02	983,40	1,00	982,40	0,98	981,42	0,95	980,47	0,93	979,54	0,92	978,62	0,89	977,73	0,90	976,83	0,89	975,94	0,89
	0,11		0,12		0,12		0,14		0,16		0,17		0,18		0,20		0,20		0,23		0,24		0,26
10	986,46	1,10	985,36	1,06	984,30	1,04	983,26	1,02	982,24	0,99	981,25	0,96	980,29	0,95	979,34	092	978,42	0,92	977,50	0,91	976,59	0,91	975,63	0,91
	0,12		0,13		0,14		0,16		0,16		0,17		0,19		0,20		0,23		0,25		0,27		0,29
11	986,34	1,11	985,23	1,08	984,16	1,06	983,10	1,02	982,08	1,00	981,08	0,98	980,10	0,96	979,14	0,95	978,19	0,94	977,25	0,93	976,32	0,93	975,39	0,92
	0,13		0,14		0,16		0,16		0,18		0,19		0,21		0,22		0,24		0,25		0,27		0,28
12	986,21	1,12	985,09	1,09	984,00	1,06	982,94	1,04	981,90	1,01	980,89	1,00	979,89	0,97	978,92	0,97	977,95	0,95	977,00	0,95	976,05	0,94	975,11	0,95
	0,15		0,16		0,16		0,18		0,19		0,20		0,21		0,23		0,24		0,26		0,28		0,30
13	986,06	1,13	984,93	1,09	983,84	1,08	982,76	1,05	981,71	1,02	980,69	1,01	979,68	0,99	978,69	0,98	977,71	0,97	976,74	0,97	975,77	0,96	974,81	0,96
	0,16		0,16		0,18		0,18		0,20		0,22		0,23		0,24		0,26		0,27		0,28		0,30
14	985,90	1,13	984,77	1,11	983,66	1,08	982,58	1,07	981,51	1,04	980,47	1,02	979,45	1,00	978,45	1,00	977,45	0,98	976,47	0,98	975,49	0,98	975,51	0,98
	0,17		0,18		0,19		0,20		0,21		0,22		0,24		0,25		0,26		0,28		0,30		0,32
15	985,73	1,14	984,59	1,12	983,47	1,09	982,38	1,08	981,30	1,05	960,25	1,04	979,21	1,01	978,20	1,01	977,19	1,00	976,19	1,00	975,19	1,00	974,19	1,00
	0,18		0,19		0,20		0,22		0,22		0,24		0,24		0,27		0,28		0,30		0,31		0,32
16	985,55	1,15	984,40	1,13	983,27	1,11	982,16	1,08	981,08	1,07	980,01	1,04	978,97	1,04	977,93	1,02	976,91	1,02	975,89	1,01	974,88	1,01	973,87	1,02
	0,19		0,20		0,21		0,22		0,23		0,24		0,26		0,27		0,29		0,30		0,32		0,33
17	985,36	1,16	984,20	1,14	983,06	1,12	981,94	1,09	980,85	1,08	979,77	1,06	978,71	1,05	977,66	1,04	976,62	1,03	975,59	1,03	974,56	1,02	973,54	1,04
	0,21		0,22		0,22		0,23		0,25		0,26		0:27		0,28		0,29		0,31		0,32		0,35
18	985,15	1,17	983,98	1,14	982,84	1,13	981,71	1,11	980,60	1,09	979,51	1,07	978,44	1,06	977,38	1,05	976,33	1,05	975,28	1,04	974,21	1,05	973,19	1,05
	0,21		0,22		0,24		0,24		0,25		0,26		0,28		0,29		0,31		0,32		0,34		0,35
19	984,94	1,18	983,76	1,16	982,60	1,13	981,47	1,12	980,35	1,10	979,25	1,09	978,16	1,07	977,09	1,07	976,02	1,06	974,96	1,06	973,90	1,06	972,84	1,06
	0,23		0,24		0,24		0,26		0,27		0,28		0,29		0,30		0,31		0,33		0,34		0,36
20	984,71	1,19	983,52	1,16	982,36	1,15	981,21	1,13	980,08	1,11	978,97	1,10	977,87	1,08	976,79	1,08	975,71	1,08	974,63	1,07	973,56	1,08	972,48	1,08
	0,24		0,24		0,26		0,26		0,27		0,28		0,29		0,31		0,33		0,34		0,36		0,37
21	984,47	1,19	983,28	1,18	982,10	1,15	980,95	1,14	978,81	1,12	978,69	1,11	977,58	1,10	976,48	1,10	975,38	1,09	974,29	1,09	973,20	1,09	972,11	1,09
	0,24		0,26		0,28		0,29		0,30		0,31		0,33		0,33		0,35		0,35		0,36		0,37
22	984,23	1,21	983,02	1,18	981,84	1,17	980,67	1,15	979,52	1,13	978,39	1,12	977,27	1,12	976,15	1,10	975,05	1,11	973,94	1,10	972,84	1,10	971,74	1,12
	0,26		0,26		0,27		0,28		0,29		0,31		0,32		0,33		0,35		0,35		0,37		0,39
23	983,97	1,20	982,77	1,20	981,57	1,18	980,39	1,16	979,23	1,15	978,08	1,13	976,95	1,13	975,82	1,12	974,70	1,11	973,59	1,12	972,47	1,12	972,47	1,12
	0,27		0,29		0,29		0,29		0,30		0,31		0,33		0,33		0,35		0,37		0,38		0,40
24	983,70	1,22	982,48	1,20	981,28	1,18	980,10	1,17	978,93	1,16	977,77	1,15	976,62	1,13	975,49	1,14	974,35	1,13	973,22	1,13	972,09	1,14	970,95	1,14
	0,28		0,28		0,29		0,31		0,32		0,33		0,33		0,35		0,36		0,37		0,39		0,40
25	983,42	1,22	982,20	1,21	980,99	1,20	979,79	1,18	978,61	1,17	977,44	1,15	976,29	1,15	975,14	1,15	973,99	1,14	972,85	1,15	971,70	1,15	970,55	1,16
	0,28		0,30		0,31		0,31		0,32		0,33		0,35		0,36		0,37		0,39		0,40		0,41
26	983,14	1,24	981,90	1,22	980,68	1,20	979,48	1,19	978,29	1,18	977,11	1,17	975,94	1,16	974,78	1,16	973,62	1,16	972,46	1,16	971,30	1,16	970,14	1,17
	0,30		0,30		0,31		0,32		0,33		0,34		0,35		0,36		0,38		0,39		0,40		0,42
27	982,84	1,24	981,60	1,23	980,37	1,21	979,16	1,20	977,96	1,19	976,77	1,18	975,59	1,17	974,42	1,18	973,24	1,17	972,07	1,17	970,90	1,18	969,72	1,18
	0,31		0,32		0,32		0,33		0,34		0,35		0,36		0,38		0,38		0,40		0,41		0,43
28	982,53	1,25	981,28	1,23	980,05	1,22	978,83	1,21	977,62	1,20	976,42	1,19	975,23	1,19	974,04	1,18	972,86	1,19	971,67	1,18	970,49	1,20	969,29	1,20
	0,31		0,32		0,33		0,34		0,35		0,36		0,37		0,38		0,40		0,40		0,42		0,43
29	982,22	1,26	980,96	1,24	979,72	1,23	978,49	1,22	977,27	1,21	976,06	1,20	974,86	1,20	973,66	1,20	972,46	1,19	971,27	1,20	970,07	1,21	968,86	1,22
	0,32		0,33		0,34		0,35		0,36		0,37		0,38		0,40		0,41		0,43		0,44		0,48
30	981,90	1,27	980,63	1,25	979,38	1,24	978,14	1,23	976,91	1,22	975,69	1,21	974,48	1,22	973,36	1,21	972,05	1,21	970,84	1,21	969,63	1,22	968,41	1,23
	0,34		0,34		0,35		0,36		0,37		0,38		0,40		0,40		0,41		0,42		0,44		0,45
31	981,56	1,27	980,29	1,26	979,03	1,25	977,78	1,24	976,54	1,23	975,31	1,23	974,08	1,22	972,86	1,22	971,64	1,22	970,42	1,23	969,19	1,23	968,11	1,24
	0,35		0,36		0,36		0,37		0,38		0,39		0,39		0,40		0,42		0,43		0,44		0,46
32	981,21	1,38	979,93	1,26	978,67	1,26	977,41	1,25	976,16	1,24	974,92	1,23	973,69	1,33	972,46	1,24	971,22	1,23	969,99	1,24	968,75	1,25	967,50	1,25
	0,35		0,35		0,37		0,37		0,38		0,39		0,40		0,42		0,42		0,44		0,45		0,46
33	980,86	1,28	979,58	1,28	978,30	1,26	977,04	1,26	975,78	1,25	974,53	1,24	973,29	1,25	972,04	1,24	970,80	1,25	969,55	1,25	968,30	1,26	967,04	1,27
	0,36		0,37		0,37		0,38		0,39		0,40		0,41		0,42		0,43		0,44		0,46		0,47
34	980,50	1,29	979,21	1,28	977,93	1,27	976,66	1,27	975,39	1,26	974,13	1,25	972,88	1,26	971,62	1,25	970,37	1,26	969,11	1,27	967,78	1,27	966,57	1,29
	0,36		0,37		0,38		0,39		0,39		0,40		0,42		0,42		0,44		0,46		0,46		0,48
35	980,14	1,30	978,84	1,29	977,55	1,28	976,27	1,27	975,00	1,27	973,73	1,27	972,46	1,26	971,20	1,27	969,93	1,28	968,65	1,27	967,38	1,29	966,09	1,30
	0,37		0,38		0,38		0,39		0,40		0,41		0,42		0,44		0,45		0,45		0,47		0,48
36	979,77	1,31	978,46	1,29	977,17	1,29	975,88	1,28	974,60	1,28	973,32	1,28	972,04	1,28	970,76	1,28	969,48	1,28	968,20	1,29	966,91	1,30	965,61	1,32
	0,39		0,39		0,40		0,40		0,41		0,42		0,43		0,44		0,45		0,47		0,48		0,49
37	978,38	1,31	978,07	1,30	976,77	1,29	975,48	1,29	974,19	1,29	972,90	1,29	971,61	1,29	970,32	1,29	969,03	1,30	967,73	1,30	966,43	1,31	965,12	1,33
	0,38		0,39		0,40		0,41		0,42		0,43		0,44		0,45		0,46		0,47		0,49		0,50
38	979,00	1,32	977,68	1,31	976,37	1,30	975,07	1,30	973,77	1,30	972,47	1,30	971,17	1,30	969,87	1,30	968,57	1,31	967,26	1,32	965,94	1,32	964,62	1,34
	0,40		0,40		0,41		0,42		0,42		0,43		0,44		0,45		0,47		0,48		0,49		0,50
39	978,60	1,32	977,28	1,32	975,96	1,31	974,65	1,30	973,35	1,31	972,04	1,31	970,73	1,31	969,42	1,32	968,10	1,32	966,78	1,33	965,45	1,33	964,12	1,36
	0,40		0,41		0,41		0,42		0,43		0,44		0,45		0,46		0,47		0,48		0,50		0,51
40	978,20	1,33	976,87	1,32	975,55	1,32	974,23	1,31	972,92	1,32	971,60	1,32	970,28	1,32	968,96	1,33	967,63	1,33	966,30	1,34	964,96	1,35	963,61	1,37

t°C	Алкохол в об. %

0	978,56	0,70	977,86	0,70	977,16	0,69	976,47	0,71	975,76	0,71	975,05	0,72	974,33	0,75	973,58	0,77	972,81	0,80	972,01	0,83	971,18	0,87	970,31	0,90
	0,14		0,17		0,19		0,22		0,24		0,26		0,29		0,31		0,34		0,36		0,39		0,41
1	978,42	0,73	977,69	0,72	976,97	0,72	976,25	0,73	975,52	0,73	974,79	0,75	974,04	0,77	973,27	0,80	972,47	0,82	971,65	0,86	970,79	0,89	969,90	0,92
	0,16		0,18		0,20		0,23		0,25		0,28		0,30		0,32		0,34		0,37		0,39		0,41
2	978,26	0,75	977,51	0,74	976,77	0,75	976,02	0,75	975,27	0,76	974,51	0,77	973,74	0,79	972,95	0,82	972,13	0,85	971,28	0,88	970,40	0,91	969,49	0,95
	0,17		0,19		0,22		0,23		0,26		0,28		0,3О		0,33		0,36		0,38		0,40		0,42
3	978,09	0,77	977,32	0,77	976,55	0,76	975,79	0,78	975,01	0,78	974,23	0,80	973,43	0,81	972,62	0,85	971,77	0,87	970,90	0,90	970,00	0,93	969,07	0,98
	0,18		0,20		0,22		0,25		0,27		0,29		0,31		0,34		0,36		0,38		0,40		0,43
4	977,91	0,79	977,12	0,79	976,33	0,79	975,54	0,80	974,94	0,80	973,94	0,82	973,12	0,84	972,28	0,87	971,41	0,89	970,52	0,92	969,60	0,96	968,64	1,00
	0,19		0,22		0,23		0,26		0,27		0,30		0,33		0,35		0,37		0,39		0,42		0,44
5	977,72	0,82	976,90	0,80	976,10	0,82	975,28	0,81	974,47	0,83	973,64	0,85	972,79	0,86	971,93	0,89	971,04	0,91	970,13	0,95	969,18	0,98	968,20	1,01
	0,21		0,22		0,25		0,26		0,29		0,31		0,33		0,35		0,37		0,40		0,42		0,44
6	977,51	0,83	976,68	0,83	975,85	0,83	975,02	0,84	974,18	0,85	973,33	0,87	972,46	0,86	971,58	0,91	970,67	0,94	969,73	0,97	968,76	1,00	967,76	1,03
	0,21		0,23		0,25		0,28		0,30		0,32		0,34		0,36		0,38		0,40		0,42		0,44
7	977,30	0,85	976,45	0,85	975,60	0,86	974,74	0,86	973,88	0,87	973,01	0,89	972,12	0,90	971,22	0,93	970,29	0,96	969,33	0,99	968,34	1,02	967,32	1,06
	0,23		0,25		0,27		0,28		0,31		0,33		0,35		0,37		0,40		0,42		0,43		0,46
8	977,07	0,87	976,20	0,87	975,33	0,87	974,46	0,89	973,57	0,89	972,68	0,91	971,77	0,92	970,85	0,96	969,89	0,98	968,91	1,00	967,91	1,05	966,86	1,07
	0,24		0,26		0,28		0,30		0,31		0,34		0,35		0,38		0,39		0,41		0,44		0,46
9	976,83	0,89	975,94	0,89	975,05	0,89	974,16	0,90	973,26	0,92	972,34	0,92	971,42	0,95	970,47	0,97	969,50	1,00	968,50	1,03	967,47	1,07	966,40	1,09
	0,24		0,26		0,28		0,30		0,33		0,34		0,37		0,39		0,41		0,43		0,45		0,46
10	976,59	0,91	975,68	0,91	974,77	0,91	973,86	0,93	972,93	0,93	972,00	0,95	971,05	0,97	970,08	0,99	969,09	1,02	968,07	1,05	967,02	1,08	965,94	1,12
	0,27		0,29		0,30		0,33		0,34		0,36		0,38		0,40		0,42		0,44		0,46		0,47
11	976,32	0,93	975,39	0,92	974,47	0,94	971,53	0,94	972,59	0,95	971,64	0,97	970,67	0,99	969,68	1,01	968,67	1,04	967,63	1,07	966,56	1,09	965,47	1,13
	0,27		0,28		0,31		0,32		0,34		0,36		0,38		0,40		0,42		0,44		0,45		0,48
12	976,05	0,91	975,11	0,95	974,16	0,95	973,21	0,96	972,25	0,97	971,28	0,99	970,29	1,01	969,28	1,03	968,25	1,06	967,19	1,08	966,11	1,12	964,99	1,15
	0,28		0,30		0,31		0,33		0,35		0,37		0,39		0,41		0,43		0,45		0,47		0,49
13	975,77	0,96	974,81	0,96	971,85	0,97	972,88	0,98	971,90	0,99	970,91	1,01	969,90	1,03	968,87	1,05	967,82	1,08	966,74	1,10	965,64	1,14	964,50	1,17
	0,28		0,30		0,32		0,34		0,36		0,38		0,40		0,41		0,43		0,45		0,47		0,49
14	975,49	0,98	974,51	0,98	973,53	0,99	972,54	1,00	971,54	1,01	970,53	1,03	969,50	1,04	968,46	1,07	967,39	1,10	966,29	1,12	965,17	1,16	964,01	1,19
	0,30		0,32		0,34		0,35		0,37		0,39		0,40		0,42		0,44		0,46		0,48		0,49
15	975,19	1,00	974,19	1,00	971,19	1,00	972,19	1,02	971,17	1,03	970,14	1,04	969,10	1,06	968,04	1,09	966,95	1,12	965,83	1,14	964,69	1,17	963,52	1,21
	0,31		0,32		0,34		0,36		0,37		0,39		0,41		0,43		0,45		0,46		0,48		0,51
16	974,88	1,01	973,87	1,02	972,85	1,02	971,83	1,03	970,80	1,05	969,75	1,06	968,69	1,08	967,61	1,11	966,50	1,13	965,37	1,16	964,21	1,20	963,01	1,22
	0,32		0,33		0,35		0,37		0,39		0,40		0,42		0,44		0,45		0,48		0,50		0,50
17	974,56	1,02	973,54	1,04	972,50	1,04	971,46	1,05	970,41	1,06	969,35	1,08	968,27	1,10	967,17	1,12	966,05	1,16	964,89	1,18	963,71	1,20	962,51	1,24
	0,32		0,35		0,36		0,37		0,39		0,41		0,43		0,45		0,47		0,48		0,49		0,52
18	974,24	1,05	971,19	1,05	972,14	1,05	971,09	1,07	970,02	1,08	968,94	1,10	967,84	1,12	966,72	1,14	965,58	1,17	964,41	1,19	963,22	1,23	961,99	1,25
	0,34		0,35		0,36		0,39		0,40		0,42		0,43		0,45		0,47		0,48		0,50		0,52
19	973,90	1,06	972,84	1,06	971,78	1,08	970,70	1,08	969,62	1,10	968,52	1,11	967,41	1,14	966,27	1,16	965,11	1,18	963,93	1,21	962,72	1,25	961,47	1,27
	0,34		0,36		0,38		0,39		0,41		0,42		0,45		0,46		0,47		0,49		0,51		0,52
20	973,56	1,08	972,48	1,08	971,40	1,09	970,31	1,10	969,21	1,11	968,10	1,14	966,96	1,15	965,81	1,17	964,64	1,20	963,44	1,23	962,21	1,26	960,95	1,29
	0,36		0,37		0,38		0,40		0,42		0,44		0,45		0,46		0,49		0,50		0,52		0,53
21	973,20	1,09	972,11	1,09	971,02	1,11	969,91	1,12	968,79	1,13	967,66	1,15	966,51	1,16	965,15	1,20	964,15	1,21	962,94	1,25	961,69	1,27	960,42	1,31
	0,36		0,37		0,40		0,41		0,42		0,44		0,45		0,48		0,49		0,51		0,52		0,54
22	972,84	1,10	971,74	1,12	970,62	1,12	969,50	1,13	968,37	1,15	967,22	1,16	966,06	1,19	964,87	1,21	963,66	1,23	962,43	1,26	961,17	1,29	959,88	1,32
	0,37		0,39		0,40		0,42		0,41		0,45		0,47		0,48		0,49		0,51		0,51		0,55
23	972,47	1,12	971,38	1,13	970,22	1,14	969,08	1,14	967,94	1,17	966,77	1,18	965,59	1,20	964,39	1,22	963,17	1,25	964,92	1,28	960,64	1,31	959,13	1,33
	0,38		0,40		0,41		0,42		0,44		0,45		0,47		0,49		0,51		0,52		0,54		0,55
24	972,09	1,14	970,95	1,14	969,81	1,15	968,66	1,16	967,50	1,18	966,32	1,20	965,12	1,22	961,90	1,24	962,66	1,26	961,40	1,30	960,10	1,32	958,78	1,35
	0,39		0,40		0,42		0,43		0,45		0,47		0,48		0,49		0,51		0,53		0,54		0,55
25	971,70	1,15	970,5	1,16	969,39	1,16	968,23	1,18	967,05	1,20	965,85	1,21	964,64	1,23	963,41	1,26	962,15	1,28	960,87	1,31	959,56	1,33	958,23	1,37
	0,40		0,41		0,42		0,44		0,46		0,47		0,49		0,50		0,51		0,53		0,54		0,57
26	971,30	1,16	970,14	1,17	968,97	1,18	967,79	1,20	966,59	1,21	965,38	1,23	964,15	1,24	962,91	1,27	961,64	1,30	960,34	1,32	959,02	1,36	957,66	1,38
	0,40		0,42		0,43		0,45		0,46		0,48		0,49		0,51		0,53		0,54		0,56		0,56
27	970,90	1,18	969,72	1,18	968,54	1,20	967,34	1,21	966,13	1,23	964,90	1,24	963,66	1,26	962,40	1,29	961,11	1,31	959,80	1,34	958,46	1,36	957,10	1,40
	0,41		0,43		0,45		0,46		0,47		0,48		0,50		0,52		0,54		0,56		0,57		0,59
28	970,49	1,20	969,29	1,20	968,09	1,21	966,88	1,22	965,66	1,24	964,42	1,26	963,16	1,28	961,88	1,31	960,57	1,33	959,24	1,35	957,89	1,38	956,51	1,41
	0,42		0,43		0,45		0,47		0,49		0,50		0,52		0,53		0,53		0,55		0,56		0,58
29	970,07	1,21	968,86	1,22	967,64	1,23	966,41	1,24	965,17	1,25	963,92	1,28	962,64	1,29	961,35	1,31	960,04	1,35	958,69	1,36	957,33	1,40	955,93	1,42
	0,44		0,45		0,46		0,47		0,49		0,50		0,51		0,53		0,55		0,55		0,58		0,58
30	969,63	1,22	968,41	1,23	967,18	1,24	965,94	1,26	964,68	1,26	963,42	1,29	962,13	1,31	960,82	1,33	959,49	1,35	958,14	1,39	956,75	1,40	955,35	1,44
	0,44		0,45		0,46		0,48		0,49		0,51		0,52		0,53		0,55		0,57		0,58		0,60
31	969,19	1,23	967,96	1,24	966,72	1,26	965,46	1,27	964,19	1,28	962,91	1,30	961,61	1,32	960,29	1,35	958,94	1,37	957,57	1,40	956,17	1,42	954,75	1,44
	0,44		0,46		0,47		0,48		0,50		0,51		0,53		0,54		0,55		0,57		0,58		0,59
32	968,75	1,25	967,50	1,25	966,25	1,27	964,98	1,29	963,69	1,29	962,40	1,32	961,08	1,33	959,75	1,36	958,39	1,39	957,00	1,41	955,59	1,43	954,16	1,46
	0,45		0,46		0,48		0,49		0,50		0,52		0,53		0,55		0,57		0,57		0,59		0,61
33	968,30	1,26	967,04	1,27	965,77	1,28	964,49	1,30	963,19	1,31	961,88	1,33	960,55	1,35	959,20	1,38	957,82	1,39	956,43	1,43	955,00	1,45	953,55	1,47
	0,46		0,47		0,49		0,50		0,51		0,53		0,54		0,56		0,56		0,59		0,59		0,60
34	967,84	1,27	966,57	1,29	965,28	1,29	963,99	1,31	962,68	1,33	961,35	1,34	960,01	1,37	958,64	1,38	957,26	1,42	955,84	1,43	954,41	1,46	952,95	1,49
	0,46		0,48		0,49		0,51		0,52		0,53		0,55		0,56		0,58		0,58		0,60		0,62
35	967,38	1,29	966,09	1,30	964,79	1,31	963,48	1,32	962,16	1,34	960,82	1,36	959,46	1,38	958,08	1,40	956,68	1,42	955,26	1,45	953,81	1,48	952,33	1,50
	0,47		0,48		0,50		0,51		0,53		0,54		0,55		0,57		0,58		0,60		0,61		0,62
36	966,91	1,30	965,61	1,32	964,29	1,32	962,97	1,34	961,63	1,35	960,28	1,37	958,91	1,40	957,51	1,41	956,10	1,44	954,66	1,46	953,20	1,49	951,71	1,51
	0,48		0,49		0,50		0,52		0,53		0,55		0,56		0,57		0,59		0,60		0,61		0,62
37	966,43	1,31	965,12	1,33	963,79	1,34	962,45	1,35	961,10	1,37	959,73	1,38	958,35	1,41	956,94	1,43	955,51	1,45	954,06	1,47	952,59	1,50	951,09	1,53
	0,49		0,50		0,51		0,52		0,54		0,55		0,57		0,58		0,59		0,60		0,62		0,63
38	965,94	1,32	964,62	1,34	963,28	1,35	961,93	1,37	960,56	1,38	959,18	1,40	957,78	1,42	956,36	1,44	954,92	1,46	953,46	1,49	951,97	1,51	950,46	1,54
	0,49		0,50		0,52		0,53		0,54		0,56		0,57		0,58		0,60		0,61		0,62		0,64
39	965,45	1,33	964,12	1,36	962,76	1,36	961,40	1,38	960,02	1,40	958,62	1,41	957,21	1,43	955,78	1,46	954,32	1,47	952,85	1,50	951,35	1,53	949,82	1,55
	0,49		0,51		0,52		0,54		0,55		0,56		0,58		0,59		0,60		0,62		0,63		0,64
40	964,96	1,35	963,61	1,37	962,24	1,38	960,86	1,39	959,47	1,41	958,06	1,43	956,63	1,44	955,19	1,47	953,72	1,49	952,23	1,51	950,72	1,54	949,18	1,57

Таблица II

Международна таблица за отчитане на алкохолното съдържание при 20°С

Корекция на алкохолното съдържание в зависимост от температурата

Добавя се или се изважда от алкохолното съдържание корекцията, посочена по-долу (спиртомер от обикновено стъкло)

Алкохол, отчетен при t°C

			0	1	2	3	4	5	6	7	8	9	10	11	12	13	14	15	16
	0°		0,76	0,77	0,82	0,87	0,95	1,04	1,16	1,31	1,49	1,70	1,95	2,26	2,62	3,03	3,49	4,02	4,56
	1°		0,81	0,83	0,87	0,92	1,00	1,09	1,20	1,35	1,52	1,73	1,97	2,26	2,59	2,97	3,40	3,87	4,36
	2°		0,85	0,87	0,92	0,97	1,04	1,13	1,24	1,38	1,54	1,74	1,97	2,24	2,54	2,89	3,29	3,72	4,17
Т	3°	Д	0,88	0,91	0,95	1,00	1,07	1,15	1,26	1,39	1,55	1,73	1,95	2,20	2,48	2,80	3,16	3,55	3,95
е	4°	о	0,90	0,92	0,97	1,02	1,09	1,17	1,27	1,40	1,55	1,72	1,92	2,15	2,41	2,71	3,03	3,38	3,75
м	5°	б	0,91	0,93	0,98	1,03	1,10	1,17	1,27	1,39	1,53	1,69	1,87	2,08	2,33	2,60	2,89	3,21	3,54
п	6°	а	0,92	0,94	0,98	1,02	1,09	1,16	1,25	1,37	1,50	1,65	1,82	2,01	2,23	2,47	2,74	3,02	3,32
е	7°	в	0,91	0,93	0,97	1,01	1,07	1,14	1,23	1,33	1,45	1,59	1,75	1,92	2,12	2,34	2,58	2,83	3,10
р	8°	я	0,89	0,91	0,94	0,98	1,04	1,11	1,19	1,28	1,39	1,52	1,66	1,82	2,00	2,20	2,42	2,65	2,88
а	9°		0,86	0,88	0,91	0,95	1,01	1,07	1,14	1,23	1,33	1,44	1,57	1,71	1,87	2,05	2,24	2,44	2,65
т	10°	с	0,82	0,84	0,87	0,91	0,96	1,01	1,08	1,16	1,25	1,35	1,47	1,60	1,74	1,89	2,06	2,24	2,43
у	11°	е	0,78	0,79	0,82	0,86	0,90	0,95	1,01	1,08	1,16	1,25	1,36	1,47	1,60	1,73	1,88	2,03	2,20
р	12°		0,72	0,74	0,76	0,79	0,83	0,88	0,93	0,99	1,07	1,15	1,24	1,34	1,44	1,56	1,69	1,82	1,96
а	13°		0,66	0,67	0,69	0,72	0,76	0,80	0,84	0,90	0,96	1,03	1,11	1,19	1,28	1,38	1,49	1,61	1,73
	14°		0,59	0,60	0,62	0,64	0,67	0,71	0,74	0,79	0,85	0,91	0,97	1,04	1,12	1,20	1,29	1,39	1,49
	15°		0,51	0,52	0,53	0,55	0,58	0,61	0,64	0,68	0,73	0,77	0,83	0,89	0,95	1,02	1,09	1,16	1,24
	16°		0,42	0,43	0,44	0,46	0,48	0,50	0,53	0,56	0,60	0,63	0,67	0,72	0,77	0,82	0,88	0,94	1,00
	17°		0,33	0,33	0,34	0,35	0,37	0,39	0,41	0,43	0,46	0,48	0,51	0,55	0,59	0,62	0,67	0,71	0,75
	18°		0,23	0,23	0,23	0,24	0,25	0,26	0,27	0,29	0,31	0,33	0,35	0,37	0,40	0,42	0,45	0,48	0,51
	19°		0,12	0,12	0,12	0,12	0,13	0,13	0,14	0,15	0,16	0,17	0,18	0,19	0,20	0,21	0,23	0,24	0,25

Алкохол, отчетен при t°C

			0	1	2	3	4	5	6	7	8	9	10	11	12	13	14	15	16
	21°			0,13	0,13	0,13	0,14	0,14	0,15	0,16	0,17	0,18	0,19	0,19	0,20	0,22	0,23	0,25	0,26
	22°			0,26	0,27	0,28	0,29	0,30	0,31	0,32	0,34	0,36	0,37	0,39	0,41	0,44	0,47	0,49	0,52
	23°			0,40	0,41	0,42	0,44	0,45	0,47	0,49	0,51	0,54	0,57	0,60	0,63	0,66	0,70	0,74	0,78
	24°			0,55	0,56	0,58	0,60	0,62	0,64	0,67	0,70	0,73	0,77	0,81	0,85	0,89	0,94	0,99	1,04
T	25°	И		0,69	0,71	0,73	0,76	0,79	0,82	0,85	0,89	0,93	0,97	1,02	1,07	1,13	1,19	1,25	1,31
е	26°	з		0,85	0,87	0,90	0,93	0,96	1,00	1,04	1,08	1,13	1,18	1,24	1,30	1,36	1,43	1,50	1,57
м	27°	в			1,03	1,07	1,11	1,15	1,19	1,23	1,28	1,34	1,40	1,46	1,53	1,60	1,68	1,76	1,84
п	28°	а			1,21	1,25	1,29	1,33	1,38	1,43	1,49	1,55	1,62	1,69	1,77	1,85	1,93	2,02	2,11
е	29°	ж			1,39	1,43	1,47	1,52	1,58	1,63	1,70	1,76	1,84	1,92	2,01	2,10	2,19	2,29	2,39
р	30°	д			1,57	1,61	1,66	1,72	1,78	1,84	1,91	1,98	2,07	2,15	2,25	2,35	2,45	2,56	2,67
а	31°	а			1,75	1,80	1,86	1,92	1,98	2,05	2,13	2,21	2,30	2,39	2,49	2,60	2,71	2,83	2,94
т	32°				1,94	2,00	2,06	2,13	2,20	2,27	2,35	2,44	2,53	2,63	2,74	2,86	2,97	3,09	3,22
у	33°	с				2,20	2,27	2,34	2,42	2,50	2,58	2,67	2,77	2,88	2,99	3,12	3,24	3,37	3,51
р	34°	е				2,41	2,48	2,56	2,64	2,72	2,81	2,91	3,02	3,13	3,25	3,38	3,51	3,65	3,79
а	35°					2,62	2,70	2,78	2,86	2,95	3,05	3,16	3,27	3,39	3,51	3,64	3,78	3,93	4,08
	36°					2,83	2,91	3,00	3,09	3,19	3,29	3,41	3,53	3,65	3,78	3,91	4,05	4,21	4,37
	37°						3,13	3,23	3,33	3,43	3,54	3,65	3,78	3,91	4,04	4,18	4,33	4,49	4,65
	38°						3,36	3,47	3,57	3,68	3,79	3,91	4,03	4,17	4,31	4,46	4,61	4,77	4,94
	39°						3,59	3,70	3,81	3,93	4,05	4,17	4,30	4,44	4,58	4,74	4,90	5,06	5,23
	40°						3,82	3,94	4,06	4,18	4,31	4,44	4,57	4,71	4,86	5,02	5,19	5,36	5,53

Алкохол, отчетен при t°C

			14	15	16	17	18	19	20	21	22	23	24	25	26	27	28	29	30
	0°		3,49	4,02	4,56	5,11	5,65	6,16	6,63	7,05	7,39	7,67	7,91	8,07	8,20	8,30	8,36	8,39	8,40
	1°		3,40	3,87	4,36	4,86	5,35	5,82	6,26	6,64	6,96	7,23	7,45	7,62	7,75	7,85	7,91	7,95	7,96
	2°		3,29	3,72	4,17	4,61	5,05	5,49	5,89	6,25	6,55	6,81	7,02	7,18	7,31	7,40	7,47	7,51	7,53
	3°		3,16	3,55	3,95	4,36	4,77	5,17	5,53	5,85	6,14	6,39	6,59	6,74	6,86	6,97	7,03	7,07	7,09
	4°		3,03	3,38	3,75	4,11	4,48	4,84	5,17	5,48	5,74	5,97	6,16	6,31	6,43	6,53	6,59	6,63	6,66
Т	5°	Д	2,89	3,21	3,54	3,86	4,20	4,52	4,83	5,11	5,35	5,56	5,74	5,89	6,00	6,10	6,16	6,20	6,23
е	6°	о	2,74	3,02	3,32	3,61	3,91	4,21	4,49	4,74	4,96	5,16	5,33	5,47	5,58	5,67	5,73	5,77	5,80
м	7°	б	2,58	2,83	3,10	3,36	3,63	3,90	4,15	4,38	4,58	4,77	4,92	5,05	5,15	5,24	5,30	5,34	5,37
п	8°	а	2,42	2,65	2,88	3,11	3,35	3,59	3,81	4,02	4,21	4,38	4,52	4,64	4,74	4,81	4,87	4,92	4,95
е	9°	в	2,24	2,44	2,65	2,86	3,07	3,28	3,48	3,67	3,84	3,99	4,12	4,23	4,32	4,39	4,45	4,50	4,53
р	10°	я	2,06	2,24	2,43	2,61	2,80	2,98	3,16	3,33	3,48	3,61	3,73	3,83	3,91	3,98	4,03	4,08	4,11
а	11°		1,88	2,03	2,20	2,36	2,52	2,68	2,83	2,98	3,12	3,24	3,34	3,43	3,50	3,57	3,62	3,66	3,69
т	12°	с	1,69	1,82	1,96	2,10	2,24	2,38	2,51	2,64	2,76	2,87	2,96	3,04	3,10	3,16	3,21	3,25	3,27
у	13°	е	1,49	1,61	1,73	1,84	1,96	2,08	2,20	2,31	2,41	2,50	2,58	2,65	2,71	2,76	2,80	2,83	2,85
р	14°		1,29	1,39	1,49	1,58	1,68	1,78	1,88	1,97	2,06	2,13	2,20	2,26	2,31	2,36	2,39	2,42	2,44
а	15°		1,09	1,16	1,24	1,32	1,40	1,48	1,56	1,64	1,71	1,77	1,83	1,88	1,92	1,96	1,98	2,01	2,03
	16°		0,88	0,94	1,00	1,06	1,12	1,19	1,25	1,31	1,36	1,41	1,46	1,50	1,53	1,56	1,58	1,60	1,62
	17°		0,67	0,71	0,75	0,80	0,84	0,89	0,94	0,98	1,02	1,05	1,09	1,12	1,14	1,17	1,18	1,20	1,21
	18°		0,45	0,48	0,51	0,53	0,56	0,59	0,62	0,65	0,68	0,70	0,72	0,74	0,76	0,78	0,79	0,80	0,81
	19°		0,23	0,24	0,25	0,27	0,28	0,30	0,31	0,33	0,34	0,35	0,36	0,37	0,38	0,39	0,40	0,40	0,41

Алкохол, отчетен при t°C

			14	15	16	17	18	19	20	21	22	23	24	25	26	27	28	29	30
	21°		0,23	0,25	0,26	0,28	0,29	0,30	6,31	0,33	0,34	0,35	0,35	0,37	0,38	0,38	0,39	0,39	0,40
	22°		0,47	0,49	0,52	0,55	0,57	0,60	0,62	0,65	0,67	0,70	0,72	0,74	0,75	0,76	0,78	0,79	0,80
	23°		0,70	0,74	0,78	0,82	0,86	0,90	0,93	0,97	1,01	1,04	1,07	1,10	1,12	1,15	1,17	1,18	1,19
Т	24°	И	0,94	0,99	1,04	1,10	1,15	1,20	1,25	1,29	1,34	1,39	1,43	1,46	1,50	1,53	1,55	1,57	1,59
е	25°	з	1,19	1,25	1,31	1,37	1,43	1,49	1,56	1,62	1,68	1,73	1,78	1,83	1,87	1,90	1,94	1,97	1,99
м	26°	в	1,43	1,50	1,57	1,65	1,73	1,80	1,87	1,94	2,01	2,07	2,13	2,19	2,24	2,28	2,32	2,35	2,38
п	27°	а	1,68	1,76	1,84	1,93	2,01	2,10	2,18	2,26	2,34	2,41	2,48	2,55	2,61	2,66	2,70	2,74	2,77
е	28°	ж	1,93	2,02	2,11	2,21	2,31	2,40	2,49	2,58	2,67	2,76	2,83	2,90	2,98	3,03	3,08	3,13	3,17
р	29°	д	2,19	2,29	2,39	2,50	2,60	2,70	2,81	2,91	3,00	3,09	3,18	3,26	3,34	3,40	3,46	3,51	3,55
а	30°	а	2,45	2,56	2,67	2,78	2,90	3,01	3,12	3,23	3,34	3,44	3,53	3,62	3,70	3,77	3,84	3,90	3,95
т	31°		2,71	2,83	2,94	3,07	3,19	3,31	3,43	3,55	3,67	3,78	3,88	3,98	4,07	4,15	4,22	4,28	4,33
у	32°	с	2,97	3,09	3,22	3,36	3,49	3,62	3,74	3,87	4,00	4,11	4,22	4,33	4,43	4,51	4,59	4,66	4,72
р	33°	е	3,24	3,37	3,51	3,65	3,79	3,92	4,06	4,20	4,33	4,45	4,57	4,68	4,79	4,88	4,97	5,04	5,10
а	34°		3,51	3,65	3,79	3,94	4,09	4,23	4,37	4,52	4,66	4,79	4,91	5,03	5,15	5,25	5,34	5,42	5,49
	35°		3,78	3,93	4,08	4,23	4,38	4,53	4,69	4,84	4,98	5,12	5,26	5,38	5,50	5,61	5,71	5,80	5,87
	36°		4,05	4,21	4,37	4,52	4,68	4,84	5,00	5,16	5,31	5,46	5,60	5,73	5,86	5,97	6,08	6,17	6,25
	37°		4,33	4,49	4,65	4,82	4,98	5,15	5,31	5,48	5,64	5,80	5,95	6,09	6,22	6,33	6,44	6,54	6,63
	38°		4,61	4,77	4,94	5,12	5,29	5,46	5,63	5,80	5,97	6,13	6,29	6,43	6,57	6,69	6,81	6,92	7,01
	39°		4,90	5,06	5,23	5,41	5,59	5,77	5,94	6,12	6,30	6,47	6,63	6,78	6,93	7,06	7,18	7,29	7,39
	40°		5,19	5,36	5,53	5,71	5,90	6,08	6,26	6,44	6,62	6,80	6,97	7,13	7,28	7,41	7,54	7,66	7,76

Таблица III

Международна таблица за отчитане на алкохолното съдържание при 20°С

Таблица за плътността на водоалкохолни смеси, измерена с апарати от обикновено стъкло

Плътностите при t°C са коригирани с отчитане на подемната сила на въздуха

t°C	Алкохол в об. %

0	999,34	1,52	997,82	1,45	996,37	1,39	994,98	1,35	993,63	1,29	992,34	1,24	991,10	1,18	989,92	1,15	988,77	1,09	987,68	1,05	986,63	1,00	985,63	0,96
	-0,09		-0,09		-0,09		-0,08		-0,08		-0,08		-0,07		-0,05		-0,05		-0,04		-0,03		-0,02
1	999,43	1,52	997,91	1,45	996,46	1,40	995,06	1,35	993,71	1,29	992,42	1,25	991,17	1,20	989,97	1,15	988,82	1,10	987,72	1,06	986,66	1,01	985,65	0,97
	-0,06		-0,06		-0,06		-0,06		-0,06		-0,05		-0,05		-0,04		-0,03		-0,02		-0,02		-0,01
2	999,49	1,52	997,97	1,40	996,52	1,40	995,12	1,35	993,77	1,30	992,47	1,25	991,22	1,21	99001	1,16	988,85	1,11	987,74	1,06	986,68	1,02	985,66	0,98
	-0,05		-0,05		-0,04		-0,04		-0,04		-0,04		-0,03		-0,03		-0,03		-0,02		0,00		0,01
3	999,54	1,52	998,02	1,46	99656	1,40	995,16	1,35	993,81	1,30	992,51	1,26	991,25	1,21	990,04	1,16	988,88	1,12	987,76	1,08	986,68	1,03	985,65	0,99
	-0,03		-0,03		-0,03		-0,03		-0,02		-0,02		-0,02		-0,01		0,00		0,01		0,01		0,02
4	999,57	1,52	998,05	1,46	996,59	1,40	995,19	1,36	993,83	1,30	992,53	1,26	991,27	1,22	990,05	1,17	988,88	1,13	987,75	1,08	986,67	1,04	985,63	1,00
	-0,02		-0,02		-0,02		-0,02		-0,02		-0,01		0,00		0,00		0,00		0,01		0,02		0,03
5	999,59	1,52	998,07	1,46	996,61	1,40	995,21	1,36	993,85	1,31	992,54	1,27	991,27	1,22	990,05	1,17	988,88	1,14	987,74	1,09	986,65	1,05	985,60	1,02
	0,00		0,00		0,00		0,01		0,01		0,01		0,01		0,02		0,03		0,03		0,04		0,06
6	999,59	1,5	998,07	1,46	996,61	1,41	995,20	1,36	993,84	1,31	992,53	1,27	991,26	1,23	990,03	1,18	988,85	1,14	987,71	1,10	986,61	1,07	985,54	1,02
	0,01		0,01		0,01		0,01		0,01		0,02		0,02		0,02		0,03		0,04		0,05		0,06
7	999,58	1,52	998,06	1,46	996,60	1,41	995,19	1,36	993,83	1,32	992,51	1,27	991,24	1,23	990,01	1,19	988,82	1,15	987,67	1,11	986,56	1,08	985,48	1,04
	0,03		0,03		0,03		0,03		0,04		0,04		0,05		0,05		0,06		0,07		0,07		0,08
8	999,55	1,52	998,03	1,46	996,57	1,41	995,16	1,37	993,79	1,32	992,47	1,28	991,19	1,23	989,96	1,20	988,76	1,16	987,60	1,11	986,49	1,09	985,40	1,05
	0,04		0,04		0,04		0,04		0,04		0,04		0,05		0,06		0,06		0,06		0,08		0,08
9	999,51	1,52	997,99	1,46	996,53	1,41	995,12	1,37	993,75	1,32	992,43	1,29	991,14	1,24	989,90	1,20	988,70	1,16	087,54	1,13	986,41	1,09	985,32	1,06
	0,06		0,06		0,06		0,06		0,06		0,07		0,07		0,07		0,08		0,09		0,10		0,11
10	999,45	1,52	997,93	1,46	996,47	1,41	995,06	1,37	993,69	1,33	992,36	1,29	991,07	1,24	989,83	1,21	988,62	1,17	987,45	1,14	986,31	1,10	985,21	1,07
	0,07		0,06		0,06		0,07		0,07		0,07		0,07		0,08		0,09		0,10		0,10		0,11
11	999,38	1,51	997,87	1,46	996,41	I,47	994,99	1,37	993,62	1,33	992,29	1,29	991,00	1,25	989,75	1,22	988,53	1,18	987,35	1,14	986,21	1,11	985,10	1,08
	0,09		0,09		0,09		0,09		0,09		0,09		0,10		0,11		0,11		0,11		0,12		0,13
12	999,29	1,51	997,78	1,46	996,32	1,42	994,90	1,37	993,53	1,33	992,20	1,30	990,90	1,26	989,64	1,22	988,42	1,18	987,24	1,15	986,09	1,12	984,97	1,09
	0,09		0,09		0,09		0,09		0,10		0,10		0,10		0,10		0,11		0,12		0,13		0,14
13	999,20	1,51	997,69	1,46	996,23	1,42	994,81	1,38	993,43	1,33	992,10	1,30	990,80	1,26	989,54	1,23	988,31	1,19	987,12	1,16	985,96	1,13	984,83	1,10
	0,11		0,11		0,11		0,11		0,11		0,12		0,12		0,13		0,13		0,14		0,15		0,16
14	999,09	1,51	997,58	1,46	996,12	1,42	994,70	1,38	993,32	1,34	991,98	1,30	990,68	1,27	989,41	1,23	988,18	1,20	986,98	1,17	985,81	1,14	984,67	1,11
	0,12		0,12		0,12		0,12		0,12		0,12		0,13		0,13		0,14		0,14		0,15		0,16
15	998,97	1,51	997,46	1,46	996,00	1,42	994,58	1,38	993,20	1,34	991,86	1,31	990,55	1,27	989,28	1,24	988,04	1,20	986,84	1,18	985,66	1,15	984,51	1,12
	0,13		0,13		0,13		0,13		0,14		0,14		0,14		0,15		0,15		0,17		0,17		0,18
16	998,84	1,51	997,33	1,46	995,87	1,42	994,45	1,39	993,06	1,34	991,72	1,31	990,41	1,28	989,13	1,24	987,89	1,22	986,67	1,18	985,49	1,16	984,33	1,13
	0,14		0,14		0,14		0,14		0,14		0,15		0,15		0,15		0,16		0,17		0,17		0,18
17	998,70	1,51	997,19	1,46	995,73	1,42	994,31	1,39	992,92	1,35	991,57	1,31	990,26	1,28	988,98	1,25	987,73	1,22	986,50	1,18	985,32	1,17	984,15	1,14
	0,15		0,15		0,16		0,16		0,16		0,16		0,17		0,17		0,18		0,18		0,19		0,19
18	998,55	1,51	997,04	1,47	995,57	1,42	994,15	1,39	992,76	1,35	991,41	1,32	990,09	1,28	988,81	1,26	987,55	1,23	986,32	1,19	985,13	1,17	983,96	1,15
	0,17		0,16		0,16		0,16		0,16		0,16		0,17		0,18		0,18		0,19		0,20		0,21
19	998,38	1,50	996,88	1,47	995,41	1,42	993,99	1,39	992,60	1,35	991,25	1,33	989,92	1,29	988,63	1,26	987,37	1,24	986,13	1,20	984,93	1,18	983,75	1,16
	0,18		0,18		0,18		0,18		0,19		0,19		0,19		0,20		0,21		0,22		0,22		0,23
20	998,20	1,50	996,70	1,47	995,23	1,42	993,81	1,40	992,41	1,35	991,06	1,33	989,73	1,30	988,43	1,27	987,16	1,24	985,92	1,21	984,71	1,19	983,52	1,17
	0,19		0,19		0,19		0,19		0,19		0,20		0,20		0,21		0,21		0,22		0,23		0,23
21	998,01	1,50	996,51	1,47	995,04	1,43	993,62	1,40	992,22	1,36	990,86	1,33	989,53	1,31	988,22	1,27	986,95	1,25	985,70	1,22	984,48	1,19	983,29	1,17
	0,20		0,20		0,19		0,20		0,20		0,20		0,21		0,21		0,22		0,22		0,23		0,24
22	987,81	1,50	996,31	1,46	994,85	1,43	993,42	1,40	992,02	1,36	990,66	1,34	989,32	1,31	988,01	1,28	986,73	1,25	985,48	1,23	984,25	1,20	983,15	1,18
	0,21		0,21		0,21		0,21		0,21		0,22		0,22		0,22		0,23		0,24		0,24		0,25
23	997,60	1,50	996,10	1,46	994,64	1,43	993,21	1,40	991,81	1,37	990,44	1,34	989,10	1,31	987,79	1,29	986,50	1,26	985,24	1,23	984,01	1,21	982,80	1,19
	0,21		0,21		0,22		0,22		0,22		0,22		0,23		0,23		0,23		0,24		0,25		0,26
24	997,39	1,50	995,89	1,47	994,42	1,43	992,99	1,40	991,59	1,37	990,22	1,35	988,87	1,31	987,56	1,29	986,27	1,27	985,00	1,24	983,76	1,22	982,54	1,20
	0,23		0,23		0,23		0,23		0,24		0,24		0,24		0,25		0,25		0,25		0,26		0,27
25	997,16	1,50	995,66	1,47	994,19	1,43	992,76	1,41	991,35	1,37	989,98	1,35	988,63	1,32	987,31	1,29	986,02	1,27	984,75	1,25	983,50	1,23	982,27	1,21
	0,23		0,23		0,23		0,24		0,24		0,24		0,24		0,25		0,26		0,27		0,27		0,28
26	996,93	1,50	995,43	1,47	993,96	1,44	992,52	1,41	991,11	1,37	989,74	1,35	988,39	1,33	987,06	1,30	985,76	1,28	984,48	1,25	983,23	1,24	981,99	1,22
	0,25		0,25		0,25		0,25		0,25		0,26		0,26		0,26		0,27		0,28		0,29		0,29
27	996,68	1,50	995,18	1,47	993,71	1,44	992,27	1,41	990,86	1,38	989,48	1,35	988,13	1,33	986,80	1,31	985,49	1,29	984,20	1,26	982,94	1,24	981,70	1,23
	0,25		0,25		0,26		0,26		0,26		0,26		0,27		0,28		0,28		0,28		0,29		0,30
28	996,43	1,50	994,93	1,48	993,45	1,44	992,01	1,41	990,60	1,38	989,22	1,36	987,86	1,34	986,52	1,31	985,21	1,29	983,92	1,27	982,65	1,25	981,40	1,23
	0,26		0,27		0,27		0,27		0,27		0,28		0,28		0,28		0,29		0,29		0,30		0,31
29	996,17	1,51	994,66	1,48	993,18	1,44	991,74	1,41	990,33	1,39	988,94	1,36	987,58	1,34	986,24	1,32	984,92	1,29	983,63	1,28	982,35	1,26	981,09	1,24
	0,27		0,27		0,27		0,28		0,28		0,28		0,28		0,29		0,29		0,30		0,31		0,32
30	995,90	1,51	994,39	1,48	992,91	1,45	991,46	1,41	990,05	1,39	988,66	1,37	987,29	1,34	985,95	1,32	984,63	1,30	983,33	1,29	982,04	1,27	980,77	1,25
	0,29		0,29		0,29		0,29		0,30		0,30		0,30		0,31		0,31		0,32		0,32		0,32
31	995,61	1,51	994,10	1,48	992,62	1,45	991,17	1,42	989,75	1,39	988,36	1,37	986,99	1,35	985,64	1,33	984,31	1,30	983,01	1,29	981,72	1,27	980,45	1,26
	0,29		0,29		0,29		0,29		0,30		0,31		0,31		0,31		0,31		0,32		0,33		0,34
32	995,32	1,51	993,81	1,48	992,33	1,45	990,88	1,42	989,45	1,40	988,05	1,37	986,68	1,35	985,33	1,33	984,00	1,31	982,69	1,30	981,39	1,28	980,11	1,26
	0,30		0,31		0,31		0,31		0,31		0,31		0,31		0,32		0,33		0,33		0,34		0,34
33	995,02	1,52	993,50	1,48	992,02	1,45	990,57	1,43	989,14	1,40	987,74	1,37	986,37	1,36	985,01	1,34	983,67	1,31	982,36	1,31	981,05	1,28	979,77	1,27
	0,30		0,31		0,31		0,31		0,31		0,32		0,33		0,33		0,33		0,34		0,34		0,35
34	994,72	1,53	993,19	1,48	991,71	1,45	990,26	1,43	988,83	1,41	987,42	1,38	986,04	1,36	984,68	1,34	983,34	1,32	982,02	1,31	980,71	1,29	979,42	1,28
	0,32		0,32		0,32		0,33		0,33		0,33		0,33		0,33		0,33		0,34		0,34		0,35
35	994,40	1,53	992,87	1,48	991,39	1,46	989,93	1,43	988,50	1,41	987,09	1,38	985,71	1,36	984,35	1,34	983,01	1,33	981,68	1,31	980,37	1,30	979,07	1,29
	0,32		0,32		0,33		0,33		0,33		0,33		0,34		0,34		0,35		0,35		0,36		0,37
36	994,08	1,53	992,55	1,49	991,06	1,46	989,60	1,43	988,17	1,41	986,76	1,39	985,37	1,36	984,01	1,35	982,66	1,33	981,33	1,32	980,01	1,31	978,70	1,29
	0,33		0,34		0,34		0,34		0,35		0,35		0,35		0,35		0,36		0,36		0,36		0,37
37	993,75	1,54	992,21	1,49	990,72	1,46	989,26	1,44	987,82	1,41	986,41	1,39	985,02	1,37	983,65	1,35	982,30	1,33	980,97	1,32	979,65	1,32	978,33	1,30
	0,34		0,34		0,35		0,36		0,36		0,36		0,36		0,36		0,37		0,38		0,38		0,38
38	993,41	1,54	991,87	1,50	990,37	1,47	988,90	1,44	987,46	1,41	986,05	1,39	984,66	1,37	983,29	1,36	981,93	1,34	980,59	1,32	979,27	1,32	977,95	1,31
	0,35		0,35		0,36		0,36		0,36		0,37		0,37		0,37		0,37		0,38		0,38		0,39
39	993,06	1,54	991,52	1,51	990,01	1,47	988,54	1,44	987,10	1,41	985,68	1,39	984,29	1,37	982,92	1,36	981,56	1,34	980,22	1,33	978,89	1,33	977,56	1,31
	0,35		0,36		0,36		0,37		0,38		0,38		0,38		0,38		0,38		0,39		0,39		0,39	-1,25
40	992,71	1,55	991,16	1,51	989,65	1,48	988,17	1,45	986,72	1,42	985,30	1,39	983,91	1,37	982,54	1,36	981,18	1,35	979,83	1,33	978,50	1,33	977,17	1,32

t°C	Алкохол в об. %

0	986,63	1,00	985,63	0,96	984,67	0,92	983,75	0,87	982,88	0,84	982,04	0,81	981,23	0,77	980,46	0,75	979,71	0,73	978,98	0,72	978,26	0,70	977,56	0,70
	-0,03		-0,02		-0,01		0,00		0,02		0,04		0,05		0,07		0,09		0,11		0,13		0,15
1	986,66	1,01	985,65	0,97	984,68	0,93	983,75	0,89	982,86	0,86	982,00	0,82	981,18	0,79	980,39	0,77	979,62	0,75	978,87	0,74	978,13	0,72	977,41	0,72
	-0,02		-0,01		0,00		0,01		0,03		0,04		0,06		0,08		0,10		0,12		0,14		0,17
2	986,68	1,02	985,66	0,98	984,68	0,94	983,74	0,91	982,83	0,87	981,96	0,84	981,12	0,81	980,31	0,79	979,52	0,77	978,75	0,76	977,99	0,75	977,24	0,74
	0,00		0,01		0,02		0,04		0,05		0,06		0,08		0,10		0,12		0,14		0,16		0,18
3	986,68	1,03	985,65	0,99	984,66	0,96	983,70	0,92	982,78	0,88	981,90	0,86	981,04	0,83	980,21	0,81	979,40	0,79	978,61	0,78	977,83	0,77	977,06	0,76
	0,01		0,02		0,03		0,04		0,05		0,07		0,08		0,10		0,12		0,14		0,16		0,18
4	986,67	1,04	985,63	1,00	984,63	0,97	983,66	0,93	982,73	0,90	981,83	0,87	980,96	0,85	980,11	0,83	979,28	0,81	978,47	0,80	977,67	0,79	976,88	0,79
	0,02		0,03		0,05		0,06		0,08		0,09		0,11		0,13		0,14		0,16		0,18		0,20
5	986,65	1,05	985,60	1,02	984,58	0,98	983,60	0,95	982,65	0,91	981,74	0,89	980,85	0,87	979,98	0,84	979,14	0,83	978,31	0,82	977,49	0,81	976,68	0,81
	0,04		0,06		0,06		0,07		0,08		0,10		0,11		0,13		0,15		0,17		0,19		0,21
6	986,61	1,07	985,54	1,02	984,52	0,99	983,53	0,96	982,57	0,93	981,64	0,90	980,74	0,89	979,85	0,86	978,99	0,85	978,14	0,84	977,30	0,83	976,47	0,83
	0,05		0,06		0,08		0,09		0,10		0,12		0,14		0,15		0,17		0,19		0,20		0,22
7	986,56	1,08	985,48	1,04	984,44	1,00	983,44	0,97	982,47	0,95	981,52	0,92	980,60	0,90	979,70	0,88	978,82	0,87	977,95	0,85	977,10	0,85	976,25	0,85
	0,07		0,08		0,09		0,10		0,11		0,12		0,14		0,16		0,18		0,19		0,21		0,23
8	986,49	1,09	985,40	1,05	984,35	1,01	983,34	0,98	982,36	0,96	981,40	0,94	980,46	0,92	979,54	0,90	978,64	0,88	977,76	0,87	976,89	0,87	976,02	0,87
	0,08		0,08		0,09		0,11		0,13		0,14		0,15		0,16		0,18		0,20		0,22		0,24
9	986,41	1,09	985,32	1,06	984,26	1,03	983,23	1,00	982,23	0,97	981,26	0,95	980,31	0,93	979,38	0,92	978,48	0,90	977,56	0,89	976,67	0,89	975,78	0,89
	0,10		0,11		0,12		0,13		0,14		0,16		0,17		0,18		0,19		0,21		0,23		0,25
10	986,31	1,10	985,21	1,07	984,14	1,04	983,10	1,01	982,09	0,99	981,10	0,96	980,14	0,94	979,20	0,93	978,27	0,92	977,35	0,91	976,44	0,91	975,53	0,91
	0,10		0,11		0,12		0,13		0,15		0,16		0,17		0,19		0,21		0,23		0,25		0,27
11	986,21	1,11	985,10	1,08	984,02	1,05	982,97	1,03	981,94	1,00	980,94	0,97	979,97	0,96	979,01	0,95	978,06	0,94	977,12	0,93	976,19	0,93	975,26	0,92
	0,12		0,13		0,14		0,15		0,16		0,17		0,19		0,21		0,22		0,24		0,26		0,27
12	986,09	1,12	984,97	1,09	983,88	1,06	982,82	1,04	981,78	1,01	980,77	0,99	979,78	0,98	978,80	0,96	977,84	0,96	976,88	0,95	975,93	0,94	974,99	0,94
	0,13		0,14		0,15		0,16		0,17		0,19		0,20		0,21		0,23		0,24		0,26		0,28
13	985,96	1,13	984,83	1,10	983,73	1,07	982,66	1,05	981,61	1,03	980,58	1,00	979,58	0,99	978,59	0,98	977,61	0,97	976,64	0,97	975,67	0,96	974,71	0,96
	0,15		0,16		0,17		0,18		0,19		0,20		0,22		0,23		0,24		0,26		0,27		0,29
14	085,81	1,14	984,67	1,11	983,56	1,08	982,48	1,06	981,42	1,04	980,38	1,02	979,36	1,00	978,36	0,99	977,37	0,99	976,38	0,98	975,40	0,98	974,42	0,98
	0,15		0,16		0,17		0,18		0,19		0,20		1,22		0,24		0,26		0,27		0,28		0,30
15	985,66	1,15	984,51	1,12	983,39	1,09	982,30	1,07	981,23	1,05	980,18	1,04	979,14	1,02	978,12	1,01	977,11	1,00	976,11	0,99	975,12	1,00	974,12	1,00
	0,17		0,18		0,19		0,20		0,21		0,22		0,23		0,25		0,26		0,28		0,30		0,31
16	985,49	1,16	984,33	1,13	983,20	1,10	982,10	1,08	981,02	1,06	979,96	1,05	978,91	1,04	977,87	1,02	976,85	1,02	975,83	1,01	974,82	1,01	973,81	1,02
	0,17		0,18		0,19		0,20		0,21		0,23		0,24		0,25		0,27		0,29		0,30		0,31
17	985,32	117	984,15	1,14	983,01	1,11	981,90	1,09	980,81	1,08	979,73	1,06	978,67	1,05	977,62	1,04	976,58	1,04	975,54	1,02	974,52	1,02	973,50	1,04
	0,19		0,19		0,20		0,22		0,24		0,25		0,26		0,27		0,28		0,29		0,31		0,33
18	985,13	1,17	983,96	1,15	982,81	1,13	981,68	1,11	980,57	1,09	979,48	1,07	978,41	1,06	977,35	1,05	976,30	1,05	975,25	1,04	974,21	1,04	973,17	1,05
	0,20		0,21		0,22		0,23		0,24		0,25		0,26		0,27		0,29		0,30		0,32		0,34
19	984,93	1,18	983,75	1,16	982,59	1,14	981,45	1,12	980,33	1,10	979,23	1,08	978,15	1,07	977,08	1,07	976,01	1,06	974,94	1,05	973,89	1,06	972,83	1,06
	0,22		0,23		0,24		0,24		0,25		0,26		0,28		0,29		0,30		0,31		0,33		0,35
20	984,71	1,19	983,52	1,17	982,35	1,14	981,21	1,13	980,08	1,11	978,97	1,10	977,87	1,08	976,79	1,08	975,71	1,08	974,63	1,07	973,56	1,08	972,48	1,08
	0,23		0,23		0,23		0,25		0,26		0,28		0,29		0,31		0,32		0,33		0,35		0,36
21	984,48	1,19	983,29	1,17	982,12	1,16	980,96	1,14	979,82	1,13	978,69	1,11	977,58	1,10	976,48	1,09	975,39	1,09	974,30	1,09	973,21	1,09	972,12	1,09
	0,23		0,24		0,25		0,26		0,27		0,28		0,29		0,31		0,32		0,33		0,35		0,36
22	984,25	1,20	983,05	1,18	981,97	1,17	980,70	1,15	979,55	1,14	978,41	1,12	977,29	1,12	976,17	1,10	975,07	1,10	973,97	1,10	972,86	1,10	971,76	1,11
	0,24		0,25		0,26		0,27		0,28		0,29		0,30		0,31		0,33		0,34		0,35		0,37
23	984,01	1,21	982,80	1,19	981,61	1,18	980,43	1,16	979,27	1,15	978,12	1,13	976,99	1,13	975,86	1,12	974,74	1,11	973,63	1,12	972,51	1,12	971,39	1,13
	0,25		0,26		0,27		0,28		0,29		0,30		0,31		0,32		0,33		0,35		0,36		0,38
24	983,76	1,22	982,54	1,20	981,34	1,19	980,15	1,17	978,98	1,16	977,82	1,14	976,68	1,14	975,54	1,13	974,41	1,13	973,28	1,13	972,15	1,14	971,01	1,14
	0,26		0,27		0,28		0,29		0,30		0,31		0,32		0,33		0,35		0,36		0,38		0,39
25	983,50	1,23	982,27	1,21	981,06	1,20	979,86	1,18	978,68	1,17	977,51	1,16	976,36	1,15	975,21	1,15	974,06	1,14	972,92	1,15	971,77	1,15	970,62	1,15
	0,27		0,28		0,29		0,29		0,30		0,31		0,33		0,34		0,35		0,37		0,38		0,39
26	983,23	1,24	981,99	1,22	980,77	1,20	979,57	1,19	978,38	1,18	977,20	1,17	976,03	1,16	974,87	1,16	973,71	1,16	972,55	1,16	971,39	1,16	970,23	1,17
	0,29		0,29		0,30		0,31		0,32		0,33		0,34		0,36		0,37		0,38		0,39		0,41
27	982,94	1,24	981,70	1,23	980,47	1,21	979,26	1,20	978,06	1,19	976,87	1,18	975,69	1,17	974,51	1,17	973,34	1,17	972,17	1,17	921,00	1,18	969,82	1,18
	0,29		0,30		0,30		0,31		0,32		0,33		0,35		0,36		0,38		0,39		0,40		0,41
28	982,65	1,25	981,40	1,23	980,17	1,22	978,95	1,21	977,74	1,20	976,54	1,20	975,34	1,19	974,15	1,19	972,96	1,18	971,78	1,18	970,60	1,19	969,41	1,20
	0,30		0,31		0,32		0,33		0,34		0,35		0,36		0,37		0,38		0,39		0,40		0,42
29	982,35	1,26	981,09	1,24	979,85	1,23	978,62	1,22	977,40	1,21	976,19	1,21	974,98	1,20	973,78	1,20	972,58	1,19	971,39	1,19	970,20	1,21	968,99	1,21
	0,31		0,32		0,33		0,34		0,35		0,36		0,37		0,38		0,38		0,40		0,42		0,43
30	982,04	1,27	980,77	1,25	979,52	1,24	978,28	1,23	977,05	1,22	975,83	1,21	974,62	1,21	973,41	1,21	972,20	1,21	970,99	1,21	969,78	1,22	968,56	1,23
	0,32		0,32		0,33		0,34		0,35		0,36		0,37		0,38		0,39		0,40		0,42		0,43
31	981,72	1,27	980,45	1,26	979,19	1,25	977,94	1,24	976,70	1,23	975,47	1,22	974,25	1,22	973,03	1,22	971,81	1,22	970,59	1,23	969,36	1,23	968,13	1,24
	0,33		0,34		0,34		0,35		0,36		0,37		0,38		0,39		0,40		0,42		0,43		0,45
32	981,39	1,28	980,11	1,26	978,85	1,26	977,59	1,25	976,34	1,24	975,10	1,23	973,87	1,23	972,64	1,23	971,41	1,24	970,17	1,24	968,93	1,25	967,68	1,26
	0,34		0,34		0,35		0,35		0,36		0,37		0,39		0,40		0,41		0,42		0,43		0,45
33	981,05	1,28	979,77	1,27	978,50	1,26	977,24	1,26	975,78	1,25	974,73	1,25	973,48	1,24	972,24	1,24	971,00	1,25	969,75	1,25	968,50	1,27	967,23	1,27
	0,34		0,35		0,36		0,37		0,38		0,39		0,40		0,41		0,42		0,43		0,45		0,45
34	980,71	1,29	979,42	1,28	978,14	1,27	976,87	1,27	975,60	1,26	974,34	1,26	973,08	1,25	971,83	1,25	970,58	1,26	969,32	1,27	968,05	1,27	966,78	1,29
	0,34		0,35		0,36		0,37		0,38		0,39		0,40		0,41		0,43		0,44		0,45		0,47
35	980,37	1,30	979,07	1,29	977,78	1,28	976,50	1,28	975,22	1,27	973,95	1,27	972,68	1,26	971,42	1,27	970,15	1,27	968,88	1,28	967,60	1,29	966,31	1,30
	0,36		0,37		0,37		0,38		0,38		0,39		0,40		0,42		0,43		0,44		0,45		0,47
36	980,01	1,31	978,70	1,29	977,41	1,29	976,12	1,28	974,84	1,28	973,56	1,28	972,28	1,28	971,00	1,28	969,72	1,28	968,44	1,29	967,15	1,31	965,84	1,31
	0,36		0,37		0,38		0,39		0,40		0,41		0,42		0,43		0,44		0,45		0,46		0,47
37	979,65	1,32	978,33	1,30	977,03	1,30	975,73	1,29	974,44	1,29	973,15	1,29	971,86	1,29	970,57	1,29	969,28	1,29	967,99	1,30	966,69	1,32	965,37	1,32
	0,38		0,38		0,39		0,39		0,40		0,41		0,42		0,43		0,44		0,46		0,47		0,48
38	979,27	1,32	977,95	1,31	976,64	1,30	975,34	1,30	974,04	1,30	972,74	1,30	971,44	1,30	970,14	1,30	968,84	1,31	967,53	1,31	966,22	1,33	964,89	1,34
	0,38		0,39		0,39		0,40		0,41		0,42		0,43		0,44		0,45		0,46		0,48		0,49
39	978,89	1,33	977,56	1,31	976,25	1,31	974,94	1,31	973,63	1,31	972,32	1,31	971,01	1,31	969,70	1,31	968,39	1,32	967,07	1,33	965,74	1,34	964,40	1,36
	0,39		0,39		0,40		0,41		0,42		0,42		0,43		0,45		0,47		0,48		0,49		0,50
40	978,50	1,33	977,17	1,32	975,85	1,32	974,53	1,32	973,21	1,31	971,90	1,32	970,58	1,33	969,25	1,33	967,92	1,33	966,59	1,34	965,25	1,35	963,90	1,37

t°C	Алкохол в об. %

0	978,26	0,70	977,56	0,70	976,86	0,69	976,17	0,70	975,47	0,72	974,75	0,72	974,03	0,74	973,29	0,77	972,52	0,80	971,72	0,83	970,89	0,87	970,02	0,90
	0,13		0,15		0,17		0,20		0,22		0,24		0,27		0,30		0,32		0,35		0,37		0,39
1	978,13	0,72	977,41	0,72	976,69	0,72	975,97	0,72	975,25	0,74	974,51	0,75	973,76	0,77	972,99	0,79	972,20	0,83	971,37	0,85	970,52	0,89	969,63	0,93
	0,14		0,17		0,19		0,21		0,24		0,26		0,29		0,31		0,34		0,36		0,38		0,41
2	977,99	0,75	977,24	0,74	976,50	0,74	975,76	0,75	975,01	0,76	974,25	0,78	973,47	0,79	972,68	0,82	971,86	0,85	971,01	0,87	970,14	0,92	960,22	0,96
	0,16		0,18		0,20		0,23		0,25		0,27		0,29		0,32		0,34		0,36		0,38		0,40
3	977,83	0,77	977,06	0,76	976,30	0,77	975,53	0,77	974,76	0,78	973,98	0,80	973,18	0,82	972,36	0,84	971,52	0,87	970,65	0,89	969,76	094	968,82	098
	0,16		0,18		0,21		0,23		0,25		0,28		0,30		0,32		0,34		0,36		0,39		0,42
4	977,67	0,79	976,88	0,79	976,09	0,79	975,30	0,79	974,51	0,81	973,70	0,82	972,88	0,84	972,04	0,86	971,18	0,89	970,29	0,92	969,37	0,96	968,40	1,00
	0,18		0,20		0,22		0,24		0,26		0,28		0,30		0,33		0,35		0,38		0,40		0,41
5	977,49	0,81	976,68	0,81	975,87	0,81	975,06	0,81	974,25	0,83	973,42	0,84	972,58	0,86	971,71	0,88	970,83	0,92	969,91	0,94	968,97	0,98	967,99	1,02
	0,19		0,21		0,23		0,25		0,27		0,30		0,33		0,34		0,37		0,39		0,41		0,43
6	977,30	0,83	976,47	0,83	975,64	0,83	974,81	0,84	973,97	0,85	973,12	0,87	972,25	0,88	971,37	0,91	970,46	0,94	969,52	0,96	968,56	1,00	967,56	1,04
	0,20		0,22		0,24		0,26		0,28		0,30		0,32		0,35		0,37		0,39		0,41		0,43
7	976,10	0,85	976,25	0,85	975,40	0,85	974,55	0,86	973,69	0,87	972,82	0,89	971,93	0,91	971,02	0,93	970,09	0,96	969,13	0,98	968,15	1,02	967,13	1,06
	0,21		0,23		0,25		0,27		0,29		0,31		0,33		0,35		0,37		0,39		0,42		0,44
8	976,89	0,87	976,02	0,87	975,15	0,87	974,28	0,88	973,40	0,89	972,51	0,91	971,60	0,93	970,67	0,95	969,72	0,98	968,74	1,01	967,73	1,04	966,69	1,08
	0,22		0,24		0,26		0,28		0,30		0,32		0,34		0,36		0,39		0,41		0,43		0,45
9	976,67	0,89	975,78	0,89	974,89	0,89	974,00	0,90	973,10	0,91	972,19	0,93	971,26	0,95	970,31	0,98	969,33	1,00	968,33	1,03	967,30	1,06	966,24	1,09
	0,23		0,25		0,27		0,29		0,31		0,33		0,35		0,37		0,39		0,41		0,43		0,45
10	976,44	0,91	975,53	0,91	974,62	0,91	973,71	0,92	972,79	0,93	971,86	0,95	970,91	0,97	969,94	1,00	968,94	1,02	967,92	1,05	966,87	1,08	965,79	1,11
	0,25		0,27		0,28		0,30		0,32		0,34		0,36		0,38		0,40		0,42		0,44		0,45
11	976,11	0,93	975,26	0,92	974,34	0,93	973,41	0,94	972,47	0,95	971,52	1,97	970,55	0,99	969,56	1,02	968,54	1,04	967,50	1,07	966,43	1,09	965,34	1,13
	0,26		0,27		0,29		0,31		0,33		0,35		0,37		0,39		0,40		0,42		0,44		0,46
12	975,91	0,94	974,99	0,94	974,05	0,95	973,10	0,96	972,14	0,97	971,17	1,99	970,18	1,01	969,17	1,03	968,14	1,06	967,08	1,09	965,99	1,11	964,88	1,15
	0,26		0,28		0,30		0,32		0,34		0,36		0,38		0,19		0,41		0,41		0,45		0,47
13	975,67	0,96	974,71	0,96	973,75	0,97	972,78	0,98	971,80	0,99	970,81	1,01	969,80	1,02	968,78	1,05	967,73	1,08	966,65	1,11	965,54	1,13	964,41	1,17
	0,27		0,29		0,31		0,33		0,35		0,37		0,38		0,40		0,42		0,44		0,45		0,47
14	975,40	0,98	974,42	0,98	973,44	0,99	972,45	1,00	971,45	1,01	970,44	1,02	969,42	1,04	968,38	1,07	967,31	1,10	966,21	1,12	965,09	1,15	963,94	1,19
	0,28		0,30		0,32		0,33		0,35		0,37		0,39		0,41		0,43		0,48		0,47		0,49
15	975,12	1,00	974,12	1,00	973,12	1,00	972,12	1,02	971,10	1,03	970,07	1,04	969,03	1,06	967,97	1,09	966,88	1,12	965,76	1,14	964,62	1,17	963,45	1,20
	0,30		0,31		0,33		0,35		0,36		0,38		0,40		0,42		0,44		0,45		0,47		0,49
16	974,82	1,01	973,81	1,02	972,79	1,02	971,77	1,03	970,74	1,05	969,69	1,06	968,63	1,08	967,55	1,11	966,44	1,13	965,31	1,10	964,15	1,19	962,96	1,22
	0,30		0,31		0,33		0,35		0,37		0,38		0,40		0,42		0,43		0,45		0,47		0,49
17	974,52	1,02	973,50	1,04	972,46	1,04	971,42	1,05	970,37	1,06	969,31	1,08	968,23	1,10	967,13	1,12	966,01	1,15	964,86	1,18	963,68	1,21	962,47	1,24
	0,31		0,33		0,34		0,36		0,38		0,40		0,42		0,43		0,45		0,47		0,48		0,50
18	974,21	1,04	973,17	1,05	972,12	1,06	971,06	1,07	969,99	1,08	968,91	1,10	967,81	1,11	966,70	1,14	965,56	1,17	964,39	1,19	963,20	1,23	961,97	1,26
	0,32		0,34		0,35		0,36		0,38		0,40		0,42		0,44		0,46		0,47		0,49		0,50
19	973,89	1,06	972,83	1,06	971,77	1,07	970,70	1,09	969,61	1,10	968,51	1,11	967,39	1,13	966,26	1,16	965,10	1,18	963,92	1,21	962,71	1,24	961,47	1,28
	0,33		0,35		0,37		0,39		0,40		0,41		0,42		0,45		0,46		0,48		0,50		0,52
20	973,56	1,08	972,48	1,08	971,40	1,09	970,31	1,10	969,21	1,11	968,10	1,13	966,97	1,14	965,81	1,17	964,64	1,20	963,44	1,23	962,21	1,26	960,95	1,29
	0,35		0,36		0,37		0,39		0,40		0,42		0,44		0,45		0,47		0,49		0,50		0,52
21	973,21	1,09	972,12	1,09	971,03	1,11	969,92	1,11	968,81	1,13	967,68	1,15	966,53	1,17	965,36	1,19	964,17	1,22	962,95	1,24	961,71	1,28	960,43	1,31
	0,35		0,36		0,38		0,39		0,41		0,43		0,44		0,46		0,48		0,49		0,51		0,52
22	972,86	1,10	971,76	1,11	970,65	1,12	969,53	1,13	968,40	1,15	967,25	1,16	966,09	1,19	964,90	1,21	963,69	1,23	962,46	1,26	961,20	1,29	959,91	1,32
	0,35		0,37		0,39		0,40		0,42		0,43		0,45		0,46		0,48		0,50		0,52		0,53
23	972,51	1,12	971,39	1,13	970,26	1,13	969,13	1,15	967,98	1,16	966,82	1,18	965,64	1,20	964,44	1,23	963,21	1,25	961,90	1,28	960,68	1,30	959,38	1,33
	0,36		0,38		0,39		0,41		0,42		0,44		0,46		0,48		049		0,51		0,53		0,54
24	972,15	1,14	971,01	1,14	969,87	1,15	968,72	1,16	967,56	1,18	966,38	1,20	965,18	1,22	963,96	1,24	962,72	1,27	961,45	1,29	960,16	1,32	958,84	1,34
	0,38		0,39		0,40		0,42		0,44		0,45		0,46		0,48		0,50		0,51		0,53		0,54
25	971,77	1,15	970,62	1,15	969,47	1,17	968,30	1,18	967,12	1,19	965,93	1,21	964,72	1,24	963,48	1,26	962,22	1,28	960,94	1,31	959,63	1,33	958,30	1,36
	0,38		0,39		0,41		0,42		0,44		0,46		0,48		0,49		0,50		0,52		0,53		0,55
26	971,39	1,16	970,23	1,17	969,06	1,18	967,88	1,20	966,68	1,21	965,47	1,23	964,24	1,25	962,99	1,27	961,72	1,30	960,42	1,32	959,10	1,35	957,75	1,38
	0,39		0,41		0,42		0,44		0,45		0,46		0,48		0,50		051		0,52		0,53		0,55
27	971,00	1,18	969,82	1,18	968,64	1,20	967,44	1,21	966,23	1,22	965,01	1,25	963,76	1,27	962,49	1,28	961,21	1,31	959,90	1,33	958,57	1,37	957,20	1,40
	0,40		0,41		0,43		0,44		0,46		0,48		0,49		0,50		052		0,53		0,55		0,56
28	970,60	1,19	969,41	1,20	968,21	1,21	967,00	1,23	965,77	1,24	964,53	1,26	963,27	1,28	961,99	1,30	960,69	1,32	959,37	1,35	958,02	1,38	956,64	1,41
	0,40		0,42		0,43		0,45		0,46		0,48		0,49		0,50		0,52		0,54		0,55		0,56
29	970,20	1,21	968,99	1,21	967,78	1,23	966,55	1,24	965,31	1,26	964,05	1,27	962,78	1,29	961,49	1,32	960,17	1,34	958,83	1,36	957,47	1,39	956,08	1,43
	0,42		0,43		0,45		0,46		0,47		0,48		0,50		0,52		0,53		0,54		0,56		0,58
30	969,78	1,22	968,56	1,23	967,33	1,24	966,09	1,25	964,84	1,27	963,57	1,29	962,28	1,31	960,97	1,33	959,64	1,35	958,29	1,38	956,91	1,41	955,50	1,44
	0,42		0,43		0,44		0,45		0,47		0,49		0,51		0,52		0,53		0,55		0,56		0,58
31	969,36	1,23	968,13	1,24	966,89	1,25	965,64	1,27	964,37	1,29	963,08	1,31	961,77	1,32	960,45	1,34	959,11	1,37	957,74	1,39	956,35	1,43	954,92	1,45
	0,43		0,45		0,46		0,48		0,49		0,50		0,51		0,52		0,54		0,56		0,57		0,58
32	968,93	1,25	967,68	1,25	966,43	1,27	965,16	1,28	963,88	1,30	962,58	1,32	961,26	1,33	959,93	136	958,57	1,39	957,18	1,40	955,78	1,44	954,34	1,47
	0,43		0,45		0,47		0,48		0,50		0,51		0,52		0,54		0,55		0,56		0,58		0,59
33	968,50	1,27	967,25	1,27	965,96	1,28	964,68	1,30	963,38	1,31	962,07	1,33	960,74	1,35	959,39	1,37	958,02	1,40	956,62	1,42	955,20	1,45	953,75	1,48
	0,45		0,46		0,47		049		0,50		0,51		0,52		0,54		0,55		0,56		0,58		0,60
34	968,05	1,27	966,78	1,29	965,49	1,30	964,19	1,31	962,88	1,32	961,56	1,34	960,22	1,37	958,85	1,38	957,47	1,41	956,06	1,44	954,62	1,47	953,15	1,49
	0,45		0,47		0,48		0,49		0,50		0,52		0,54		0,55		1,57		0,58		0,59		0,60
35	967,60	1,29	996,31	1,30	965,01	1,31	963,70	1,32	962,38	1,34	961,04	1,36	959,68	1,38	958,30	1,40	956,90	1,42	955,48	1,45	954,03	1,48	952,55	1,50
	0,45		0,47		0,48		0,49		0,51		0,53		0,54		0,55		0,57		0,59		0,60		0,61
36	967,15	1,31	965,84	1,31	964,53	1,32	963,21	1,34	961,87	1,36	960,51	1,37	959,14	1,39	957,75	1,42	956,33	1,44	954,89	1,46	953,43	1,49	951,94	1,51
	0,46		0,47		0,48		0,50		0,52		0,53		0,55		0,56		0,57		0,58		0,60		0,61
37	966,69	1,32	965,37	1,32	964,05	1,34	962,71	1,36	961,35	1,37	959,98	1,39	958,59	1,40	957,19	1,43	955,76	1,45	954,31	1,48	952,83	1,50	951,33	1,52
	0,47		0,48		0,50		0,51		0,52		0,54		0,55		0,57		0,58		0,59		0,60		0,61
38	966,22	1,33	964,89	1,34	963,55	1,35	962,20	1,37	960,83	1,39	959,44	1,40	958,04	1,42	956,62	1,44	955,18	1,46	953,72	1,49	952,23	1,51	950,72	1,54
	0,48		0,49		0,51		0,52		0,53		0,54		0,56		0,57		0,58		0,60		0,61		0,62
39	965,74	1,34	964,40	1,36	963,04	1,36	961,68	1,38	960,30	1,40	958,90	1,42	957,48	1,43	956,05	1,45	954,60	1,48	953,12	1,50	951,62	1,52	950,10	1,55
	0,49		0,50		0,51		0,53		0,54		0,55		0,56		0,58		0,60		0,61		0,62		0,64
40	965,25	1,35	963,90	1,37	962,53	1,38	961,15	1,39	959,76	1,41	958,35	1,43	956,92	1,45	955,47	1,47	954,00	1,49	952,51	1,51	951,00	1,54	949,49	1,56

Таблица IV

Таблица за връзката между индекса на рефракция при 20°C и алкохолното съдържание при 20°C на чисти водоалкохолни смеси и дестилати

4. Определяне на общия сух екстракт. Общо сухо вещество

1. Определение

Общият сух екстракт или общото сухо вещество включва цялото количество вещества, които са нелетливи при определени физически условия. Тези физически условия трябва да бъдат такива, че веществата, които формират екстракта, да са подложени на възможно най-малки изменения по време на провеждане на теста.

Беззахарният екстракт е разликата между общия сух екстракт и общото количество захар.

Редуцираният екстракт е разликата между общия сух екстракт и общото количество захари, надхвърлящи един грам на литър, калиев сулфат над един грам на литър, евентуално наличие на манитол и всички други химически вещества, които евентуално са били добавени към виното.

Остатъчният екстракт е разликата между беззахарния екстракт и измерената киселинност, изразена като винена киселина.

Екстрактът се изразява в грамове на литър с точност до 0,5 g.

2. Принцип на метода

Опростен метод - измерване чрез денситометър.

Общият сух екстракт се изчислява по непряк начин от относителното тегло на мъстта, а при виното - от относителното тегло на обезалкохоленото вино при определяне на алкохола чрез дестилация.

Сухият екстракт се изразява чрез количеството захароза, която, когато бъде разтворена в един литър вода, образува разтвор със същото относително тегло както мъстта или безалкохолното вино. Това количество е показано на таблицата.

3. Метод на изчисление

Относителното тегло d₂₀²⁰ на обезалкохоленото вино се изчислява със следната формула:

d_r = d_v - d_a + 1,000, където:

d_v e относителното тегло на виното при 20°C (коригирано по отношение на летливата киселинност)⁽¹⁾;

d_a - относителното тегло при 20°C на смес от вода и алкохол със същата алкохолна концентрация като виното;

d_r - може да бъде изчислено и от плътностите при 20°C, r_v на виното и r_a на сместа от вода и алкохол със същата алкохолна концентрация с помощта на формулата:

d_r = 1,0018(r_v - r_a) + 1,000,

където коефициентът 1,0018 се приема приблизително равен на единица, когато r_v е под 1,05, което се случва най-често.

4. Изразяване на резултатите

Таблицата следва да се използва за изчисляване на общия сух екстракт в g/l от относителното тегло d_r_20°C^20°C на безалкохолното вино или от относителното тегло d_20°C^20°C на мъстта.

Общият сух екстракт се изразява в грамове на литър с точност до първия десетичен знак.

________________________

⁽¹⁾ - Преди да се изчисли относителната плътност (или плътността) на виното, трябва да се коригира влиянието на летливата киселинност по формулата:

d_v = d_20°C^20°C - 0,0000086 a или r_v = r₂₀ - 0,0000086 a,

където:

a е количеството на летливите киселини в милиграми на литър.

Таблица

за изчисление на общия сух екстракт в грамове на литър

Относителна	Третият десетичен знак на относителната
плътност с	плътност
точност до
втория де-
сетичен знак

Грамове екстракт за литър

1,00	0	2,6	5,1	7,7	10,3	12,9	15,4	18,0	20,6	23,2
1,01	25,8	28,4	31,0	33,6	36,2	38,8	41,3	43,9	46,5	49,1
1,02	51,7	54,3	56,9	59,5	62,1	64,7	67,3	69,9	72,5	75,1
85,5	77,7	80,3	82,9		88,1	90,7	93,3	95,9	98,5	101,1
1,04	103,7	106,3	109,0	111,6	114,2	116,8	119,4	122,0	124,6	127,2
1,05	129,8	132,4	135,0	137,6	140,3	142,9	145,5	148,1	150,7	153,3
1,06	155,9	158,6	161,2	163,8	166,4	169,0	171,6	174,3	176,9	179,5
1,07	182,1	184,8	187,4	190,0	192,6	195,2	197,8	200,5	203,1	205,8
1,08	208,4	211,0	213,6	216,2	218,9	221,5	224,1	226,8	229,4	232,0
1,09	234,7	237,3	239,9	242,5	245,2	247,8	250,4	253,1	255,7	258,4
1,10	261,0	263,6	266,3	268,9	271,5	274,2	276,8	279,5	282,1	284,8
1,11	287,4	290,0	292,7	295,3	298,0	300,6	303,3	305,9	308,6	311,2
1,12	313,9	316,5	319,2	321,8	324,5	327,1	329,8	332,4	335,1	337,8
1,13	340,4	343,0	345,7	348,3	351,0	353,7	356,3	359,0	361,6	364,3
1,14	366,9	369,6	372,3	375,0	377,6	380,3	382,9	385,6	388,3	390,9
1,15	393,6	396,2	398,9	401,6	404,3	406,9	409,6	412,3	415,0	417,6
1,16	420,3	423,0	425,7	428,3	431,0	433,7	436,4	439,0	441,7	444,4
1,7	447,1	449,8	452,4	455,2	457,8	460,5	463,2	465,9	468,6	471,3
1,18	473,9	476,6	479,3	482,0	484,7	487,4	490,1	492,8	495,5	498,2
1,19	500,9	503,5	506,2	508,9	511,6	514,3	517,0	519,7	522,4	525,1
1,20	527,8	-	-	-	-	-	-	-	-	-

Допълнителна таблица

Четвъртият	Грамове	Четвъртият	Грамове	Четвъртият	Грамове
десетичен знак	екстракт за	десетичен знак на	екстракт	десетичен знак	екстракт
на относителната	литър	относителната	за литър	на относителната	за литър
плътност		плътност		плътност
1	0,3	4	1,0	7	1,8
2	0,5	5	1,3	8	2,1
3	0,8	6	1,6	9	2,3

5. Определяне на редуциращите захари

1. Определение

Редуциращите захари включват всички захари с кетонна или алдехидна функция и се определят чрез тяхното редуциращо действие върху алкален разтвор на медна сол.

2. Принцип на методите

2.1. Дефекация (утаяване)

2.1.1. Сравнителен метод - след неутрализацията и отстраняването на алкохола виното преминава през йонообменна колона, в която неговите аниони се заменят с ацетатни йони, след което следва утаяване с неутрален оловен ацетат.

2.1.2. Обикновени методи - виното се третира с един от следните реактиви:

2.1.2.1. неутрален оловен ацетат;

2.1.2.2. цинков II хексацианоферат.

2.2. Определяне

2.2.1. Единствен метод - утаеното вино или мъст влиза в реакция с определено количество разтвор на алкална медна сол, след което излишъкът от медни йони се определя йодометрично.

3. Утаяване

Захарното съдържание на течността, което следва да бъде определено, да е в интервала между 0,5 и 5 g/l.

Сухите вина да не се разреждат по време на утаяването; сладките вина следва да бъдат разреждани по време на утаяването, за да се приведе нивото на захарта в границите, предписани в таблицата:

Описание	Съдържание	Плътност	Разреждане
	на захар, в		(%)
	грамове на
	литър (g/l)
Мъст и мистели	> 125	> 1,038	1
Подсилени или	от 25 до 125	от 1,005 до 1,038	4
неподсилени вина
Полусладки вина	от 5 до 25	от 0,997 до 1,005	20
Сухи вина	< 5	< 0,997	Без разреждане

3.1. Сравнителен метод

3.1.1. Реактиви

3.1.1.1. Разтвор на 1 M солна киселина (HCl);

3.1.1.2. Разтвор на 1 M натриев хидроксид (NaOH);

3.1.1.3. Разтвор на 4 M оцетна киселина (CH₃COOH);

3.1.1.4. Разтвор на 2 M натриев хидроксид (NaOH);

3.1.1.5. Йонообменна смола [Dowex 3 (20-50 mech) или еквивалентна на нея смола].

Приготвяне на колоната със смолата за анионен обмен - на дъното на бюретата се поставя малък пълнеж от стъклена вата и 15 ml анионобменна смола (3.1.1.5).

Преди да бъде използвана, смолата се подлага на два пълни регенерационни цикъла чрез последователно преминаване през нея на разтвори на 1 M солна киселина (3.1.1.1) и натриев хидроксид (3.1.1.2). След изплакване с 50 ml дестилирана вода смолата се прехвърля в цилиндричен съд за преливане, добавят се 50 ml от разтвора на 4 M оцетна киселина (3.1.1.3) и се разбърква в продължение на 5 min. Отново се напълва бюретата със смола и през колоната се налива 100 ml от разтвора на 4 M оцетната киселина (3.1.1.3). (За предпочитане е да има определено количество от тази смола, съхранявано в бутилка, която е напълнена с разтвор на 4 M оцетна киселина.) Колоната се промива с дестилирана вода, докато изтичащата течност не стане неутрална.

Регенериране на смолата - смолата се промива със 150 ml разтвор на 2 M натриев хидроксид за елиминиране на киселините и голяма част от багрилната материя на смолата. Промива се със 100 ml вода и със 100 ml разтвор на 4 M оцетната киселина. Колоната се промива, докато промивната вода не стане неутрална.

3.1.1.6. Разтвор на неутрален оловен ацетат (приблизително наситен)

неутрален оловен ацетат [Pb(CH₃COO)₂ 3 H₂O] - 250 g;

много гореща вода - до 500 ml.

Разбърква се до разтваряне.

3.1.1.7. Калциев карбонат (CaCO₃).

3.1.2. Начин на работа

3.1.2.1. Сухи вина

Поставят се 50 ml вино в чаша с диаметър около 10 до 12 cm заедно с 1/2 (n-0,5) ml разтвор 1 M натриев хидроксид (3.1.1.2) (n е обемът на разтвора 0,1 M натриев хидроксид, използван за определяне на общата киселинност в 10 ml вино) и се изпарява над баня от вряща вода, в поток от горещ въздух, докато течността не намалее до 20 ml.

Тази течност се прокарва през колона с анионобменната смола в ацетатна форма (3.1.1.5) със скорост 3 ml на всеки две минути. Събира се преминалата течност през колоната в 100-милилитрова мерителна колба. Съдът и колоната се измиват шестократно, като всеки път се използва 10 ml дестилирана вода. Прибавят се при разбъркване 2,5 ml наситен разтвор на оловен ацетат (3.1.1.6) и 0,5 g калциев карбонат (3.1.1.7), колоната се разклаща няколко пъти и се оставя да стои в продължение на минимум 15 min. Допълва се вода до нивото на маркировката. Филтрира се.

Един милилитър от този филтрат съответства на 0,5 ml вино.

3.1.2.2. Мъст, мистели, сладки и полусладки вина:

Указания за разреждане:

• Мъст и мистели - пробата за анализ се разрежда 10% и се отмерват 10 ml от нея.

• Сладки вина, подсилени или неподсилени, с плътност между 1,005 и 1,038 - пробата за анализ се разрежда 20% и се отмерват 20 ml от нея.

• Полусладки вина с плътност при 20°C между 0,997 и 1,005. Отмерват се 20 ml от неразреденото вино. Оставя се посоченият обем вино или мъст да тече през колона с анионобменна смола в ацетатна форма със скорост 3 ml на всеки 2 min. Преминалата течност се събира в 100-милилитрова мерителна колба и колоната се изплаква с вода, докато се получат около 90 ml течност. Прибавя се 0,5 g калциев карбонат и един милилитър наситен разтвор на оловен ацетат. Разбъркват се и се оставят да стоят в продължение на 15 min, като се разбърква от време на време. Допълва се вода до нивото на маркировката. Филтрира се.

Случаи:

• Един милилитър филтрат съответства на 0,01 ml мъст или мистел.

• Един милилитър филтрат съответства на 0,04 ml сладко вино.

• Един милилитър филтрат съответства на 0,20 ml полусладко вино.

3.2. Обикновени методи

3.2.1. Избистряне с неутрален оловен ацетат

3.2.1.1. Реактиви

Разтвор на неутрален оловен ацетат (приблизително наситен) (вж. 3.1.1.6);

Калциев карбонат.

3.2.1.2. Начин на работа

3.2.1.2.1. Сухи вина

Отмерват се 50 ml вино в 100-милилитрова мерителна колба; добавя се 1/2 (n 0,5) ml разтвор на 1 M натриев хидроксид (3.1.1.2) (n е обемът на разтвора на 0,1 M натриев хидроксид, използван за определяне на общата киселинност в 10 ml вино). Прибавят се при разбъркване 2,5 ml наситен разтвор на оловен ацетат (3.1.1.6) и 0,5 g калциев карбонат (3.1.1.7). Разклаща се няколко пъти и се оставя да стои в продължение на минимум 15 min. Допълва се вода до нивото на маркировката. Филтрира се.

Един милилитър филтрат съответства на 0,5 ml вино.

3.2.1.2.2. Мъст, мистел, сладки и полусладки вина:

В 100-милилитрова мерителна колба се поставят следните обеми вино (или мъст или мистел), като посочените по-долу разреждания са ориентировъчни:

• Мъст и мистели - пробата за анализ се разрежда 10% и се отмерват 10 ml от нея.

• Полусладки вина с плътност между 0,997 и 1,005 - вземат се 20 ml от неразреденото вино. Добавят се 0,5 g калциев карбонат, около 60 ml вода и 0,5 или 1, или 2 ml наситен разтвор на оловен ацетат. Разбъркват се. Оставят се да стоят в продължение на 15 min, като от време на време се разбъркват. Допълва се вода до нивото на марката. Филтрира се.

Случаи:

• Един милилитър филтрат съответства на 0,01 ml мъст или мистел.

• Един милилитър филтрат съответства на 0,04 ml сладко вино.

• Един милилитър филтрат съответства на 0,20 ml полусладко вино.

3.2.2. Утаяване с цинков II-хексацианоферат

Този процес на избистряне се използва само при бели вина, леко оцветени сладки вина и мъст.

3.2.2.1. Реактиви

3.2.2.1.1. Разтвор I, калиев II хексацианоферат:

калиев II хексацианоферат [K₄Fe(CN)₆ 3 H₂O] - 150 g;

вода - до 1000 ml.

3.2.2.1.2. Разтвор II, цинков сулфат:

цинков сулфат (Zn SO₄ 7 H₂O) - 300 g;

вода - до 1000 ml.

3.2.2.2. Начин на работа

В 100-милилитрова мерителна колба се отмерват следните обеми вино (или мъст или мистел), като посочените разреждания са ориентировъчни:

• Мъст и мистели - пробата за анализ се разрежда 10% и се отмерват 10 ml от нея.

• Полусладки вина с плътност между 0,997 и 1,005 - вземат се 20 ml от неразреденото вино.

• Сухи вина - вземат се 50 ml от неразреденото вино. Добавят се 5 ml от разтвор I, калиев II хексацианоферат (3.2.2.1.1) и 5 ml от разтвор II, цинков сулфат (3.2.2.1.2). Разбърква се и се долива с вода до маркировката. Изчаква се 10 минути. Филтрира се.

Случаи:

• Един милилитър филтрат съответства на 0,01 ml мъст или мистел.

• Един милилитър филтрат съответства на 0,04 ml сладко вино.

• Един милилитър филтрат съответства на 0,20 ml полусладко вино.

• Един милилитър филтрат съответства на 0,50 ml сухо вино.

4. Определяне на захарите

4.1. Реактиви

4.1.1. Алкален разтвор на медна сол:

меден сулфат, чист (CuSO₄ 5 H₂O) - 25 g;

лимонена киселина (C₆H₈O₇ H₂O) - 50 g;

кристален натриев карбонат (Na₂CO₃ 10 H₂O) - 388 g;

вода - до 1000 ml.

Медният сулфат се разтваря в 100 ml вода, лимонената киселина - в 300 ml вода, а натриевият карбонат - в 300 - 400 ml гореща вода. Разбъркват се разтворите на лимонената киселина и на натриевия карбонат. Добавя се разтворът на медния сулфат и се довежда до един литър.

4.1.2. 30% разтвор на калиев йодид:

калиев йодид (KI) - 30 g;

вода - до 100 ml.

Съхранява се в бутилка от цветно стъкло.

4.1.3. 25% сярна киселина:

концентрирана сярна киселина (H₂SO₄) r₂₀ = 1,84 g/ml - 25 g;

вода - до 100 ml.

Киселината се прибавя бавно към водата, охлажда се и се довежда до 100 ml.

4.1.4. 5 g/l разтвор на нишесте - 5 g нишесте се разбърква в около 500 ml вода. Нагрява се до кипване, като постоянно се разбърква, след което се оставя да ври в продължение на 10 min. Добавят се 200 g натриев хлорид (NaCl). Оставя се да се охлади, след което се добавя вода, докато се получи един литър.

- натриев тиосулфат, 0,1 M разтвор;

- разтвор на инвертна захар, 5 g/l, който следва да се използва за проверка на метода за определяне:

В 200-милилитрова мерителна колба се поставят:

чиста суха захароза (C₁₂H₂₂O₁₁) - 4,75 g;

вода, приблизително - 100 ml;

концентрирана солна киселина (HCl) r₂₀ = 1,16 - 1,19g/ml - 5 ml.

Колбата се нагрява във водна баня, поддържана при 60°C, докато температурата на разтвора достигне 50°C; след това в продължение на 15 min се оставят колбата и разтворът при температура 50°C. Колбата се оставя да се охлади по естествен начин в продължение на 30 min, след което се потапя в студена водна баня. Разтворът се прелива в еднолитрова мерителна колба и се допълва до един литър. Този разтвор може да се съхрани в продължение на един месец. В момента на употреба се неутрализира пробата за анализ (този разтвор е приблизително 0,06 M) с разтвор на натриев хидроксид.

4.2. Начин на работа

В 300-милилитрова йодна колба се прави смес от 25 ml алкален разтвор на медна сол, 15 ml вода и 10 ml от избистрения разтвор. Този обем захарен разтвор не трябва да съдържа повече от 60 mg инвертна захар. Добавят се няколко малки парчета пемза. Към колбата се прикрепя обратен хладник и в рамките на 2 min се нагрява сместа до кипене. Оставя се сместа да ври точно 10 min.

Колбата веднага се охлажда в студена течаща вода. След като се охлади изцяло, се добавят 10 ml 30% разтвор на калиев йодид (4.1.2), 25 ml 25% сярна киселина (4.1.3) и 2 ml разтвор на нишесте (4.1.4). Титрува се с разтвор на 0,1 M натриев тиосулфат (4.1.5) - n ml.

Освен това се прави и титруване без наличие на захарен разтвор - 10 ml захарен разтвор се заменя с 10 ml дестилирана вода - n' ml натриев тиосулфат.

4.3. Изразяване на резултатите

4.3.1. Изчисления

Съдържащото се в пробата количество захар, изразена като инвертна захар, се получава от таблицата като функция на използваното количество натриев тиосулфат - (n' - n) в милилитри.

Съдържанието на захар във виното се изразява в грамове инвертна захар на литър, с точност до първия десетичен знак, като се взема предвид разреждането по време на избистрянето, както и обема на пробата за анализ.

4.3.2. Повторяемост

r = 0,015 х_i

х_i е концентрацията на инвертната захар в грамове на литър на проба

4.3.3. Възпроизводимост

R = 0,058 х_i

х_i е концентрацията на инвертната захар в грамове на литър на проба

Таблица за изчисляване на редуциращите захари, в милиграми, в зависимост от изразходваното количество 0,1 М натриев тиосулфат: (n' - n) в ml е количеството на редуциращите захари в mg

Na₂S₂O₃	Редуци-	Разлика	Na₂S₂O₃,	Редуци-	Разлика
(ml 0,1 M)	ращи		(ml 0,1 M)	ращи
	захари			захари
	(в mg)			(в mg)
1	2,4	2, 4	13	33, 0	2, 7
2	4,8	2, 4	14	35, 7	2, 8
3	7, 2	2, 5	15	38, 5	2, 8
4	9, 7	2, 5	16	41, 3	2, 9
5	12, 2	2, 5	17	44, 2	2, 9
6	14, 7	2, 6	18	47, 2	2, 9
7	17, 2	2, 6	19	50, 0	3, 0
8	19, 8	2, 6	20	53, 0	3, 0
9	22, 4	2, 6	21	56, 0	3, 1
10	25,0	2, 6	22	59, 1	3, 1
11	27, 6	2, 7	23	62, 2
12	30, 3	2, 7

6. Определяне на захароза

1. Принцип на методите

I. Метод за качествен анализ чрез тънкослойна хроматография - захарозата се отделя от останалите захари чрез тънкослойна хроматография върху плака, покрита с целулоза. Проявителят е карбамид-солна киселина в сушилня при 105°C.

II. Метод за анализ и определяне чрез високоефективна течна хроматография - захарозата се изолира върху силициева алкиламинна колона и се детектира чрез рефрактометрия. Количественото определяне се извършва по метода на външния стандарт.

Забележка. Проверка на резултатите от анализа на мъст или вино може да се направи и по метода, основаващ се на деутериен ядрено-магнитен резонанс (ЯМР), който е описан във връзка с определянето на обогатителните добавки на мъстта, ректифицираната концентрирана мъст и вината.

За анализ и определяне на захароза може да се използва и газова хроматография, както е описано в метода ("42. Специфичен анализ на концентрирана и ректифицирана гроздова мъст" буква "е" - мезо-инозитол, ксило-инозитол и захароза).

2. Качествен анализ с тънкослойна хроматография

2.1. Оборудване

2.1.1.Хроматографски плаки, покрити с целулозен прах с избрана дебелина (20 x 20 cm, напр. MN300);

2.1.2. Хроматографска вана;

2.1.3. Микропипета;

2.1.4. Сушилня с терморегулиране до 105°C ± 2°C.

2.2. Реактиви

2.2.1. Обезцветяващ въглен;

2.2.2. Подвижна фаза: дихлорметан - ледена оцетна киселина (r₂₀=1,05 g/ml) - етилов алкохол - метилов алкохол - вода (50:25:9:6:10);

2.2.3. Проявител:

карбамид - 5 g;

солна киселина 2 M - 20 ml;

етилов алкохол - 100 ml.

2.2.4. Стандартен разтвор:

глюкоза - 35 g;

фруктоза - 35 g;

захароза - 0,5 g;

дестилирана вода - 1000 ml.

2.3. Процедура

2.3.1.Приготвяне на пробата

Когато мъстта или виното са силно оцветени, те се обезцветяват чрез обработка с активен въглен.

В случай с концентрирана ректифицирана мъст се използва разтвор на захар с концентрация 25% (m/m) (25°Brix), приготвен по начина, описан в метода " 24.Определяне на pH" на вино и мъст, т. 4.1.2, и се разрежда с вода до една четвърт от неговата концентрация - от обем 25 ml до 100 ml в мерителна колба.

2.3.2. Получаване на хроматограма

На стартовата линия на разстояние 2,5 mm от долния ръб на плаката се поставят - 10 µl от пробата за анализ и 10 µl от стандартния образец.

Поставя се плаката в хроматографската вана, наситена с пари на подвижната фаза. Оставя се подвижната фаза да достигне в границите на един сантиметър от горния край на плаката. Изважда се плаката и се изсушава в топла въздушна струя. Операцията се повтаря още два пъти, като плаката всеки път трябва да се изсушава. Плаката се напръсква равномерно с 15 ml проявител и се поставя в сушилня при 105°C за около 5 min.

2.4. Резултати

Захарозата и фруктозата се наблюдават като тъмносиня точка на бял фон; глюкозата предизвиква зелена точка с по-малка плътност.

3. Методи за определяне с течна хроматография

Посочени са примерни хроматографски условия.

3.1. Оборудване

3.1.1. Хроматограф за високоефективна течна хроматография (HPLС):

• десетмикролитров инжектор;

• детектор - диференциален рефрактометър или интерферометричен рефрактометър;

• кварцова колона с алкиламинов пълнеж (дължина 25 mm, вътрешен диаметър 4 mm);

• предпазна колона, запълнена със същата фаза;

• устройство за изолиране на предпазната колона и на аналитичните колони или за поддържане на тяхната температура (30°C);

• записващо устройство и ако е необходим интегратор;

• дебит на подвижната фаза: един милилитър на минута.

3.1.2. Приспособление за мембранна филтрация (0,45 µm)

3.2. Реактиви

3.2.1. Двойно дестилирана вода;

3.2.2. Ацетонитрил (СН₃CN) с качество, подходящо за високоефективна течна хроматография;

3.2.3. Подвижна фаза - ацетонитрил - вода, подложена преди това на мембранно филтриране (0,45 µm), (80:20 v/v).

Преди да бъде използвана, подвижната фаза трябва да бъде обезгазена.

3.2.4. Стандартен разтвор - 1,2 g/l воден разтвор на захароза.

Филтрира се с помощта на мембранен филтър 0,45 µm.

3.3. Начин на работа

3.3.1. Приготвяне на пробата:

• за вина и мъст - филтрира се с помощта на мембранен филтър (0,45 µm);

• за концентрирана ректифицирана мъст - използва се разтворът, получен чрез разреждане на ректифицираната концентрирана мъст до 40% (m/v), както е описано в метода "13.Определяне на обща киселинност", т. 5.1.2, и се филтрира с помощта на мембранен филтър 0,45 µm.

3.3.2. Хроматографско определяне

В хроматографа последователно се инжектират 10 µl от стандартния разтвор и 10 µl от пробата за анализ, приготвена по начина, описан в т. 3.3.1. Тези впръсквания се повтарят в същия ред. Хроматограмата се записва. Времето на задържане на захарозата е приблизително 10 min.

3.4. Изчисления

При изчисляване се използва средната стойност на два резултата за стандартния разтвор и за пробата за анализ.

3.4.1. За вина и мъст - концентрацията се изчислява в грамове на литър.

3.4.2. За концентрирана ректифицирана мъст - ако C е концентрацията на захарозата в g/l в 40% (m/v) разтвор на ректифицираната концентрирана мъст, тогава концентрацията на захарозата в g/kg в ректифицираната концентрирана мъст е 2,5 C.

3.5. Изразяване на резултатите

Концентрацията на захарозата във вината, мъстта и ректифицираната и концентрирана мъст се изразява в грамове на литър (за вината и мъстта) и в грамове на килограм (за ректифицираната и концентрирана мъст), всички с точност до първия десетичен знак.

7. Определяне на глюкоза и фруктоза

1. Определение

Глюкозата и фруктозата се определят поотделно по ензимен метод с цел да се изчисли съотношението глюкоза/фруктоза.

2. Принцип на метода

Глюкозата и фруктозата се фосфорилизират от аденозин трифосфат (АТФ) по време на ензимна реакция, катализирана чрез хексокиназа (ХК), като в резултат се получава глюкозо 6-фосфат (Г6Ф) и фруктозо 6-фосфат (Ф6Ф).

			XK
глюкоза	+	АТФ	<------->	Г6Ф	+	АДФ
			XK
фруктоза	+	АТФ	<------->	Ф6Ф	+	АДФ

Глюкозо 6-фосфат най-напред се окислява до глюконат 6-фосфат от никотинамид аденин динуклеотид фосфат (НАДФ) в присъствието на ензима глюкозо 6-фосфат дехидрогеназа (Г6ФДХГ). Полученото количество редуциран никотинамид аденин динуклеотид фосфат (НАДФТ) съответства на това на глюкозо 6-фосфат (Г6Ф), следователно и на съответното количество глюкоза.

			Г6ФДХГ
Г6Ф	+	НАДФТ	<------------->	глюконат 6-фосфат	+	НАДФТ	+	H+

Редуцираният никотинамид аденин динуклеотид фосфат (НАДФТ) се определя количествено при дължина на вълната 340 nm.

В края на тази реакция глюкозо 6-фосфат се превръща във фруктозо 6-фосфат вследствие на действието на фосфоглюкозо изомераза (ФГИ):

	ФГИ
Ф6B	<------->	H6B

Глюкозо 6-фосфат отново реагира с никотинамид аденин динуклеотид фосфат, в резултат на което се получава глюконат 6-фосфат и редуциран никотинамид аденин динуклеотид фосфат, след което се прави измерване на последното вещество.

3. Апаратура

• спектрофотометър, даващ възможност да се правят измервания при 340 nm дължина на вълната, при която поглъщането от НАДФТ е максимално. Това включва абсолютни измервания (т.е. не се използват калибровъчни графики, но се извършва стандартизиране с използване на светлинната абсорбируемост на НАДФТ), така че е необходимо да се направи проверка на скалите на апаратурата за дължината на вълната и на получаваните чрез апаратурата стойности за поглъщането. Ако не се разполага с такъв спектрофотометър, може да се използва спектрофотометър с източник, характеризиращ се с прекъснат спектър, който позволява да се правят измервания при 334 или при 365 nm;

• кювети с дължина на оптичния път един сантиметър или кювети за еднократна употреба;

• пипети за използване при работа с разтвори за ензимни анализи от 0,02, 0,05, 0,1, 0,2 ml.

4. Реактиви:

4.1. Разтвор 1: буферен разтвор (0,3 M триетаноламин; pH 7,6; 4 x 10^-3 M в Mg²⁺; разтварят се 11,2 g триетаноламин хидрохлорид (C₂H₅)₃N, HCl) и 0,2 g MgSO₄7H₂O в 150 ml двойно дестилирана вода, добавят се около 4 ml разтвор на 5 M натриев хидроксид (NaOH), за да се получи pH 7,6, и се долива до 200 ml. Този буферен разтвор може да се съхранява в продължение на 4 седмици при +4°C.

4.2. Разтвор 2: разтвор на никотинамид аденин динуклеотид фосфат (около 11,5 x 10^-3 M). Разтварят се 50 mg никотинамид аденин динуклеотид фосфат в 5 ml двойно дестилирана вода. Този разтвор може да се съхранява в продължение на четири седмици при +4°C.

4.3. Разтвор 3: разтвор на аденозин 5'-трифосфат (около 81 x 10^-3 M). Разтварят се 250 mg динатриев аденозин 5'-трифосфат и 250 mg кисел натриев карбонат (NaHCO₃) в 5 ml двойно дестилирана вода.Този разтвор може да се съхранява в продължение на четири седмици при +4°C.

4.4. Разтвор 4: разтвор на хексокиназа / глюкоза 6-фосфат дехидрогеназа: смесват се 0,5 ml хексокиназа (2 mg протеин / ml или 280 U / ml) с 0,5 ml глюкоза 6-фосфат дехидрогеназа (един милиграм протеин на милилитър ). Този разтвор може да се съхранява в продължение на една година при +4°С.

4.5. Разтвор 5: фосфоглюкозо изомераза (2 mg протеин / ml или 700 U / ml). Суспензията се използва неразредена. Този разтвор може да се съхранява в продължение на една година при +4°С.

Забележка. Всички посочени разтвори се предлагат на пазара.

5. Начин на работа

5.1. Приготвяне на пробата

В зависимост от изчисленото количество глюкоза + фруктоза на литър пробата се разрежда, както следва:

Измерване	Измерване	Разреждане	Фактор (F)
при 340 и	при 365 nm	с вода	на разреждане
334 nm
до 0,4 g/l	0,8 g/l	-	-
до 4,0 g/l	8,0 g/l	1 + 9	10
до 10,0 g/l	20,0 g/l	1 + 24	25
до 20,0 g/l	40,0 g/l	1 + 49	50
до 40,0 g/l	80,0 g/l	1 + 99	100
над 40,0 g/l	80,0 g/l	1 + 999	1000

5.2. Определяне

Оптическата нула на спектрофотометъра при дължина на вълната 340 nm се определя спрямо въздух или вода.

Температура - между 20°C и 25°C.

В две кювети с оптичен път един сантиметър се поставят:

	Сравнителна	Аналитична
	проба	проба
Разтвор 1 (4.1) (20°C)	2,50 ml	2,50 ml
Разтвор 2 (4.2)	0,10 ml	0,10 ml
Разтвор 3 (4.3)	0,10 ml	0,10 ml
Проба, която следва да бъде измерена		0,20 ml
Двойно дестилирана вода	0,20 ml
Правят се смесите, разбъркват се и след около 3 min се отчита поглъщането на разтворите (A1). Започва се реакцията чрез добавяне на:
Разтвор 4 (4.4)	0,02 ml	0,02 ml
Разбърква се и се изчаква 15 min; отчита се поглъщането и след още 2 min се проверява дали реакцията е спряла (A2). Веднага се добавя
Разтвор 5 (4.5)	0,02 ml	0,02 ml.

Разбърква се; след 10 min се отчита поглъщането и след още две минути се проверява дали реакцията е спряла (A₃).

Изчисляват се разликите в поглъщането:

A₂ - A₁ съответстват на глюкоза,

A₃ - A₂ съответстват на фруктоза,

За сравнителната и аналитичната проба.

Изчисляват се разликите в поглъщането за сравнителната (DА_Т) и за аналитичната проба (DА_D) и след това се изчислява следното:

- за глюкоза: DА_G = DА_D - DА_T

- за фруктоза: DА_F = DА_D - DА_T

Забележка. Времето, което е необходимо, за да приключи действието на ензима, може да е различно за различните партиди. Получената стойност е ориентировъчна и се препоръчва тя да бъде определяна за всяка партида.

5.3. Изразяване на резултатите

5.3.1. Изчисление

Общата формула за изчисляване на концентрациите е:

C = (V x PM)/(1000e x d x v) DА, в g/l, където

V е обемът на анализирания разтвор (ml);

v - обемът на пробата (ml);

PM - молекулната маса на веществото, което следва да бъде определено;

d - оптичният път на елемента (cm);

e - коефициент на поглъщане на НАДФТ за 340 nm = 6,3 (mmol^-1 x l x cm^-1);

V = 2,92 за определяне на глюкоза;

V = 2,94 за определяне на фруктоза;

v = 0,20 ml;

M = 180;

d = единица.

Ето защо:

за глюкоза - C (g/l) = 0,417 DА_G

за фруктоза - C (g/l) = 0,420 DА_F

Ако пробата е била разредена по време на приготвянето ѝ, резултатът се умножава с коефициента на разреждане F.

Забележка. Ако измерванията са извършени при 334 или 365 nm, се получават следните изрази:

• измерване при 334 nm: S = 6,2 (mmol^-1 x l x cm^-1)

за глюкоза - C (g/l) = 0,425 DА_G

за фруктоза - C (g/l) = 0,428 DА_F

• измерване при 365 nm - S = 3,4 (mmol^-1 x l x cm^-1)

за глюкоза - C (g/l) = 0,773 DА_G

за фруктоза - C (g/l) = 0,778 DА_F

5.3.2. Повторяемост (r)

r = 0,056 x_i

5.3.3. Възпроизводимост (R)

R = 0,12 + 0,076 x_i

x_i - концентрацията на глюкоза или фруктоза в грамове на литър.

8. Откриване на обогатителни добавки към гроздова мъст, концентрирана гроздова мъст, концентрирана ректифицирана гроздова мъст и вина с използване на деутериен ядрено-магнитен резонанс

1. Определение

Атомите на деутерия, който се съдържа в захарите и водата на мъстта, се разпределят след ферментацията в молекулите I, II, III и IV на виното:

CH₂D CH₂ OH	(I)	CH₃ CHD OH	(II)
CH₃ CH₂ OD	(III)	HOD	(IV)

Добавянето на екзогенна захар (шаптализация) преди ферментирането на мъстта се отразява върху разпределението на деутерия.

В сравнение с параметрите на естественото вино от същия район обогатяването с екзогенна захар води до следните промени:

(D/H)_I - изотопно отношение, свързано с молекула I

(D/H)_II - изотопно отношение, свързано с молекула II

(D/H)_W^Q - изотопно отношение на водата във виното

R = 2 (D/H)_II / (D/H)_I

изразява относителното разпределение на молекули I и II; R се измерва директно от h-интензитетите на сигналите, като

R = 3 h_II / h_I

(D/H) _I характеризира предимно растителните видове, които са синтезирали захарта и в по-малка степен географското положение на мястото на реколтата (вида на водата, която е използвана по време на фотосинтезата);

(D/H) _II отразява климатичните характеристики на мястото на производство на гроздето (вид дъждовна вода и климатични условия) и в по-малка степен концентрацията на захар в изходната мъст;

(D/H)_W^Q отразява климатичните характеристики на мястото на производство и концентрацията на захар в оригиналната мъст.

2. Принцип на метода

Дефинираните параметри [R, (D/H)_I, (D/H)_II] се определят чрез деутериен ядрено-магнитен резонанс в етилов алкохол, извлечен от виното или от продуктите, получавани при ферментация на мъст, концентрирана мъст или концентрирана ректифицирана мъст при определени условия; към тях може да се добави определяне на изотопното отношение на извлечената от виното вода, (D/H)_W^Q и определяне на отношението C¹³/C¹² в етиловия алкохол.

3. Подготовка на пробата за анализ

3.1. Екстракция на етанола и водата във виното

Забележка. Всеки метод за екстракция на етанол може да бъде използван, доколкото 98 до 98,5% от общото алкохолно съдържание във виното може да се възстанови и дестилатът от виното е с алкохолно съдържание 92 до 93 масови % (95 обемни %).

3.1.1. Апаратура и реактиви

• Апаратът за екстракция на етанол (фиг. 1) представлява:

- електрически нагревател с токов регулатор;

- облодънна колба с шлифовано гърло с обем един литър;

- колона "Кадиотова" с въртящо се устройство и подвижна част от тефлон;

- конични колби с шлифовано гърло 125 ml;

- бутилки с пластмасови тапи 60 и 125 ml.

• Реактиви за определяне на водното съдържание - по метода на Карл Фишер (примерно на Мерк - 9241 и 9243).

3.1.2. Начин на работа

3.1.2.1. Определяне на алкохолното съдържание на виното до 0,05 об. % - t^v

3.1.2.2. Екстракция на етанола

Хомогенизирана проба от 500 ml вино с алкохолно съдържание t^v се поставя в колбата на апарата за дестилация с константа на оттичане, близка до 0,9. На мястото за събиране на дестилата се поставя конична колба с шлифовано гърло от 125 ml. Дестилатът се събира между 78,0°C - 78,2°C, което е приблизително 40 - 60 ml. Ако температурата надвишава 78,5°C, операцията се спира за 5 min.

Когато температурата се върне до 78°C, отново започва да се събира дестилатът до 78,5°C и тази операция се повтаря, докато температурата, след прекратяване на събирането и работа в затворен кръг, не остане постоянна. Пълният процес на дестилация продължава около 5 h. Тази процедура позволява да се събере между 98 и 98,5% от общото съдържание на алкохол във виното и да се събере дестилат с алкохолно съдържание между 92 и 93 масови % (95 обемни %), за установените условия на ЯМР, описани в т. 4.

Измерване на събрания етанол

Една хомогенна проба от остатъка се пази в колба 60 ml и представлява водното съдържание във виното. Нейното изотопно съотношение може да бъде определено при необходимост.

Забележка. Ако се разполага със спектрометър с 10 mm сонда (вж. т. 4), една хомогенна проба от 300 ml от виното е достатъчна.

3.1.2.3. Определяне на алкохолното съдържание в екстракта

Водното съдържание p, в g, е съдържанието на вода, определено по метода на Карл Фишер, като е използвана проба от около 0,5 ml от алкохол с точно известна маса p.

Фиг. 1. Устройство за екстракция на етанол

Алкохолното съдържание се определя по формулата:

t_m^D = 100 (p - p')/p

3.2. Ферментация на мъст, концентрирана мъст и концентрирана ректифицирана мъст

3.2.1. Апарат и реагенти

• Винена киселина.

• DIFCO - азот от дрожди и бактерии без аминокиселини.

• Активни сухи дрожди (Saccharomyces cerevisiae).

Ако изотопното съотношение на мъстта е известно, дрождите могат да бъдат реактивирани преди да бъдат използвани в продължение на 15 min, като се използва минимално количество хладка недестилирана вода (1 g дрожди в 50 ml вода), с изотопно съотношение близко до това на водата в мъстта.

Когато не се познава изотопното отношение на водата в мъстта, тогава е по-добре да се използват директно дрождите.

Количеството на сухите дрожди, които трябва да се използват, е приблизително един грам или около 1010 клетки за един литър мъст.

Ферментатор с обем 1,5 l, снабден с устройство, което да го държи херметически затворен и да кондензира алкохолните пари, така че по време на ферментацията да не се допуска загуба на етанол. Превръщането на ферментиращите захари в алкохол трябва да бъде по-високо от 98%.

3.2.2. Начин на работа

3.2.2.1. Мъст

• Прясна мъст

Прехвърля се във ферментатора един литър мъст, чиято концентрация на ферментиращи захари е била предварително определена. Добавят се сухи дрожди, предварително рехидратирани. Поставя се херметизиращото устройство. Ферментацията се оставя да протече при температура около 20°C до пълното ферментиране на захарите. След като бъде определен алкохолът на продукта на ферментацията и след като бъде изчислена степента на превръщане на захарите в алкохол, ферментиралата течност се центрофугира и дестилира.

• Мъст, съдържаща серен диоксид (сулфитирана мъст).

Известно количество от мъстта, малко повече от един литър (около 1,2 l ), се десулфитира чрез барботация на азот в мъстта на водна баня при температура 70 - 80°C на обратен хладник, докато съдържанието на общ серен диоксид стане по-ниско от 200 mg/l. Внимава се да не се допусне никаква концентрация чрез изпаряване на водата. За целта се използва ефикасен хладник.

Един литър от десулфитираната мъст се прехвърля във ферментатора и се продължава, както е описано за прясната мъст.

Забележка. Ако за сулфитиране на мъстта е използван калиев метабисулфит, тогава преди десулфитиране на мъстта трябва да бъдат добавени 0,25 ml сярна киселина (r₂₀ = 1,84 g/ml) за грам метабисулфит, използван за един литър мъст.

3.2.2.2. Концентрирана мъст.

Във ферментатора се прехвърлят V ml концентрирана мъст, съдържаща количество захар, което е известно (приблизително 170 g). Обемът се довежда до един литър (1000 - V) с обикновена вода със същото изотопно съотношение както сравнителната проба на мъстта, както е посочено в т. 3.2.1. Добавят се 3 g DIFCO - азот от дрожди и бактерии без аминокиселини. Хомогенизира се и се процедира, както е посочено.

3.2.2.3. Концентрирана ректифицирана мъст.

Процедира се, както е посочено в т. 3.2.2.2. Довежда се до обем от един литър (1000 - V) с обикновена вода със същото изотопно съотношение както сравнителната проба на мъст, но и също така съдържаща 3 g разтворена винена киселина.

Забележка. Запазват се 50 ml от мъстта или десулфитираната мъст, или концентрираната мъст, или ректифицираната и концентрирана мъст с оглед възможната екстракция на вода и определянето на нейното изотопно съотношение (D/H)_W^Q.

Екстракцията на вода, съдържаща се в мъстта, може да бъде много лесно осъществена чрез азотропна дестилация, като се използва толуол.

3.3. Подготовка на алкохолната проба за ЯМР измерване

3.3.1. Реагенти

N,N-тетраметилкарбамид (TMU); използва се N,N-тетраметилкарбамид (TMU) с дадено стандартно изотопно съотношение D/H. Такава проба може да бъде доставена от:

DG for Science, Research and Development, Community

Bureau of References,

200 rue de la Loi,

B-1049, Brussels.

3.3.2. Начин на работа

• Сонда с диаметър 15 mm за ЯМР изследване. В предварително претеглена колба се прибавят 7 ml алкохол, получен по начина, описан в т. 3.1.2, и се претегля с точност 0,1 mg - m_A; прибавят се 3 ml вътрешен стандарт (TMU) и отново се претегля с точност до 0,1 mg - m_st. Хомогенизира се с разклащане.

• Сонда за ЯМР с диаметър 10 mm. Достатъчни са 3,2 ml алкохол и 1,3 ml (TMU). Според типа на спектрометъра и сондата, които се използват (т. 4), се добавя достатъчно количество от хексафлуоробензена като субстанция за стабилизиране на честотата на ядреномагнитното поле.

Спектрометър

Сонда

	10 mm	15 mm
7,05Т	150 µl	200 µl
9,4Т	35 µl	50 µl

3.4. Подготовка на водна проба за ЯМР изследване с цел възможно определяне на нейното изотопно съотношение.

3.4.1. Реагенти - N,N-тетраметилкарбамид - вж. т. 3.3.1.

3.4.2. Начин на работа

В предварително тарирана колба се прехвърлят 3 ml вода, получена както е описано в т. 3.1.2 или 3.2, и се измерва с точност до 0,1 mg - m'_E. Добавят се 4 ml вътрешен стандарт (TMU) и се претегля с точност до 0,1 mg - m'_st. Хомогенизира се чрез разклащане.

Забележка. Ако лабораторията разполага с електронен умножител за определяне на изотопни съотношения, измерването може да се проведе с този инструмент, за да се намали натоварването на ЯМР спектрометъра. Необходимо е да се стандартизира съотношението T_IV (т. 5.2) за всички партиди вина, които се изследват.

4. Записване на спектрите ЯМР на ²Н за алкохола и за водата

Определяне на изотопното съотношение

4.1. Апарат

• ЯМР-спектрометър, снабден със специална деутериева сонда, настроена на характерна честота Vо на полето Bo (или за Во = 7,05 Т; Vо = 46,05 MHz, и за Во = 9,4 T и Vо = 61,4 MHz), когато има и протоново разделящ канал и канал за стабилизиране на честотата на ядреномагнитното поле (затворено) на флуориновата честота. Разлагането, измерено върху спектъра, трансформирано без експоненциална мултипликация (т.е. LB = 0)(фиг. 2б) и изразена чрез широчината при полувисочината на метиловия и метиленовия сигнал на етанола и метиловия сигнал на (TMU), да е по-ниско от 0,5 Hz.

• Чувствителността, измерена чрез експоненциален мултиплициращ фактор LB = 2 (фиг. 2a), да е по-голяма или еквивалентна на 150 за метиловия сигнал на етанол с алкохолно съдържание 95 обемни % (93,5 масови %). При тези условия интервалът на сигурност за измерването на височината на сигнала, калкулиран за 97,5% вероятност (по критерия на Стюдант-Фишер) и 10 повторения на спектъра, е 0,35%.

• Автоматичен пробовземач.

• Компютър и софтуер.

• Сонди за проби 15 mm или 10 mm според вида на спектрофотометъра.

4.2. Стандартизиране на спектрометъра и проверки.

4.2.1. Стандартизиране - прави се редовно стандартизиране за хомогенност и чувствителност според инструкциите на производителя.

4.2.2. Проверка на валидността на проведената стандартизация - използват се стандартни етаноли, означени с буквите С, V и В, които имат изотопни концентрации, различни помежду си, своевременно стандартизирани. Те носят следните значения:

С - алкохол от тръстикова захар или царевично нишесте;

V - винен спирт;

В - алкохол от захар, добита от захарно цвекло.

Пробите могат да бъдат доставени от Community Bureau of References.

Като се следва процедурата, описана в т. 4.3, се определят изотопните стойности на тези алкохоли, като се означават по следния начин: С_mes; V_mes; В_mes (вж. т. 5.3).

Сравняват се със съответните еталонни стойности, изобразявайки високите стойности на С_st; V_st; В_st (вж. т. 5.3).

Фиг. 2а. Спектър RMN2H на етанола на виното с вътрешен стандарт (TMU:N,N - тетраметилурея)

Фиг. 2б. Спектър ²H на етанола, реализиран при същите условия както на фиг. 2а, но без експоненциална мултипликация (LB = 0)

Стандартното отклонение за повторяемостта, получено на средно 10 повторения на всеки един спектър, да е по-малко от 0,01 за съотношението R и по-малко от 0,3 ppm за (D/H)_I и (D/H)_II.

Средните стойности, получени за различните изотопни параметри [R, (D/H)_I, (D/H)_II], да са в рамките на стандартното отклонение на повторяемостта, дадено за тези параметри за трите стандартни алкохоли от C.B.Ref. Ако стойностите не са в посочените граници, проверките се правят отново.

4.3.Условия за получаване на ЯМР спектри

Алкохолната проба се поставя в епруветка от 10 или 15 mm или се въвежда в сондата. Пробата е подготвена, както е описано в т. 3.3 (или водната проба, подготвена, както е описано в т. 3.4).

Условията за получаване на ЯМР спектър са следните:

- постоянна температура на сондата (например 302 К);

- време за овладяване - най-малко 6,8 s за 1200 Hz спектрална широчина (16 К памет) (около 20 ppm при 61,4 MHz, или 27 ppm при 46,1 MHz);

- импулс: 90°;

- уточняване на времето за овладяване; неговата стойност да е от същия порядък на нарастване както времето за подготовка на пробата (dwell time);

- параболично радиодетектиране: фиксира се офсета 01 между OD и CHD референтните сигнали за етанола и между HOD и (TMU) - референтните сигнали за водата;

- определя се стойността на разделящия офсет 02 от протоновия спектър, измерен от разделящата спирала бобина върху същата епруветка; добро разделяне се получава, когато 02 е поставен в средата на честотния интервал между CH₃- и CH₂-групите; използва се методът за разделяне на широката лента.

За всеки спектър се провеждат NS броя акумулации, достатъчен, за да се получи съотношението сигнал/шум, дадено в т. 4.1 и се повтаря този брой от NS акумулации NE = 10 пъти. Стойностите на NS зависят от типа на спектрометъра и сондата, които се използват (част 4). Примерите за възможен избор са:

Спектрометър

Сонда

	10 mm	15 mm
7,05Т	NS = 340	NS = 200
9,4Т	NS = 200	NS = 128

5. Изразяване на резултатите

5.1. Етанол

За всеки от 10-те спектъра (вж. ЯМР спектър за етанол, фиг. 2а) се определя:

- СН₃СНDОН, m_st и m_A , вж. т. 3.3.2

- t_m^D, вж. т. 3.1.2.3

- (D/H) _st е изотопното отношение на вътрешния стандарт (TMU), посочен на бутилката, доставена от Community Bureau of References.

Използването на височината на пиковете вместо тяхната площ, което е по-малко прецизно, предполага, че широчината на пика на половината от височината са идентични и такова приближение е разумно, ако е приложимо (фиг. 2б).

5.2. Вода

Когато изотопното съотношение на водата е определено от ЯМР от смес от водата и (TMU), използва се следното съотношение:

- (D/H)_st - изотопното отношение на вътрешния стандарт (TMU), посочен върху бутилката, доставена от Community Bureau of References.

5.3. За всеки от изотопните параметри се изчислява средната от 10 определени стойности и интервалът на сигурност.

Допълнителен софтуер (например SNIF - ЯМР), подходящ за компютъра на спектрометъра, позволява такива изчисления да се извършват автоматично.

Забележка. Ако след стандартизацията на спектрометъра съществува систематична разлика между средните стойности, получени за характерните изотопи на стандартните алкохоли (т. 4.2.2) и стойностите, посочени от Community Bureau of References, в рамките на стандартното отклонение могат да бъдат приложими следните корекции, за да се получи вярната стойност за всяка проба Х.

Интерполацията ще бъде направена, като се вземат стойностите за стандартната проба, които са най-близки до тези на пробата Х.

Ако (D/H)_i^Xmes е измерената стойност, а (D/H)_i^Xcorr - коригираната стойност

(D/H)_i^Xcorr = (D/H)_i^Bst + a[(D/H) _i^Xmes - (D/H)_i^Bmes],

където

a = (D/H)_i^Vst - (D/H)_i^Bst / (D/H)_i^Vmes - (D/H)_i^Bmes

Пример:

Стандартните проби, доставени и стандартизирани от Community Bureau of References:

(D/H)_i^Vst = 102,0 ppm (D/H)_i^Bst = 91,95 ppm

Стандартните проби, измервани от лабораторията:

(D/H)_i^Vmes = 102,8 ppm (D/H)_i^Bmes = 93,0 ppm

Предполагаемата, некоригирана проба:

(D/H)_i^Xmes = 100,2 ppm

изчислената стойност на a = 1,0255 и (D/H)_i^corr = 99,3 ppm

6. Интерпретиране на резултатите

Сравняват се стойността R^X, получена за R на предполагаема проба, със съотношенията, получени за контролните вина. Ако R^X се различава с повече от 2 стандартни отклонения от средно претеглената R^T-стойност, получена за контролното вино, резултатът може да има презумпция за фалшифициране.

6.1. Добавяне на тръстикова захар, захар от захарно цвекло и царевична глюкоза

6.1.1. Вина

Ако:

R^X по-високо от R^T - презумпция за добавяне на цвеклова захар.

R^X по-малко от R^T - може да се счита, че е добавена захар от захарна тръстика или царевична глюкоза.

Забелязва се, че (D/H)_II^X и (D/H)_W^QX са се повишили.

Изпитва се (D/H)_I^X - има презумпция за:

• обогатяване с цвеклова захар

(D/H)_I^X на предполагаемата проба е по-ниско от (D/H)_I^Т, средно претеглена стойност, получена от контролните проби с повече от едно стандартно отклонение

• обогатяване със захар от захарна тръстика или царевична глюкоза:

(D/H)_I^X e по-високо от (D/H)_I^Т с повече от едно стандартно отклонение

• изчисляване на обогатяването Е е изразено в об. % етанол

• в случай на добавка на захар от захарно цвекло:

E об. % = t^V [(D/H)_I^Т - (D/H)_I^XI] / [(D/H)_I^Т - (D/H)_I^B], където

(D/H)_I^B е изотопното отношение за локация I за алкохол от цвеклова захар: (D/H)_I^B = 92,5 (Тези стойности са дадени в банка за данни на Kомисията на ЕС)

t^V - алкохолното съдържание на анализираното вино (X)

- случай на добавка на захар от захарна тръстика или царевична глюкоза

E об. % = t^V [(D/H)_I^X - (D/H)_I^Т] / [(D/H)_I^C - (D/H)_I^Т], където

(D/H)_I^C е изотопното отношение за локация I за алкохол от захар от захарна тръстика или царевична глюкоза: (D/H)_I^C = 110,5 (Тези стойности са дадени в банка за данни на Kомисията на ЕС)

t^V - алкохолното съдържание на анализираното вино (X)

6.1.2. Мъст, концентрирана мъст и пречистена концентрирана мъст

Стойностите на изотопните параметри за извлечения алкохол, както е описано в т. 3.1, от придобития ферментирал продукт (т. 3.2) от мъстта, концентрираната мъст или ректифицираната и концентрирана мъст, са изпитани според инструкциите, дадени в т. 6 в частта "Интерпретиране на резултатите" (т. 6.1.1) и сравнени с алкохола, извлечен от продукта на ферментацията на мъстта.

Обогатяването Е в об. % изразява обема на алкохол, добавен към ферментиралия продукт. Като се знае степента на разреждането, което е възможно да е било проведено преди ферментацията (на концентрираната и ректифицирана мъст), приемайки, че от 16,83 g захар се получава един об. % алкохол, се изчислява количеството захар, прибавено към един литър мъст, концентрирана мъст или концентрирана ректифицирана мъст.

6.2. Добавка на смес от цвеклова захар и тръстикова захар или царевична глюкоза.

Изотопното съотношение (D/H)_I и R са се изменили по-малко, отколкото ако е била прибавена захар само от единия тип.

(D/H)_II е по-високо, както и (D/H)_W^Q.

Тези добавяния могат да бъдат определени, като бъде определено и ¹³С/¹²С съотношението на етанола чрез спектрофотометрия; в този случай съотношението е повишено.

9. Определяне на пепел

1. Определение

Пепелното съдържание се дефинира като всички онези продукти, оставащи след изгаряне на утайката, останала след изпаряването на виното. Изгарянето се провежда по такъв начин, че всички катиони (изключвайки амониевия катион) са превърнати в карбонати или други безводни минерални соли.

2. Принцип на метода

Виненият екстракт се изгаря между 500 и 550°C, докато не бъде постигнато пълно изгаряне на органичния материал.

3.Апаратура

3.1. Кипяща водна баня.

3.2. Аналитични везни с точност до 0,1 mg.

3.3. Нагревател (гореща плоча) или инфрачервен изпарител.

3.4. Терморегулируема муфелна пещ.

3.5. Ексикатор.

3.6. Плосък платинов тигел с диаметър 70 mm и височина 15 mm.

4. Начин на работа

В предварително тариран платинен съд (първоначално тегло P₀ g) се отпипетирват 20 ml вино. Изпарява се на кипяща водна баня и остатъкът се загрява върху гореща плака при 200°С или на инфрачервен изпарител, докато започне карбонизирането. Когато спрат да се образуват газове, съдът се поставя в електрическа пещ с температура 525°С ± 25°С. След 15 min карбонизиране съдът се отстранява от пещта, добавят се 5 ml дестилирана вода, изпарява се на водна баня или с помощта на инфрачервен изпарител и отново остатъкът се загрява до 525°С в продължение на 10 min.

Ако окислението на карбонизираните частици не е завършило, операцията с измиването на частиците, изпаряването на водата и изгарянето се повтаря. За вина с високо съдържание на захари е по-добре да се добавят няколко капки чисто растително масло към екстракта преди първото изпепеляване с цел предпазване от димене.

След охлаждане в ексикатора съдът се претегля. Ако - P₁ g е теглото на претегления ексикатор след охлаждането, то теглото на пепелта в пробата (20 ml) е p = (P₁ - P₀), g.

5. Изразяване на резултатите

5.1. Метод на изчисляване

Теглото P₁ на пепелта в грамове на литър се закръглява до втория знак след десетичната запетая от формулата P = 50 p.

10. Определяне на алкалност на пепел

1. Определение

Алкалността на пепелта се дефинира като сума от катионите (без амониевия катион), свързани с органичните киселини на виното.

2. Принцип на метода

Пепелта се разтваря в определено количество от горещ стандартен разтвор, като излишъкът се определя чрез титруване. Използва се метил-оранж като индикатор.

3. Реактиви и апаратура:

3.1. разтвор на 0,05 М сярна киселина (H₂SO₄);

3.2. разтвор на 0,1 M натриев хидроксид (NaOH);

3.3. 0,1% разтвор на метил-оранж в дестилирана вода;

3.4. кипяща водна баня.

4. Начин на работа

Добавят се 10 ml от 0,05 М разтвор на сярна киселина (3.1) към пепелта от 20 ml вино, съдържаща се в платинения съд. Съдът се поставя на кипяща водна баня за около 15 min, като остатъкът се разбърква със стъклена бъркалка, за да се ускори разтварянето. Добавят се две капки от разтвора на метил-оранж и се титрува излишъкът от сярна киселина с 0,1 М натриев хидроксид (3.2) до промяна на цвета на индикатора в жълт.

5. Изразяване на резултатите

Метод на изчисляване

Алкалността на пепелта се изразява в милиеквиваленти на литър и се изчислява по формулата, като се закръглява до първия знак след десетичната запетая А = 5 (10 - n), където n е използваният обем 0,1 М натриев хидроксид.

11. Определяне на хлориди

1. Принцип на метода

Хлоридите се определят директно във виното чрез потенциометрия посредством Ag/AgCl електрод.

2. Апаратура:

2.1. pH/mV метър, градуиран на интервали най-малко 2 mV.

2.2. Магнитна бъркалка.

2.3. Ag/AgCl електрод с електролит - наситен разтвор от калиев нитрат.

2.4. Микробюрета, градуирана в 1/100 ml.

2.5. Хронометър.

3. Реактиви:

3.1. Стандартен разтвор на хлорид; 2,1027 g калиев хлорид, (KCl) (максимално 0,005% Брикс), изсушен преди употреба в ексикатор за няколко дни, се разтваря в дестилирана вода и се допълва до един литър. Един милилитър от този разтвор съдържа един милиграм Cl^-.

3.2. Разтвор на сребърен нитрат: 4,7912 g от аналитичния сребърен нитрат (AgNO₃) се разтварят в 10% (v/v) разтвор на алкохол и се допълва до един литър. Един милилитър от този разтвор съответства на един милиграм Cl^-.

3.3. Азотна киселина с поне 65% чистота (r₂₀ = 1,40 g/ml).

4. Процедура

4.1. Пет милилитра от стандартния разтвор на хлорид се отмерват в чаша от 150 ml, поставена на магнитна бъркалка, и се разрежда с дестилирана вода до около 100 ml, след което се подкиселяват с един милилитър азотна киселина (поне 65%). Електродът се потопява и се титрува чрез добавяне на нитратен разтвор за титруване с помощта на микробюрета при внимателно разбъркване. Добавят се следващите 2 ml на порции от 0,20 ml. Накрая се продължава с добавянето на фракции от един милилитър, докато всичките 10 ml бъдат добавени. След всяко добавяне се изчаква около 30 s преди да се отчетат съответстващите миливолти. Прехвърлят се така получените стойности на милиметрова хартия срещу съответстващите милилитри разтвор за титруване и се определя потенциалът на еквивалентния пункт на базата на единична точка от получената крива.

4.2. Пет милилитра от стандартния разтвор на хлориди се отмерват в чаша от 150 ml с 95 ml дестилирана вода и един милилитър азотна киселина (минимум 65%). Електродът се потопява и се титрува при разбъркване до достигане на потенциала на еквивалентния пункт. Определянето се повтаря до получаването на адекватни резултати. Тази проверка трябва да се извършва преди всяка серия от анализи на хлориди в проби.

4.3. Петдесет милилитра от виното за анализ се отмерват в мерителна чаша от 150 ml, добавят се 50 ml дестилирана вода и 1 ml азотна киселина (минимум 65%) и се титрува, като се следва процедурата, описана в т. 4.2.

5. Изразяване на резултатите

5.1. Изчисления

Ако n представлява количеството в милилитри разтвор на сребърен нитрат, изразходвано при титруването, съдържанието в анализираната проба е:

20 n - изразено като милиграма Cl на литър;

0,5633 n - изразено като милиеквиваленти на литър;

32,9 n - изразено като милиграма натриев хлорид на литър.

5.2. Повторяемост (r):

r = 1,2 mg Cl на литър;

r = 0,03 me/l;

r = 2,0 mg NaCl/l.

5.3. Възпроизводимост (R):

R = 4,1 mg Cl на литър;

R = 0,12 me/l;

R = 6,8 mg NaCl/l.

Забележка. За много прецизни анализи: получената крива се съпоставя с кривата на пълното титруване, получена по време на анализа на пробата с разтвор на сребърен нитрат.

а) отмерват се 50 ml от виното за анализ в чаша от 150 ml; добавят се 50 ml дестилирана вода и 1 ml азотна киселина (минимум 65%); титрува се, като се използва разтвор на сребърен нитрат и се добавят 0,5 ml по време на отчитане на съответстващия потенциал в миливолти; получава се първият приблизителен обем разтвор на сребърен нитрат;

б) започва се определянето при същите условия; добавят се 0,5 ml от разтвора за титруване, докато добавеният обем достигне 1,5 до 2 ml по-малко от определения обем в буква "а"; след това се добавя по 0,2 ml разтвор до достигане приблизително на еквивалентния пункт и се продължава с добавянето на 0,5 ml.

Крайната точка на измерването и точният обем на сребърния нитрат, изразходван за титруването, се получават:

- или чрез построяване на крива и определяне на еквивалентния пункт;

- или посредством формулата

V = V' + DV_i (DDE₁/DDE₁ + DDE₂), където:

V е обемът на разтвора за титруване до еквивалентния пункт;

V' - обемът на разтвора за титруване преди най-голямото изменение на потенциала;

DV_i - константният обем на съставките на разтвора за титруване, т.е. 0,2 ml;

DDE₁ - втората разлика в потенциала преди най-голямата промяна на потенциала;

DDE₂ - втората разлика в потенциала след най-голямата промяна на потенциала.

Пример:

Обем AgNO₃	E потенциал	Разлика	Втора разлика
за титруване	в миливолти	делта E	делта делта E
0	204
		4
0,2	208		0
		4
0,4	212		2
		6
0,6	218		0
		6
0,8	224		0
		6
1,0	230		2
		8
1,2	238		4
		12
1,4	250		10
		22
1,6	272		22
		44
1,8	316		10
		34
2,0	350		8
		26
2,2	376		6
		20
2,4	396

В този пример крайната точка на титруването е между 1,6 и 1,8 ml. Най-голямата промяна в потенциала (DE = 44 миливолта) се наблюдава в този интервал. Обемът на изразходвания разтвор сребърен нитрат за титруване, изразходван за измерване на хлоридите в тест-пробата, е:

V = 1,6 + 0,2 [22/(22+10)] = 1,74 ml

12. Определяне на сулфати

1. Принцип на метода

1.1. Сравнителен метод

Утаяване като бариев сулфат и претегляне. Утаеният бариев сулфат се отделя чрез промиване на утайката със солна киселина. В случай на анализ на гроздова мъст или вино, богато на серен диоксид, преди анализа се препоръчва десулфитация чрез кипене в плътно затворен съд.

1.2. Бърз тест-метод

Вината се класифицират в няколко категории, като се използва т.нар. метод на ограниченията, който е базиран на утаяването на бариев сулфат чрез използване на точен разтвор на бариев йон.

2. Сравнителен метод

2.1. Реактиви:

2.1.1. 2 М разтвор на солна киселина (HCl);

2.1.2. Разтвор на бариев хлорид 200 g/l (BaCl₂.2H₂O).

2.2. Начин на работа

2.2.1. Основен начин на работа

Отливат се 40 ml от анализираната проба в 50 ml центрофужна епруветка; добавя се 2 ml 2 М солна киселина и 2 ml разтвор на бариев хлорид - 200 g/l. Разбърква се със стъклена бъркалка с малко дестилирана вода и се оставя да престои 5 min. Центрофугира се 5 min, след това внимателно се отдекантирва бистрата течност. След това утайката от бариев сулфат се промива, както следва: добавят се 10 ml 2 М солна киселина, поставя се утайката в суспензия и се центрофугира 5 min, след което внимателно се отдекантирва бистрата част. Промиването се повтаря двукратно при същите условия с 15 ml дестилирана вода всеки път.

Утайката количествено се прехвърля посредством измиване с дестилирана вода в затворен платинов тигел и се поставя на водна баня при 100°С до пълно изпаряване. Сухата утайка се накалява няколко пъти за кратко на пламък до получаването на бял остатък.

Оставя се да се охлади в ексикатор и се претегля - m, mg (масата на бариевия сулфат).

2.2.2. Специална процедура: сулфатирана мъст и вино с високо съдържание на серен диоксид

Серният диоксид се елиминира предварително. В ерленмайерова колба 500 ml, снабдена с делителна фуния с кран за оттичане, се отмерват 25 ml вода и 1 ml чиста солна киселина (r_20°C= 1,15 до 1,18 g/ml). Разтворът се кипва за отстраняването на въздуха и се прехвърлят 100 ml вино през делителна фуния. Загрява се непрекъснато, докато обемът в колбата се редуцира до 75 ml, като се прехвърля количествено след охлаждане в мерителна колба от 100 ml. Долива се до марката с вода. Определят се сулфатите в 40 ml проба, както е указано в т. 2.2.1.

2.3.Изразяване на резултатите

2.3.1. Изчисления

Съдържанието на сулфати, изразено в милиграма на литър калиев сулфат (K₂SO₄) е: 18,76 m.

Съдържанието на сулфати в мъст или вино, изразено в милиграма на литър калиев сулфат, се закръглява до цяло число.

2.3.2. Повторяемост

до 1000 mg/l: r = 27 mg/l;

до 1500 mg/l: r = 41 mg/l.

2.3.3. Възпроизводимост

до 1000 mg/l: R = 51 mg/l;

до 1500 mg/l: R = 81 mg/l.

3. Бърз тест-метод

3.1. Реактиви:

3.1.1. Точен разтвор на бариев хлорид

2,804 g бариев хлорид (BaCl₂.2H₂O) и 10 ml солна киселина (r_20°C = 1,15 дo 1,18 g/ml) се разтварят в достатъчно количество вода за получаване на един литър разтвор; един милилитър от този разтвор преципитира определено количество сулфатни йони, еквивалентно на 2 mg калиев сулфат.

3.1.2. Сярна киселина (r_20°C = 1,84 g/ml), 1/10 (m/v) разреден разтвор

3.2. Начин на работа.

В три тест-епруветки се отмерват 10 ml от мъстта или виното и се добавят към № 1 - 3,5 ml, към № 2 - 5 ml и към № 3 - 10 ml, от разтвора на бариевия хлорид. Разклаща се и се загрява до кипене; оставя се за един до два часа. Течността от всяка епруветка се отдекантирва, филтрира и се разделя на две части. Към едната част се добавят няколко части от разредената сярна киселина, към другата - няколко капки от разтвора на бариевия хлорид. Оглежда се всяка от епруветките и се забелязва дали съдържанието на всяка от тях е чисто или мътно. Интерпретацията на тези резултати се дава от таблицата:

Филтрирано вино +

Вино	Бариев	разредена	бариев
	дихлорид	сярна	дихлорид
		киселина
ml	ml	мътно	бистро

(по-малко от 0,7 g/l K₂SO₄)

1 опит	10	3,5
			мътно	бистро

(повече от 0,7 g/l K₂SO₄ )

мътно

бистро

(по-малко от 1 g/l K₂SO₄)

2 опит	10	5
			мътно	бистро

(повече от 1 g/l K₂SO₄ )

мътно

бистро

(по-малко от 2 g/l K₂SO₄)

3 опит	10	10
			мътно	бистро

	(повече от 1 g/l K₂SO₄ )

13. Определяне на обща киселинност

1. Определение

Общата киселинност на виното е сума от титруемите киселини, определени до рН 7 чрез титруване със стандартен алкален разтвор. Въглеродният диоксид не се включва в общата киселинност.

2. Принцип на метода

Потенциометрично титруване или титруване с бромтимолблау като индикатор и сравнение на цвета на крайния разтвор със стандартен.

3. Реактиви

3.1. Буферен разтвор рН 7,0:

- Монокалиев фосфат ([КН₂РО₄) - 107,3 g;

- 1 М разтвор на натриев хидроксид (NаОН) - 500 ml;

- Вода - до 1000 ml.

Може да се използва и готов буферен разтвор с рН 7,0 (стандартен образец).

3.2. 0,1 М разтвор на натриев хидроксид (NаОН)

3.3. Разтвор на индикатор бромтимолблау - 4 g/l:

- Бромтимолблау (С₂₇Н₂₈Вr₂О₅S) - 4 g.

- Хим.чист етанол, 96 об. % - 200 ml.

Разтваря се и се добавят:

- Вода, освободена от СО₂ - 200 ml.

- 1 М разтвор на натриев хидроксид, достатъчно, за да даде синьо-зелено оцветяване (рН 7), приблизително - 7,5 ml.

- Вода - до 1000 ml.

4. Апаратура

4.1. Водна вакуум помпа.

4.2. Вакуумни колби с обем 500 ml.

4.3. Потенциометър с градуирана в рН единици скала и електроди. Стъкленият електрод трябва да се съхранява в дестилирана вода. Каломеловият електрод трябва да се съхранява в разтвор, наситен с калиев хлорид. Често е необходимо да бъде използван комбиниран електрод, който се съхранява в дестилирана вода.

4.4. Мерителни цилиндри от 50 ml (за вино) и от 100 ml (за концентрирана ректифицирана гроздова мъст).

5. Процедура

5.1. Подготовка на пробата

5.1.1. Вина

Отстраняване на въглеродния диоксид: поставят се около 50 ml от виното във вакуумколбата; вакуумира се с водната помпа за около 1 - 2 min, като непрекъснато се разклаща.

5.1.2. Концентрирана ректифицирана гроздова мъст

Поставят се 200 g от концентрирана ректифицирана гроздова мъст във вакуумколбата; долива се до 500 ml с вода; хомогенизира се.

5.2. Потенциометрично титруване

5.2.1. Калибриране на рН-метъра

рН-метърът е калибриран за работа при 20°С съгласно инструкциите на производителя с буферен разтвор с рН 7,0 при 20°С.

5.2.2. Метод на измерването

В мерителен цилиндър (т. 4.4) се поставя определен обем от пробата, подготвена, както е описано в 5.1, равен на 10 ml в случаите на анализ на вино и - 50 ml в случаите на анализ на концентрирана ректифицирана гроздова мъст. Добавят се около 10 ml дестилирана вода и след това 0,1 М разтвор на натриев хидроксид (т. 3.2) от бюретата, докато рН не достигне стойност, равна на 7,0 при 20°С. Натриевият хидроксид се добавя бавно, а разтворът се разбърква непрекъснато - n, ml [обемът на добавения 0,1 М натриев хидроксид (Na OH)].

5.3. Титруване с индикатор (бромтимолблау)

5.3.1. Предварителен тест: определяне на еквивалентния пункт по цвета на индикатора.

В мерителен цилиндър (т. 4.4) се поставят 25 ml кипяща дестилирана вода, 1 ml разтвор на бромтимолблау (т. 3.3) и обем, приготвен както в т. 5.1, равен на 10 ml в случаите на анализ на вино и 50 ml в случаите на анализ на концентрирана ректифицирана гроздова мъст. Титрува ce с 0,1 М разтвор на натриев хидроксид (т. 3.2), докато цветът се промени в синьо-зелен. Добавят се 5 ml от буферния разтвор с рН 7 (т. 3.1).

5.3.2. Измерване

В мерителен цилиндър (т. 4.4) се поставят 30 ml кипяща дестилирана вода, 1 ml разтвор на бромтимолблау (т. 3.3) и обем, приготвен както в (т. 5.1), равен на 10 ml в случаите на анализ на вино и 50 ml в случаите на анализ на концентрирана ректифицирана гроздова мъст. Титрува се с 0,1 М разтвор на натриев хидроксид (т. 3.2), докато цветът се промени както в теста, описан в т. 5.3.1 - n, ml (обемът на добавения 0,1 М натриев хидроксид).

6. Изразяване на резултатите

6.1. Метод на изчисляване

6.1.1. Вина

• общата киселинност се изразява в милиеквиваленти на литър и се определя по формулата А = 10n. Закръглява се до първия десетичен знак.

• общата киселинност, изразена в грамове винена киселина на литър, се изчислява по формулата А' = 0,075А. Закръглява се до първия десетичен знак.

6.1.2. Концентрирана ректифицирана гроздова мъст

• общата киселинност се изразява в милиеквиваленти на килограм концентрирана ректифицирана гроздова мъст по формулата: а = 5n

• общата киселинност се изразява в милиеквиваленти на килограм общи захари по формулата

A = 500n /P ,

закръглена до първия десетичен знак, където:

Р е масовият % от общите захари (m/m).

6.2. Повторяемост (r) за титруването с индикатор:

за бели, розе и червени вина

r = 0,9 me/l;

r = 0,07 g винена киселина/l.

6.3. Възпроизводимост (R) за титруване с индикатор (т. 5.3):

За бяло вино и розе:

R = 3,6 me/l;

R = 0,3 g винена киселина/l;

За червено вино:

R = 5,1 me/l;

R = 0,4 g винена киселина/l.

14. Определяне на летлива киселинност

1. Определение

Летливата киселинност се формира от киселините от реда на оцетна киселина, които се намират във виното в свободно състояние или свързано във вид на соли.

2. Принцип на метода

Титруване на летливите киселини, отделени от виното чрез дестилация, и титруване на дестилата.

Въглеродният диоксид предварително се отстранява от виното. Киселинността на свободния или общия серен диоксид, дестилиран при тези условия, се отчита чрез съответна поправка. Киселинността на сорбиновата киселина, която може да е била добавена, също се определя.

Забележка. Част от използваната салицилова киселина, използвана в някои страни за стабилизиране на виното преди анализа, е представена в дестилата. Тя се определя и се изважда от киселинността. Методът за определяне е описан в т. 7.

3. Реактиви:

3.1. Кристална винена киселина (С₄Н₆О₆).

3.2. 0,1 М разтвор на натриев хидроксид (NаОН).

3.3. 1% разтвор на фенолфталейн в 96 об. % алкохол.

3.4. Солна киселина (r_20°C = 1,18 до 1,19 g/ml) (разредена) (v/v).

3.5. 0,005 M разтвор на йод (I₂).

3.6. Кристален калиев йодид (KI).

3.7. 5 g/l разтвор на нишесте.

Смесват се 5 g от нишестето с около 500 ml вода. Загрява се до кипене, като непрекъснато се разбърква и се вари 10 min. Добавя се 200 g натриев хлорид. Когато се охлади, се долива до един литър.

3.8. Наситен разтвор на натриев борат (Na₂B₄O₇10H₂O), или около 55 g/l при 20°С.

4. Апаратура

4.1. Уред за парова дестилация, състоящ се от:

• паров генератор; парата трябва да е освободена от въглеродния диоксид;

• колба с тръбичка за пара;

• дестилационна колона;

• хладник.

Това оборудване трябва да се подложи на следните три теста:

а) поставят се 20 ml кипяща вода в колбата; събират се 250 ml от дестилата и към него се добавят 0,1 ml от 0,1 М разтвор на натриев хидроксид (т. 3.2) и две капки разтвор на фенолфталейн (т. 3.3); розовото оцветяване следва да остане стабилно минимум 10 s (т.е. парата да е свободна от въглероден диоксид);

б) поставят се 20 ml от 0,1 М разтвор на оцетна киселина в колбата; събират се 250 ml от дестилата; титрува се с 0,1 М разтвор на натриев хидроксид (т. 3.2). Използваният обем трябва да е минимум 19,9 ml (т.е. поне 99,5% от оцетната киселина да е влязла с парата);

в) поставя се 20 ml от 1 М разтвор на млечната киселина в колбата; събират се 250 ml от дестилата и киселината се титрува с 0,1 М разтвор на натриев хидроксид (т. 3.2). Обемът на добавения разтвор на натриев хидроксид трябва да бъде по-малък или равен на 1,0 ml (т.е. не повече от 0,5% от дестилираната млечна киселина).

Всяко оборудване или процедура, която успешно премине през тези тестове, отговаря на изискванията на официалните международни апаратури или процедури.

4.2. Водна помпа.

4.3. Вакуумколба.

5. Начин на работа

5.1. Подготовка на пробата - отстраняване на въглеродния диоксид.

Във вакуумколбата се поставят 50 ml от виното; вакуумира се с водната помпа за 1 - 2 min, като непрекъснато се разклаща.

5.2. Дестилация с водна пара: в колба се поставят 20 ml вино, освободено от въглероден диоксид, както е описано в т. 5.1. Добавят се около 0,5 g винена киселина (т. 3.1). Събират се минимум 250 ml от дестилата.

5.3. Титруване: титрува се с 0,1 М разтвор на натриев хидроксид (т. 3.2), като се използват две капки фенолфталейн (т. 3.3) за индикатор - n, ml (използваният обем натриев хидроксид).

Добавят се четири капки от разредената 1:4 солна киселина (т. 3.4), 2 ml от разтвора на нишесте (т. 3.7) и няколко кристалчета от калиевия йодид (т. 3.6). Свободният серен диоксид се титрува с 0,005 М разтвор на йод (т. 3.5) - n', ml (използваният обем йод).

Добавя се наситен разтвор на натриев борат (3.8) до появяването на розово оцветяване. Свързаният серен диоксид се титрува с 0,005 М разтвор на йод (т. 3.5) - n", ml (използваният обем йод).

6. Изразяване на резултатите

6.1. Начин на изчисляване

Летливата киселинност, изразена в милиеквивалента на литър, закръглена до първия десетичен знак, се изчислява по формулата:

А = 5(n - 0,1n' - 0,05n").

Летливата киселинност, изразена в грамове оцетна киселина на литър и закръглена до втория десетичен знак, се определя по формулата:

0,300(n - 0,1n' - 0,05n").

6.2.Повторяемост (r)

r = 0,7 me/l;

r = 0,04 g оцетна киселина/l .

6.3. Възпроизводимост (R)

R = 1,3 me/l;

R = 0,08 g оцетна киселина/l.

6.4. Вино с добавена сорбинова киселина

Когато 96% от сорбиновата киселина е дестилирана и е получен дестилат с обем 250 ml, нейната киселинност се изважда от летливата киселинност, като се има предвид, че 100 mg сорбинова киселина отговарят на киселинност 0,89 me или 0,053 g оцетна киселина, и като се знае съдържанието на сорбиновата киселина, в mg/l.

7. Определяне на салициловата киселина, постъпила в дестилата от летливата киселинност

7.1. Принцип

След определянето на летливата киселинност и направената корекция за серния диоксид присъствието на салициловата киселина се отчита след подкиселяване чрез появата на виолетово оцветяване, с добавяне на фери сол.

Определянето на увлечената в дестилата салицилова киселина заедно с летливата киселинност се осъществява във втори дестилат със същия обем както при определяне на летливата киселинност. В този дестилат салициловата киселина се определя колориметрично. Тя се изважда от летливата киселинност.

7.2. Реактиви

7.2.1. Солна киселина (HCl) (r_20°C = 1,18 до 1,19 g/l)

7.2.2. 0,1 М разтвор на натриев тиосулфат (Na₂S₂O₃.5H₂O).

7.2.3. 10%-ен разтвор (m/v) на железен (III) амониев сулфат [Fe₂(SO₄)₃.(NH₄)₂SO₄.24H₂O].

7.2.4. 0,01 М разтвор на натриев салицилат. Разтворът съдържа 1,60 g/l натриев салицилат (NaC₇H₅О₃).

7.3. Начин на работа

7.3.1. Определяне на салицилова киселина, увлечена в дестилата от летливите киселини.

Веднага след определянето на летливата киселинност и направената корекция за свободен и свързан серен диоксид в конична колба се поставят 0,5 ml солна киселина (т. 7.2.1), 3 ml от разтвора на железен (III) амониев тиосулфат (т. 7.2.2) и 1 ml от разтвора на железен (III) амониев сулфат (т. 7.2.3). При наличие на салицилова киселина се появява виолетово оцветяване.

7.3.2. Определяне на салицилова киселина

В мерителни колби се отчита обемът на дестилата до марката. Колбата се изпразва и се измива. Поставя се нова тест-проба от 20 ml вино на парна дестилация и се събира дестилатът в коничната колба до марката. Добавят се 0,3 ml чиста солна киселина (т. 7.2.1) и един милилитър от разтвора на железен (III) амониев сулфат (т. 7.2.3). Съдържанието на колбата се оцветява във виолетово.

В конична колба, идентична с тази, която е маркирана, се поставя дестилирана вода до същото ниво както дестилата. Добавят се 0,3 ml чиста солна киселина (т. 7.2.1) и един милилитър от разтвора на железен (III) амониев сулфат (т. 7.2.3). Титрува се от бюретата с 0,01 М разтвор на натриев салицилат (т. 7.2.4) до появата на виолетово оцветяване със същата интензивност както в коничната колба с винения дестилат - n''', ml (обемът на използвания натриев салицилат от бюретата).

7.4. Корекция на летливата киселинност

Изважда се обемът 0,1n''', ml от обема n, ml 0,1 М разтвор на натриев хидроксид, използван за титруване на киселинността на дестилата, по време на определянето на летливата киселинност.

15. Определяне на постоянна киселинност

1. Принцип на метода

Постоянната киселинност е разликата между общата киселинност и летливата киселинност.

2. Изразяване на резултатите

Постоянната киселинност се изчислява във:

- милиеквиваленти на литър;

- грамове винена киселина на литър.

16. Определяне на винена киселина

1. Принцип на метода

1.1. Сравнителен метод

Винената киселина се утаява под формата на калциев рацемат и се определя тегловно. Определянето може да се извърши и обемно. Условията за утаяване (рН, общ използван обем, концентрация на утаяващите йони) са такива, че утаяването на калциевия рацемат се завършва напълно, докато калциевият D (-) тартарат остава в разтвора.

Когато виното съдържа метавинена киселина, която прави утаяването на калциевия рацемат непълно, тя предварително се хидролизира.

1.2. Обикновен метод

Винената киселина, разделена посредством йонообменна колона, се определя колориметрично в елюата чрез измерване на червения цвят, който се образува вследствие взаимодействието с ванадиевата киселина. Елюатът съдържа също така и млечна и ябълчна киселина, които не влияят върху резултата.

2. Сравнителен метод

2.1. Тегловен метод

2.1.1. Реактиви

2.1.1.1. Разтвор на калциев ацетат, съдържащ 10 g/l Ca:

Калциев карбонат (СаСО₃) - 25 g;

Ледена оцетна киселина (СН₃СООН) (r_20°C=1,05g/ml) - 40 ml;

Вода - до един литър.

2.1.1.2. Калциев тартарат, кристален - (СаС₄О₆Н₄.4Н₂О):

В бехерова чаша от 400 ml се поставят 20 ml от разтвора на L (+) винена киселина с концентрация 5 g/l. Добавят се 20 ml от разтвора на D (-) амониевия тартарат с концентрация 6,126 g/l и 6 ml от разтвора на калциевия ацетат, което е 10 g калций на литър (т. 2.1.1.1).

Оставя се да престои 2 h, докато се утаи. Утайката се събира върху стъклен филтър с порьозност № 4 и се изплаква три пъти с около 30 ml дестилирана вода. Изсушава се до постоянно тегло в сушилня при 70°С. Като се използват количествата посочени реактиви, се получават около 340 mg кристален калциев тартарат. Съхраняват се в затворена бутилка.

2.1.1.3. Разтвор за утаяване (рН 4,75):

• D (-) винена киселина - 122 mg ;

• 25% (v/v) разтвор на амониев хидроксид (r_20°C = 0,97 g/ml) - 0,3 ml;

• разтвор на калциев ацетат(10 g/l калций) - 8,8 ml;

• вода - до 1000 ml.

Разтварят се D (-) винена киселина и се добавя амониевият хидроксид; обемът се довежда до около 900 ml; добавя се 8,8 ml от разтвора на калциевия ацетат (т. 2.1.1.1), след смесване рН се довежда до 4,75 с оцетна киселина и се долива до един литър.

Тъй като калциевият тартарат е слабо разтворим в този разтвор, се добавя 5 mg/литър калциев тартарат, разбърква се 12 h и се филтрира.

2.1.2. Начин на работа

2.1.2.1. Вино без добавена метавинена киселина

В колба с бъркалка с обем 600 ml се поставят 500 ml от разтвора за утаяване и 10 ml от виното. Смесват се и се започва утаяване чрез триене със стъклена бъркалка по стените на съда. Оставя се да се утаи 12 h (една нощ).

Течността се филтрира и се извършва утаяване върху претеглен стъклен филтър с порьозност № 4, закрепен върху чиста вакуумколба. Съдът, в който е извършено утаяването на филтрата, се изплаква с цел прехвърляне на цялата утайка. Изсушава се до постоянно тегло в сушилня при 70°С. Претегля се полученият кристален калциев тартарат (СаС₄О₆Н₄.4Н₂О) - р.

2.1.2.2. Вино, към което е добавена метавинена киселина

Когато се анализира вино, към което е била добавена метавинена киселина или се подозира добавянето на такава, се процедира, като първоначално се хидролизира тази киселина, както следва: в конична колба с обем 50 ml се поставят 10 ml от виното и 0,4 ml ледена оцетна киселина (СН₃СООН, r_20°C = 1,05 g/ml). Към колбата се свързва обратен хладник и се нагрява до кипене 30 min. Охлажда се и след това разтворът се прехвърля от коничната колба в цилиндрична колба с бъркалка с обем 600 ml. Колбата се изплаква двукратно, като се използват 5 ml вода всеки път и след това се продължава, както е описано в т. 2.1.2.1. Метавинената киселина се изчислява и се включва като винена киселина в крайния резултат.

2.1.3. Изразяване на резултатите

Една молекула калциев тартарат съответства на половин молекула L (+) винена киселина във виното.

Количеството на винената киселина на литър вино, изразено в милиеквиваленти, е равно на 384,5р. Закръглява се до първия десетичен знак.

Количеството винена киселина на литър вино, изразено в грамове винена киселина, е равно на 28,84•р. Закръглява се до първия десетичен знак.

Количеството винена киселина на литър вино, изразено в грамове калиев тартарат, е равно на 36,15•р. Закръглява се до първия десетичен знак.

2.2. Сравнителен обемен анализ

2.2.1. Реактиви:

2.2.1.1. Солна киселина (HCl) (1:5 v/v) (r_20°C = 1,18 до 1,19 g/ml).

2.2.1.2. Разтвор на EDTA, 0,05 М:

• EDTA (етилендиамин тетраоцетна киселина, динатриева сол C₁₀H₁₄N₂O₈Na₂.2H₂O) - 18,61 g;

• дестилирана вода - до 1000 ml.

2.2.1.3. Разтвор на натриев хидроксид, 40% (m/v):

• натриев хидроксид (NaOH) - 40 g;

• дестилирана вода - до 100 ml.

2.2.1.4. Комплексометричен индикатор: 1% (m/m)

2-хидрокси-1-(2-хидрокси-4-сулфо-1-нафтилазо)-3-нафтоинова киселина (C₂₁H₁₄N₂O₇S.3H₂O) - един грам;

безводен натриев сулфат (Na₂SO₄) - 100 g.

2.2.2. Начин на работа

След претегляне се поставя стъкленият филтър G 4, съдържащ утайката от калциев тартарат на вакуум-колбата и утайката се разтваря в 10 ml разредена солна киселина (т. 2.2.1.1). Филтърът се промива с 50 ml дестилирана вода.

Добавят се 5 ml 40% разтвор на натриев хидроксид (т. 2.2.1.3) и около 30 mg от индикатора (т. 2.2.1.4). Титрува се с 0,05 М EDTA (т. 2.2.1.2) - n, ml.

2.2.3. Изразяване на резултатите

Количеството винена киселина на литър вино, изразено в милиеквиваленти, е равно на 5n. Закръглява се до първия десетичен знак.

Количеството винена киселина на литър вино, изразен в грамове винена киселина, е равно на 0,375n. Закръглява се до първия десетичен знак.

Количеството винена киселина на литър вино, изразено в грамове калиев тартарат, е равно на 0,470n. Закръглява се до първия десетичен знак.

3. Обикновен метод

3.1. Реактиви

3.1.1. За предварителна обработка на виното

3.1.1.1. Разредена 30%^-на (v/v) оцетна киселина (CH₃COOH; r_20°C = 1,05 g/ml).

3.1.1.2. Силно основна йонообменна смола (т.е. анионообменна смола от Merck 20 - 50 mesh, основност III) в ацетатна форма. Приготвя се суспензия на йонообменната смола (около 100 g) в 200 ml 30% оцетна киселина (т. 3.1.1.1). Престоява за 24 h преди употреба. Йонообменната смола се съхранява в 30% оцетна киселина за по-късни анализи.

3.1.1.3.Разредена 0,5%^-на (v/v) оцетна киселина, (CH₃COOH; r_20°C = 1,05 g/ml).

3.1.1.4. 0,5 М разтвор на натриев сулфат 7,1 g на 100 ml:

Разтварят се 71 g безводен натриев сулфат (Na₂SO₄) в дестилирана вода и се долива до 1000 ml.

3.1.2. За определяне на винена киселина

3.1.2.1. 27%^-ен (m/v) разтвор на натриев ацетат (NaCH₃COО):

Разтварят се 270 g анхидрид на натриевия ацетат (NaCH₃COО) в дестилирана вода и се долива до 1000 ml.

3.1.2.2. Ванадиев реактив:

Разтварят се 10 g амониев мета-ванадат (NH₄VO₃) в 150 ml 1 М разтвор на натриев хидроксид (т. 3.1.2.10). Разтворът се прехвърля в колба с обем 500 ml и се добавят 200 ml 27%^-ен разтвор на натриев ацетат (т. 3.1.2.1). Долива се до 500 ml с дестилирана вода.

3.1.2.3. 1 М разтвор на H₂SO₄

3.1.2.4. 0,5 М разтвор на H₂SO₄

3.1.2.5. 0,05 М разтвор на H₂SO₄

3.1.2.6. 0,05 М разтвор на перйодна киселина:

В колба с обем 1000 ml се поставят 10,696 g от натриевия перйодат (NaIO₄) и 50 ml от 0,05 М сярна киселина (т. 3.1.2.4) и се долива до 1000 ml с дестилирана вода.

3.1.2.7. 10% (m/v) разтвор на глицерол:

В колба с обем 100 ml се поставят 10 g глицерол (C₃H₈O₃) и се долива до 100 ml с дестилирана вода.

3.1.2.8. Разтвор на натриев сулфат 7,1 g на 100 ml (вж. т. 3.1.1.4).

3.1.2.9. Разтвор на винена киселина, един грам на литър:

В колба с обем 500 ml се поставят 0,5 g винена киселина и 6,66 ml от 1 М разтвор на натриевия хидроксид (т. 3.1.2.10) и се долива до 500 ml със 7,1% разтвор на натриев сулфат (т. 3.1.1.4).

3.1.2.10. 1 М разтвор на натриев хидроксид (NaOH).

3.2. Апаратура

3.2.1. Стъклена колона с вътрешен диаметър 10 - 11 mm и дължина около 300 mm, снабдена със суха тапа.

3.2.2. Спектрофотометър, позволяващ измерване на абсорбцията при дължина на вълната 490 nm, с клетки с оптичен път 10 mm.

3.3. Начин на работа

3.3.1. Подготовка на йонообменната колона

На колоната (т. 3.2.1) се поставя тампон от стъклен памук. Тампонът се намокря с дестилирана вода. В колоната се изсипват 10 ml от суспензията на йонообменната смола в ацетатна форма (т. 3.1.1.2). Оставя се да се утаи. Поставя се тампон от стъклен памук върху горната повърхност на йонообменната смола, за да не се нарушава повърхността ѝ по време на промиването. Йонообменната смола се използва само еднократно.

3.3.2. Отделяне на органичните киселини

Тампонът се маха и се дава възможност на разтвора на оцетната киселина да премине през колоната до около 2 до 3 mm от горния край на тампона от стъклен памук.

Добавят се 10 ml 0,5% разтвор от оцетна киселина (т. 3.1.1.3) и се оставя течността да се източи до същото ниво, както при предишното действие. Измиването се повтаря още 4 пъти.

След последното измиване кранът се затваря и се прехвърлят 10 ml от виното или мъстта върху йонообменната смола. Течността се оставя да изтича на капки, средно по една капка за секунда. Спира се изтичането точно над йонообменната смола. Добавят се още 10 ml от 0,5%^-ния разтвор от оцетна киселина (т. 3.1.1.3) към колоната и се оставя да се оттича със същата скорост както при предишния опит, а след това се промива 7 пъти по същия начин, като всеки път се използват по 10 ml вода. По време на последното промиване кранът се затваря веднага щом нивото на течността е точно над памучния тампон.

Абсорбираните в йонообменната смола киселини се елюират със 7,1%^-ен разтвор на натриев сулфат (т. 3.1.1.4). Елюатът се събира в мерителна колба от 100 ml до марката за калибриране.

3.3.3. Определяне на винена киселина

3.3.3.1. Вина без добавена метавинена киселина.

Поставят се по 20 ml отт елюата в две конични колби, условно обозначени с "а" и "b".

Колба "a" за определянето, а колба "b", в която винената киселина е била разложена от перйодната киселина - за контрола.

В колба "a" се поставя:

- 2 ml 1 М разтвор на H₂SO₄ (т. 3.1.2.3),

- 5 ml 0,05 М разтвор на сярна киселина H₂SO₄ (т. 3.1.2.5),

- Един ml 10%^-ен глицерол (т. 3.1.2.7).

В колба "b" се поставя:

- 2 ml 1 M H₂SO₄ (т. 3.1.2.3).

- 5 ml 0,05 М разтвор на перйодна киселина (т. 3.1.2.6).

Изчаква се 15 min и се добавя: един милилитър 10%^-ен глицерол (т. 3.1.2.7), който да разложи излишната перйодна киселина. Изчаква се 2 минути. След това с разбъркване се добавят с пипета по 5 ml от ванадиевия реагент (т. 3.1.2.2) първо в колба "b" и веднага след това в колба "а". Веднага хронометърът се стартира и съдържанието на колби "а" и "b" се излива в клетките на спектрофотометъра. След 90 s се отчита абсорбцията при 490 nm дължина на вълната на течността в колба "а" (за определяне) спрямо течността в колба "b" (контрола).

Разтвори, съдържащи високи нива на винена киселина, които дават абсорбции над горната част на стандарта, се разреждат със 7,1%^-ен разтвор на натриев сулфат и след това се измерват по описания начин.

3.3.3.2. Вина, в които е била добавена метавинена киселина

При анализирането на вина, към които е била добавена метавинена киселина или се предполага, че е била добавена, тази киселина най-напред се хидролизира съгласно описания референтен метод. След охлаждане съдържанието на коничните колби се излива върху горната част на йонообменната колона, последвано от двукратно измиване с 5 ml вода. Продължава се по описания начин. Метавинената киселина се включва като винена киселина в крайния резултат.

3.3.4. Изготвяне на калибрационната крива.

В градуирани 100 ml колби с пипета се поставят по 10, 20, 30, 40 и 50 ml от разтвор на винена киселина с концентрация един грам на литър (т. 3.1.2.9) и се допълват до 100 ml със 7,1%^-ен разтвор на натриев сулфат (т. 3.1.1.4). Концентрациите на тези разтвори отговарят на винени елюати, съдържащи 1, 2, 3, 4 и 5 g винена киселина/l.

В две конични колби "а" и "b" се поставят по 20 ml от тези разтвори и се продължава по същия начин както за винения елюат.

Начертава се графиката на абсорбциите на тези разтвори като функция от концентрацията на съдържащата се винена киселина в тях, леко изкривяваща се надолу към началната точка. Ако е необходимо, се начертава по-внимателно тази част от кривата, като се използват разтвори с точно известни концентрации, чието съдържание е под един грам на литър.

3.3.5. Изразяване на резултатите

По измерената абсорбция на елюата от калибрационната крива се отчита концентрацията на винената киселина във виното, в грамове на литър. Резултатът се закръглява до първия десетичен знак.

17. Определяне на лимонена киселина

1. Принцип на метода

Лимонената киселина се трансформира в оксалацетат и ацетат в реакция, катализирана от цитратлиаза (CL):

	CL
Цитрат	<======>	оксалацетат	+	ацетат

В присъствието на малатдехидрогеназа (MDH) и лактатдехидрогеназа (LDH) оксалацетатът и неговото декарбоксилирано производно (пируват) се редуцират до L-малат и L-лактат чрез редуциран никотинамид аденин динуклеотид (NADH):

					MDH
Оксалацетат	+	NADH	+	H+	<======>	L-малат	+	NAD+

					LDH
Пируват	+	NADH	+	H+	<======>	L-лактат	+	NAD+

Количеството на NADH, окислено до NAD⁺ в тези реакции е пропорционално на количеството на присъстващия цитрат. Окислението на NADH се измерва чрез намаляването на абсорбцията при 340 nm дължина на вълната.

2. Реактиви

2.1. Буферен разтвор с рH 7,8

(0,51 М разтвор на глицилглицин; рH = 7,8; Zn²⁺ : 0,6 x 10^-3М):

Разтварят се 7,13 g глицилглицин в около 70 ml двойно дестилирана вода. Довежда се рH до 7,8 с приблизително 13 ml 5 М разтвор на натриев хидроксид. Добавят се 10 ml разтвор от цинков хлорид (ZnCl₂) (80 mg в 100 ml вода) и се допълва с двойно дестилирана вода. Разтворът остава траен 4 седмици при 4°С

2.2. Разтвор на редуциран никотинамид аденин динуклеотид (NADH) (приблизително 6 x 10^-3 М): Разтварят се 30 mg NADH и 60 mg NaHCO₃ в 6 ml двойно дестилирана вода.

2.3. Разтвор на малатдехидрогеназа /лактатдехидрогеназа (MDH/LDH) (0,5 mg MDH/ml; 2,5 mg LDH/ml): смесват се 0,1 ml MDH (5 mg. MDH/ml), 0,4 ml разтвор на амониев сулфат (3,2 М) и 0,5 ml LDH (5 mg/ml). Този разтвор остава траен най-малко една седмица при 4°С.

2.4. Цитратлиаза CL (5 mg протеин на ml). Разтварят се 168 mg лиофилизирана цитратлиаза в един милилитър леденостудена вода. Този разтвор остава траен най-малко една седмица при 4°С и поне 4 седмици, ако е замръзнал.

Препоръчва се преди използване да се провери ензимната активност.

2.5. Поливинилполипиролидон (PVPP)

Забележка. Всички описани реагенти са в наличност в търговската мрежа.

3. Апаратура

3.1. Спектрофотометър, позволяващ измерване при 340 nm, което е дължина на вълната, за максималната абсорбция от NADH.

При липса на такъв спектрофотометър може да се използва и спектрофотометър с непрекъснат спектрален източник, позволяващ да се правят измервания при 334 или 365 nm дължина на вълната.

Необходимо е скалите за дължина на вълната и спектрална абсорбция да бъдат проверени, тъй като има измервания на абсолютната абсорбция (не се използват калибрационни криви, а стандартизацията се извършва чрез коефициента на екстинкция на NADH).

3.2. Стъклени кювети с дължина на оптичния път 1 cm или кювети за еднократна употреба.

3.3. Микропипети за отмерване от 0,02 до 2 ml.

4. Подготовка на пробата

Съдържанието на цитрат обикновено се определя директно във виното без предварително премахване на оцветяването и без разреждане, при условие че съдържанието на лимонената киселина е по-малко от 400 mg/l. Ако е повече, виното се разрежда, докато концентрацията на цитрата достигне стойности между 20 и 400 mg/l (между 5 и 80 µg цитрат в тест-пробата).

Препоръчва се предварително третиране на червени вина с PVPP , които са богати на фенолни съединения. Третирането се извършва по следния начин:

Приготвя се суспензия от около 0,2 g PVPP във вода и се оставя да престои 15 min. След това се филтрира през нагънат филтър. В мерителна колба с обем 50 ml се поставят 10 ml от виното и с помощта на шпатула се добавя влажният PVPP, отделен от филтъра. Сместа се разклаща за 2 - 3 min. Филтрува се.

5. Начин на работа

Спектрофотометърът се настройва на дължина на вълната 340 nm. Абсорбцията се измерва с кювети 1 cm. Оптическата нула на апарата се определя спрямо въздух. В кюветите се поставят:

	Сравнителна	Аналитична
	проба	проба
Разтвор 2.1	1,00 ml	1,00 ml
Разтвор 2.2	0,10 ml	0,10 ml
Проба за измерване	-	0,20 ml
Двойно дестилирана вода	2,00 ml	1,80 ml
Разтвор 2.3	0,02 ml	0,02 ml
Смесват се и след около 5 min се отчита абсорбцията на разтворите в референтната клетка и клетката с пробите (А₁).
Добавят се:
Разтвор 2.4	0,02 ml	0,02 ml

Смесват се. Изчаква се около 5 min, когато реакцията е завършила, и се отчитат абсорбциите на разтворите в контролата и пробата (А₂).

Пресмятат се разликите в абсорбциите (А₁ - А₂) за контролата и пробата.

Пресмятат се разликите в абсорбциите на контролите и пробите:

DA = DA_D - DA_Т

Забележка. Времето, необходимо за приключване на ензимната активност, може да варира между поредица експерименти. Описаната стойност е само със справочен характер и се препоръчва тя да се определя за всяка поредица.

6. Изразяване на резултатите

Концентрацията на лимонената киселина се дава в милиграма на литър. Закръглява се до най-близкото цяло число.

6.1. Метод на изчисление

Общата формула за изчисляване на концентрацията е:

С = DA (V • PM / e • d • v), където:

V е обемът на тестовия разтвор в милилитри (тук 3,14 ml);

v - обемът на пробата в милилитри (тук 0,2 ml);

PМ - молекулната маса на веществото, която трябва да бъде определена (тук М = 192,1 за анхидрида на лимонената киселина, използвана в примера);

d - оптичният път в сантиметри (тук 1 cm);

e - абсорбционният коефициент на NADH при 340 nm;

e = 6,3 mmol^-1•l•cm^-1;

така, че

С = 479DA.

Ако пробата е била разредена по време на нейната подготовка, резултатът се умножава по фактора на разреждане.

Забележка.

При 334 nm - C= 488DA(e= 6,2 mmol^-1•l•cm^-1);

При 365 nm - C = 887DA (e= 3,4 mmol^-1•l•cm^-1).

6.2. Повторяемост (r)

За концентрация на лимонена киселина по-малка от 400 mg/l

r = 14 mg/l.

За концентрация на лимонена киселина по-голяма от 400 mg/l

r = 28 mg/l.

6.3. Възпроизводимост (R)

За концентрация на лимонена киселина по-малка от 400 mg/l

R = 39 mg/l.

За концентрация на лимонена киселина по-голяма от 400 mg/l

R = 65 mg/l.

18. Определяне на млечна киселина

1. Принцип на метода

1.1. Сравнителен метод

В присъствието на никотинамид аденин динуклеотид (NAD) млечната киселина (L-лактат и D-лактат) се окислява в пируват по реакция, катализирана от L-лактат дехидрогеназа (L-LDH) и D-лактат дехидрогеназа (D-LDH).

Равновесието на реакцията е по посока на лактата. Отстраняването на пирувата от реакционната среда измества равновесието на реакцията по посока на образуване на пируват. В присъствие на L-глутамат пируватът се трансформира в L-аланин в резултат на реакция, катализирана от глутамат-пируват трансаминаза (GPT):

			L-LDH
L-лактат	+	NAD+	<=======>	пируват	+	NADH	+	H+	(1)
			D-LDH
D-лактат	+	NAD+	<=======>	пируват	+	NADH	+	H+	(2)
			D-LDH
пируват	+	L-глутамат	<=======>	L-аланин	+	алфа-кетоглутарат			(3)

Образуваното количество NADH се измерва чрез увеличаване на абсорбцията при дължина на вълната 340 nm и е пропорционално на първоначално представеното количество лактат.

Забележки: L-млечната киселина може да бъде определена независимо посредством реакции (1) и (3).

D-млечната киселина може да бъде определена подобно чрез реакции (2) и (3).

1.2. Обикновен метод

Млечната киселина, разделена чрез преминаване през колона с йонообменна смола, се окислява до етанал и се определя колориметрично след реакция с нитропрусид и пиперидин.

2. Сравнителен метод

2.1. Реактиви

2.1.1. Буферен разтвор, рН 10 (глицилглицин, 0,6 mol/l; L-глутамат 0,1 mol/l):

Разтварят се 4,75 g глицилглицин и 0,88 g L-глутаминова киселина в приблизително 50 ml двойно дестилирана вода, рН се довежда до 10 с няколко милилитра 10 М разтвор на натриев хидроксид и се долива до 60 ml с двойно дестилирана вода. Този разтвор остава траен най-малко 12 седмици при +4°С.

2.1.2. Разтвор на никотинамид аденин динуклеотид (NAD) около 40 x 10^-3 М: разтварят се 900 mg NAD в 30 ml двойно дестилирана вода. Този разтвор остава стабилен най-малко 4 седмици при +4°С.

2.1.3. Глутамат-пируват трансаминаза (GPT) - суспензия, 20 mg/ml. Суспензията остава стабилна най-малко една година при +4°С.

2.1.4. L-лактат дехидрогеназа (L-LDH) - суспензия, 5 mg/ml. Тази суспензия остава трайна най-малко една година при 4°С.

2.1.5. D-лактат дехидрогеназа (D-LDH) - суспензия, 5 mg/ml. Тази суспензия остава трайна най-малко една година при 4°С.

Препоръчително е преди определянето да бъде проверена ензимната активност.

Забележка. Всички реактиви могат да се намерят в търговската мрежа.

2.2. Апаратура

2.2.1. Спектрофотометър, позволяващ измерване при 340 nm дължина на вълната, при която абсорбцията от NADH е максимална. Ако такъв не е налице, използва се прекъснат спектрален източник, позволяващ измерване при 334 или 365 nm.

Тъй като методът включва измерване на абсолютната абсорбция (т.е. не се използват калибровъчни криви, а определянето става чрез отчитане на коефициента на екстинция на NADH), то скалите, отчитащи дължината на вълната и абсорбцията, трябва да бъдат проверени.

2.2.2. Стъклени кювети с оптичен път 1 cm или кювети за еднократна употреба.

2.2.3. Микропипети за отмерване на обеми от 0,02 до 2 ml.

2.3. Подготовка на пробата

Предварителна бележка: нито една част от стъкленото оборудване, която влиза в контакт с реакционната смес, не трябва да бъде докосвана с пръсти, тъй като с това може да въведе L-млечна киселина и това да изкриви резултатите.

Обикновено лактатът се определя директно във виното, без предварително отстраняване на оцветяването и без разреждане, така че концентрацията да бъде по-малка от 100 mg/l. Въпреки това, ако концентрацията на млечната киселина е в порядъка между:

100 mg/l и 1 g/l - се разрежда с двойно дестилирана вода 1/10;

1 g/l и 2,5 g/l - се разрежда с двойно дестилирана вода 1/25;

2,5 g/l и 5 g/l се разрежда с двойно дестилирана вода 1/50.

2.4. Начин на работа

2.4.1. Определяне на общо количество млечна киселина

Буферният разтвор трябва да бъде при температура между 20 - 25°С преди да се пристъпи към измерване.

Спектрофотометърът се настройва на дължина на вълната 340 nm. Измерванията се извършват с кювети с дължина на оптичния път 1 cm. Нулата на апарата се определя по отношение на въздух или вода. В кюветите се поставят:

	Сравнителна	Аналитична
	проба	проба
Разтвор 2.1.1	1,00 ml	1,00 ml
Разтвор 2.1.2	0,20 ml	0,20 ml
Двойно дестилирана вода	1,00 ml	0,80 ml
Суспензия 2.1.3	0,02 ml	0,02 ml
Проба за анализ	-	0,20 ml
С помощта на стъклена бъркалка или бъркалка от синтетичен материал с равен край се смесват; след около 5 min се измерват абсорбциите им (А₁) и се добавят:
Разтвор 2.1.4	0,02 ml	0,02 ml
Разтвор 2.1.5	0,05 ml	0,05 ml
Хомогенизира се и се изчаква, докато реакцията приключи (около 30 min).Отново се измерват абсорбциите на разтворите в сравнителната и аналитичната проба (А₂)

Изчисляват се разликите в абсорбциите (А₂ - А₁) в сравнителните кювети и тези на пробите. Определя се разликата от абсорбциите между разликите на абсорбциите на контролите и пробите DA = DA_D - DA_T.

2.4.2. Определяне на L-млечна и D-млечна киселина

Определянето на тези киселини може да бъде извършено независимо чрез прилагане на процедурата за общо количество млечна киселина до етапа на определяне на А1 и след това да се продължи, както следва:

Добавят се 0,02 ml от разтвор по т. 2.1.4, хомогенизира се и се изчаква, докато реакцията приключи (около 20 min); измерва се абсорбцията на разтворите в кюветите на контролата и пробата (А₂); добавя се 0,05 ml от разтвор 2.1.5, хомогенизира се и се изчаква, докато реакцията приключи (около 30 min); измерва се абсорбцията на разтворите в кюветите на контролата и пробата (А₃). Изчисляват се разликите в абсорбциите между (А₂ - А₁) за L-млечната киселина и (А₃ - А₂) за D-млечната киселина в контролната кювета и тези на пробите. Определя се разликата от абсорбциите между разликите от абсорбциите на контролите и разликите от абсорбциите между пробите.

DA = DA_D - DA_T

Забележка. Времето, необходимо за преустановяване на ензимната активност, може да варира за различните проби. Получената величина е дадена само като упътване и се препоръчва да бъде определяна за всяка група от проби. Когато се определя само L-млечна киселина, времето за инкубация може да бъде редуцирано до 10 min.

2.5. Изразяване на резултатите

Концентрацията на млечната киселина се дава в грамове на литър. Закръглява се до първия десетичен знак.

2.5.1. Метод на изчисление

Основната формула за изчисляване на концентрацията в g/l е:

С = DA (V • PM / 1000e • d • v), където:

V e обемът на анализирания разтвор в милилитри (V = 2,24 ml за L-млечната киселина, V = 2,29 ml за D-млечната киселина и за общото количество млечна киселина);

v - обемът на пробата в милилитри (в случая 0,2 ml);

РМ - молекулната маса на веществото, което се анализира (в случая за DL-млечната киселина М = 90,08);

d - оптичният път в сантиметри (в случая 1 cm);

e - абсорбционният коефициент на NADH при 340 nm;

e = 6,3 (mmol^-1.l.cm^-1)

2.5.1.1. Общо количество млечна киселина и D-млечна киселина

С = 0,164DА

Ако пробата е разредена по време на нейната подготовка, резултатът се умножава по фактора на разреждането.

Забележка.

Измерване при 334 nm: С = 0,167DА (e = 6,2 mmol^-1.l.cm^-1);

Измерване при 365 nm: С = 0,303DА (e = 3,4 mmol^-1.l.cm^-1).

2.5.1.2. L-млечна киселина

С = 0,160DА

Ако пробата е разредена по време на нейната подготовка, резултатът се умножава по фактора на разреждането.

Забележка.

Измерване при 334 nm: С = 0,163DА (e = 6,2 mmol^-1.l.cm^-1);

Измерване при 365 nm: С = 0,297DА (e = 3,4 mmol^-1.l.cm^-1).

2.5.2. Повторяемост (r)

r = 0,02 + 0,07x_i,g/l, където:

x_i е концентрацията на млечната киселина в пробата, g/l.

2.5.3. Възпроизводимост (R)

R = 0,05 + 0,125x_i, g/l, където:

x_i - е концентрацията на млечната киселина в пробата, g/l.

3. Обикновен метод

3.1.1. За предварителна обработка на виното

Вж. метода "16. Определяне на винена киселина", обикновен метод, т. 3.1.1.

3.1.2. За определяне на млечна киселина

3.1.2.1. 0,1 М разтвор на цериев (IV) сулфат в 0,35 М сярна киселина:

Охлаждайки се разтварят 40,431 g от цериевия (IV) сулфат [Ce(SO₄)₂.4H₂O] в 350 ml от внимателно премерен 1 М разтвор на сярна киселина (т. 3.1.2.4). Долива се до 1000 ml с дестилирана вода.

3.1.2.2. 2,5 М разтвор на натриев хидроксид (NaOH)

3.1.2.3. Разтвор на натриев ацетат - 270 g на литър [приготвен от изсушен натриев ацетат (NaCH₃COO)]

3.1.2.4. 1 М сярна киселина (H₂SO₄)

3.1.2.5. 2% (m/v) разтвор на натриев нитро фероцианид [Na₂(Fe(CN)₅NO).2H₂O]

Съхранява се на тъмно в добре затворена бутилка. Разтворът не се задържа по-дълго от 8 дни.

3.1.2.6. 10% (v/v) разтвор на пиперидин (C₅H₁₁N)

3.1.2.7. 1 М разтвор на млечна киселина: 100 ml млечна киселина (C₃H₆O₃) се разреждат в 400 ml вода. Този разтвор се поставя в капсула и се нагрява над кипяща водна баня 4 h, като обемът периодично се допълва с дестилирана вода. След охлаждане се допълва до един литър. Млечната киселина се титрува в 10 ml от този разтвор с едномоларен разтвор на натриев хидроксид (т. 3.1.2.8). Разтворът се довежда до едномоларна млечна киселина (90 g).

3.1.2.8. 1 М разтвор на натриев хидроксид (NaOH).

3.2. Апаратура

3.2.1. Стъклена колона с вътрешен диаметър 10 - 11 mm и дължина приблизително 300 mm с кран за регулиране на потока.

3.2.2. Водна баня за поддържане на постоянна температура от 65°С.

3.2.3. Спектрофотометър, позволяващ да бъдат направени измервания на абсорбцията при 570 nm дължина на вълната, и кювети с оптичен път един сантиметър.

3.3. Начин на работа

3.3.1. Подготовка на йонообменната колона.

Вж. метод "16. Определяне на винена киселина" - обикновен метод т. 3.3.1.

3.3.2. Определяне на органични киселини

Вж. метод "16. Определяне на винена киселина" - обикновен метод, т. 3.3.2.

3.3.3. Определяне на млечна киселина. В 50-милилитрова стъклена епруветка с шлифована запушалка се поставят 10 ml от елюата и се добавят 10 ml от разтвор на цериевия сулфат (т. 3.1.2.1). Разбърква се: поставя се епруветката във водна баня с постоянна температура 65°С за 10 min. Във времето, когато епруветката се потопява във водната баня, стъклената запушалка се маха за няколко секунди за компенсиране на повишеното налягане, дължащо се на разширението. След това запушалката отново се поставя, така че добре да се запуши епруветката и да се избегне загуба на образувания етанал (ацеталдехид). Епруветката се изважда от водната баня и се охлажда под течаща вода до около 20°С. Добавят се 5 ml от 2,5 М разтвор на натриев хидроксид (т. 3.1.2.2), разбърква се и се филтрува.

Вземат се 15 ml от филтрата и се преливат в епруветка от 50 ml с шлифована запушалка, в която вече има хомогенна смес от 5 ml 27%^-ен разтвор на натриев ацетат (т. 3.1.2.3) и 2 ml 1 М сярна киселина (т. 3.1.2.4). Добавят се 5 ml от разтвора на натриев нитрофероцианид [Na₂(Fe(CN)₅NO).2H₂O] (т. 3.1.2.5), смесват се и след това се добавят 5 ml от разтвора на пиперидина (т. 3.1.2.6), енергично се разбърква и веднага се внася този разтвор в кюветата на спектрофотометъра. Полученото оцветяване варира от зелено до виолетово и се измерва при 570 nm дължина на вълната спрямо въздуха (няма кювета на оптичния път). То нараства и след това рязко намалява.

Измененията на абсорбцията се проследяват и се избира максималната стойност като определяща.

Ако елюатът е твърде богат на млечна киселина и абсорбцията е твърде висока, елюатът се разрежда със 7,1%^-ен разтвор на натриев сулфат (т. 3.1.1) и се продължава с измервания на разредения разтвор.

3.3.4. Построяване на калибрационната крива.

Отпипетирват се 10 ml от едномоларния разтвор на млечна киселина (т. 3.1.2.7) и 10 ml от титрирания едномоларен разтвор на натриев хидроксид (т. 3.1.2.8) в 1000 ml мерителна колба и се допълва до марката със 7,1%^-ен разтвор на натриев сулфат. Вземат се по 5, 10, 15, 20 и 25 ml от този разтвор и се поставят в 100 ml мерителни колби. Допълват се до марката със 7,1%^-ен разтвор на натриев сулфат (т. 3.1.1). Вземат се 10 ml от всеки от получилите се разтвори и се определят техните абсорбции съгласно начина на работа, описан в т. 3.3.3 за елюата. Концентрациите за тези разтвори отговарят на елюати от вино, съдържащи 0,45, 0,9, 1,35, 1,80 и 2,25 g/l млечна киселина. Графиката на абсорбциите на тези разтвори в зависимост от концентрацията на млечна киселина в тях е права линия.

3.4. Изразяване на резултатите

По стойността на измерената абсорбция на елюата от калибрационната крива се намира концентрацията на млечната киселина във виното, в грамове на литър. Закръглява се до първия десетичен знак.

Забележка. Вина, съдържащи повече от 250 mg/l серен диоксид, може да имат и съдържание на етаналсулфонова киселина, която се включва в стойностите, получени за млечната киселина. В този случай резултатът се коригира със стойността, получена от следната допълнителна операция: 15 ml от елюата се смесва в епруветка с шлифована запушалка с 5 ml на 27%^-ен разтвор от натриев ацетат (т. 3.1.2.3) и 2 ml на 0,775М H₂SO₄ (77,5 ml на едномоларна сярна киселина се допълва до 100 ml с дестилирана вода). След това както при определянето на млечната киселина се добавят 5 ml на 2%^-ен разтвор на [Na₂(Fe(CN) ₅NO).2H₂O] (т. 3.1.2.5) и 5 ml на 10%^-ен разтвор на пиперидин (т. 3.1.2.6). След разбъркване се измерва абсорбцията при същите условия, описани за определянето на млечната киселина. Намира се тази абсорбция на калибрационната крива, за да се определи стойността В на млечната киселина, в грамове на литър, дължаща се на етаналсулфоновата киселина. Ако L' е стойността на млечната киселина във виното без корекция в g/l, истинската концентрация L на млечната киселина се определя по формулата: L = L' - 0,4B, g/l.

19. Определяне на L-ябълчна киселина

1. Принцип на метода

В присъствието на никотинамид-аденин-динуклеотид (NAD) L-ябълчната киселина се окислява до оксалацетат в реакция, катализирана от L-малатдехидрогеназа (L-MDH).

Равновесието на реакцията обикновено е изтеглено към малата. Премахването на оксалацетата от реакционната смес измества равновесието към формирането на оксалацетат. В присъствието на L-глутамат оксалацетатът се трансформира в L-аспартат. Реакцията се катализира от глутаматна-оксалацетатна-трансаминаза (GOT).

			L-MDH
L-малат	+	NAD +	<=======>	оксалацетат	+	NADH	+	H(+)	(1)

	GOT
Оксалацетат + L-глутамат	<=====>	L-аспартат	+	алфакетоглутарат	(2)

Образуването на NADH, измерено чрез нарастването на абсорбцията при 340 nm дължина на вълната, е пропорционално на първоначално присъстващото количество от L-малата.

2. Реагенти

2.1. Буферен разтвор с рH 10.

(Глицилглицин 0,6 М; L-глутамат 0,1 М): разтварят се 4,75 g от глицилглицин и 0,88 g от L-глутаминова киселина в приблизително 50 ml двойно дестилирана вода; рH се довежда до 10 с около 4,6 ml от 10М натриев хидроксид и се допълва до 60 ml с двойно дестилирана вода. Този разтвор остава стабилен за най-малко 12 седмици при +4°С.

2.2. Разтвор на никотинамид аденин динуклеотид (NAD), приблизително 47 x 10^-3 М - разтварят се 420 mg от NAD в 12 ml двойно дестилирана вода. Този разтвор остава стабилен за най-малко 4 седмици при +4°С.

2.3. Суспензия от глутамат-оксалацетат-трансаминаза (GOT) - 2 mg/ml. Суспензията остава стабилна най-малко година при +4°С.

2.4. Разтвор на L-малатна дехидрогеназа (L-MDH) - 5 mg/ml. Този разтвор остава стабилен за най-малко една година при +4°С.

Забележка. Всички описани реагенти се срещат в наличност в търговската мрежа.

3. Апаратура

3.1. Спектрофотометър, позволяващ да се правят измервания при 340 nm, дължината на вълната с максимална абсорбция от NADH. При липса на такъв спектрофотометър може да се използва и спектрофотометър с непрекъснат спектрален източник, позволяващ да се правят измервания при 334 или 365 nm дължина на вълната.

Необходимо е скалите за дължина на вълната и спектралната абсорбция на вълната да бъдат проверени, тъй като има измервания на абсолютната абсорбция (не се използват калибрационни криви, а стандартизацията се извършва чрез коефициента на екстинкция на NADH).

3.2. Стъклени кювети с дължина на оптичния път 1 cm или кювети за еднократна употреба.

3.3. Микропипети за отпипетиране на течности от 0,01 до 2 ml.

4. Подготовка на пробата

Съдържанието на L-малат обикновено се определя директно върху виното без предварително премахване на оцветяването и без разреждане, при условие че съдържанието на лимонената киселина е по-малко от 350 mg/l (измерено при 365 nm). Ако това не е така, виното се разрежда с двойно дестилирана вода, докато концентрацията на L-малат е между 30 и 350 mg/l (т.е. количеството на L-малата е между 3 и 35 µg).

Ако концентрацията на малат във виното е по-малка от 30 mg/l , обемът на пробата може да бъде увеличен до един милилитър. В този случай обемът на добавяната вода трябва да бъде намален по такъв начин, че общите обеми в двете кювети да бъдат равни.

5. Начин на работа

Спектрофотометърът се настройва на дължина на вълната 340 nm. Измерването на абсорбцията се извършва с кювети с дължина на оптичния път един сантиметър. Нулата на апарата се определя по отношение на въздух или вода. В кюветите се поставят:

	Сравнителна	Аналитична
	проба	проба
Разтвор 2.1	1,00 ml	1,00 ml
Разтвор 2.2	0,20 ml	0,20 ml
Двойно дестилирана вода	1,00 ml	0,90 ml
Суспензия 2.3	0,01 ml	0,01 ml
Проба	-	0,10 ml
Смесват се и се изчаква 3 min. Измерват се абсорбциите на контролата и пробата (А₁)
Добавя се:
Разтвор 2.4	0,01 ml	0,01 ml

Смесват се, изчаква се (5 - 10 min), докато реакцията завърши, и се отчитат абсорбциите на контролата и пробата (А₂). Изчисляват се разликите в абсорбциите (А₂ - А₁) за контролата и пробата. Изчислява се разликата между абсорбционните разлики за еталонния разтвор и за пробата.

DA = DA_D - DA_Т

Забележка: Времето, необходимо за завършване на ензимната активност, може да варира между пробите. Получената стойност е само със справочен характер. Препоръчва се тя да се определя за всяка поредица от проби.

6. Изразяване на резултатите

Концентрацията на L-млечната киселина се дава в грамове на литър. Закръглява се до първия десетичен знак.

6.1. Метод на изчисление.

Основната формула за пресмятане концентрацията е:

С = DA (V • PM / 1000e • d • v), където:

V е обемът от анализирания разтвор в милилитри (в случая 2,22 ml);

v - обемът на контролата в милилитри (в случая 0,1 ml);

РМ - молекулната маса на анализираната субстанция (в случая за L-ябълчна киселина - 134,09);

d - оптичният път в сантиметри (в случая 1 cm);

e е коефициентът на абсорбция на NАDH при 340 nm (e = 6,3 mmol^-1.l.cm^-1)

За L-малата:

С = 0,473 DA g/l

Ако пробата е била разредена по време на приготвянето ѝ, резултатът се умножава по фактора на разреждане.

Забележка.

Измерване при 334 nm: С = 0,482 DA;

Измерване при 365 nm: C = 0,876 DA.

6.2. Повторяемост (r)

r = 0,03+0,034x_i ,където:

x_i е концентрацията на ябълчна киселина в пробата, в g/l

6.3. Възпроизводимост (R)

R = 0,05 + 0,071 x_i, където:

x_i е концентрацията на ябълчната киселина в пробата, в g/l

20. Определяне на D-ябълчна киселина (ензимен метод)

1. Принцип

В присъствието на D-малат хидрогеназа (D-MDH) D-ябълчната киселина се окислява от никотинамид аденин динуклеотид (NAD) до оксалацетат. Образуваният оксалацетат трансформира в пируват и въглероден диоксид.

			D-MDH
D-малат	+	NAD+	<=======>	пируват	+	СО2	+	NADH	+	H(+)

Количеството на образувалия се NADH е пропорционално на концентрацията на D-ябълчната киселина и се измерва при дължина на вълната 334, 340 или 365 nm.

2. Реактиви

Комбинация за извършване на приблизително 30 анализа:

а) колба 1 с около 30 ml разтвор, състоящ се от буферен разтвор на Hepes [N-(2-хидроксиетил) пиперазин-N'-етансулфонова киселина] pH = 9,0 и стабилизатори;

б) колба 2 с около 210 mg NAD лиофилизат;

в) три колби 3 с D-MDH лиофилизат, около 8U всяка.

Приготвяне на разтворите:

а) съдържанието на колба 1 се използва, без да се разрежда; преди използване температурата на разтвора се довежда до 20 - 25°C;

б) съдържанието на колба 2 се разрежда с 4 ml двойно дестилирана вода;

в) съдържанието на една от колбите 3 се разрежда с 0,6 ml двойно дестилирана вода; преди използване температурата на разтвора се довежда до 20 - 25°C.

Устойчивост на разтворите

Съдържанието на колба 1 е стабилно в продължение поне на една година, ако се съхранява при +4°C; разтворът в колба 2 е стабилен в продължение на три седмици, ако се съхранява при +4°C или в продължение на два месеца, ако се съхранява при минус 20°C; разтвор 3 е стабилен в продължение на 5 дни, ако се съхранява при +4°C.

3. Апаратура

3.1. Спектрофотометър, даващ възможност да се правят измервания при дължина на вълната 340 nm, при която поглъщането от NADH е максимално. Ако не се разполага с такъв спектрофотометър, може да се използва спектрофотометър с източник, характеризиращ се с прекъснат спектър, който позволява да се правят измервания при 334 или 365 nm. Тъй като се правят абсолютни измервания (т.е. не се използва набор от калибровъчни разтвори, а се използва светлинната абсорбируемост на NADH), необходимо е да се направи проверка на скалите за дължината на вълната и на спектралното поглъщане на апаратурата.

3.2. Стъклени кювети с дължина на оптичния път един сантиметър (в зависимост от предпочитанията може да се използват и кювети за еднократна употреба).

3.3 Микропипети за пипетиране на обеми в диапазона от 0,01 до 2 ml.

4. Приготвяне на пробата за анализ

Анализът на D-малат обикновено се извършва директно върху виното, без предварително обезцветяване. Количеството D-малат в кюветата трябва да е между 2 и 50 µg. Ето защо виното се разрежда, за да се получи концентрация на D-малат между 0,02 и 0,5 g/l или съответно 0,02 и 0,3 g/l (в зависимост от използваната апаратура).

Таблица с данни за разреждането:

Намерено количество на
D-малат/литри	Разреждане	Фактор на
определено при:	с вода	разреждане F

340 или 334 nm	365 nm
< 0,3 g	< 0,5 g	-	1
0,3 - 3,0 g	0,5 - 5,0 g	1 + 9	10

5. Процедура

При настройка на спектрофотометъра за дължина на вълната 340 nm поглъщането се определя чрез използване на кювети от един сантиметър, като за нулиране се използва въздух (без кювета в оптичния път) или вода.

Отпипетирва се в кюветите:

	Еталонен	Проба за
	разтвор	анализ
	(ml)	(ml)
Разтвор 1	1,00	1,00
Разтвор 2	0,10	0,10
Бидестилирана вода	1,80	1,70
Проба за определяне	-	0,10
Разбърква се и след около 6 min се
измерва абсорбцията на еталонния
разтвор и на пробата за анализ (A₁).

Добавя се
Разтвор 3	0,05	0,05

Разбърква се, изчаква се, докато реакцията завърши (около 20 min) и се измерва абсорбцията на еталонния разтвор и на пробата за анализ (A₂). Изчислява се абсорбционната разлика (A₂ - A₁) за еталонния разтвор (DA_T) и за разтвора на пробата за анализ (DA_E). Най-накрая се изчислява разликата между тези разлики:

DA = DA_E - DA_T

Забележка. Времето, което е необходимо, за да приключи действието на ензима, може да е различно за различните партиди. Получената стойност е ориентировъчна и се препоръчва да бъде определяна за всяка партида.

D-ябълчната киселина реагира бързо, макар и много по-бавно ензимът преобразува също така и L-винената киселина. Това обяснява слабата странична реакция, която може да бъде коригирана чрез екстраполация (вж. приложение А).

6. Изразяване на резултатите

Общата формула за изчисляване на концентрацията в милиграми на литър е:

С = DA (V • PM / e • d • v), където:

V е обемът на разтвора на пробата за анализ, в ml (в случая 2,95 ml);

v - обемът на пробата за анализ в ml (в случая 0,1 ml);

PM - молекулната маса на веществото, което следва да бъде анализирано (за D-ябълчна киселина, в случая - 134,09);

d - оптиченият път на кюветата, в сантиметри (в случая 1 cm);

e = коефициент на поглъщане на NADH:

при 340 nm = 6,3 (mmol ^-1.1. сm^-1)

при 365 nm = 3,4 (mmol ^-1.1. сm^-1)

при 334 nm = 6,18 (mmol ^-1.1. сm^-1).

Ако пробата за анализ е била разредена по време на приготвянето ѝ, резултатът се умножава с коефициента на разреждане.

Концентрацията на D-ябълчна киселина се изразява в милиграми на литър. Закръглява се до цяло число.

7. Точност

В приложение Б са резюмирани данни от интерлабораторни изследвания на точността на метода. Стойностите, получени от интерлабораторните изследвания, може и да не са приложими за обхвати на концентрацията на анализираното вещество и за матрици, които са различни от посочените в приложение Б.

7.1. Повторяемост

Абсолютната разлика между два отделни резултата, получени за идентично изследвано вещество, подложено на анализ от оператор, който използва един и същи уред, във възможно най-кратък интервал от време, не надхвърля степента на повторяемост r в повече от 5% от случаите.

r = 11 mg/l.

7.2. Възпроизводимост

Абсолютната разлика между два отделни резултата, получени за идентично изследвано вещество, подложено на анализ в две различни лаборатории, не надхвърля степента на възпроизводимост R в повече от 5% от случаите.

R = 20 mg/l.

8. Коментар

С оглед на степента на точност на този метод стойности на D-ябълчна киселина под 50 mg/l трябва да бъдат потвърдени при необходимост чрез друг аналитичен метод, основаващ се на друг принцип на измерване, напр. като този на Пржиборски и съавтори (Mitteilungen Klosterneuburg 43, 1993, 215-218).

Пробата вино в кюветата не трябва да превишава 0,1 ml, за да не бъде инхибирано ензимното действие на полифенолите.

Приложение А

Странична реакция

Страничните реакции обикновено се дължат на вторични реакции на ензима, на наличието на други ензими в матрицата на пробата или на взаимодействието на един или повече елементи на матрицата с друг, едновременно действащ фактор в ензимната реакция.

При нормална реакция поглъщането достига постоянна стойност след определено време, обикновено 10 до 20 min, в зависимост от скоростта на специфичната ензимна реакция. Ако възникнат вторични реакции, обаче, поглъщането не достига постоянна стойност, а се увеличава постоянно с времето. Този вид процес обикновено се нарича "странична реакция".

Когато възникне странична реакция, поглъщането на разтвора трябва да се измерва периодично (на всеки две до пет минути) след изтичане на времето, което е необходимо за един стандартен разтвор да достигне своето крайно ниво на поглъщане. Ако поглъщането се увеличава постоянно, е необходимо да се направят пет или шест измервания и да се екстраполират в обратна посока с помощта на графика или изчисления, с цел да се определи поглъщането, което би трябвало да се наблюдава при добавяне на последния ензим (T0). Концентрацията на субстрата се изчислява въз основа на разликата на екстраполираното към този момент поглъщане (Af - Ai).

Приложение А

Фигура 1. Странична реакция

Приложение Б

Статистически резултати от паралелни интерлабораторни изследвания

Година на изследване - 1995.

Брой на лабораториите - 8.

Брой на пробите - 5 с добавка на D-ябълчена киселина

Вид на пробите:

А - червено вино;

В - червено вино;

С - бяло вино;

D - бяло вино;

E - бяло вино.

21. Определяне на обща ябълчна киселина (обикновен метод)

1. Принцип на метода

Ябълчната киселина, изолирана с помощта на анионобменна колона, се определя колориметрично в елюата чрез измерване на жълтото оцветяване, което тя дава под действието на 96% сярна киселина и на хромотропова киселина. Веществата, съдържащи се в елюата, пречат на тази реакция. Тези вещества реагират с 86% сярна киселина и хромотропова киселина. За да се елиминира влиянието на тези вещества, е достатъчно от абсорбцията, получена след реакцията между хромотропова и 96%-на сярна киселина, да се извади абсорбцията, получена от реакцията с хромотропова киселина и 86%-на сярна киселина.

2. Апаратура

2.1. Стъклена колона с приблизителна дължина 250 mm и вътрешен диаметър 35 mm, с кран.

2.2. Стъклена колона с приблизителна дължина 300 mm и вътрешен диаметър 10 - 11 mm, с кран.

2.3. Водна баня, термостатично контролирана до 100°С.

2.4. Спектрофотометър, позволяващ измерване на абсорбцията при 420 nm, със стъклени кювети с оптичен път един сантиметър.

3. Реактиви

3.1. Силно основна йоннообменна смола (примерно Merck III).

3.2. Натриев хидроксид 5 % (m/v).

3.3. Оцетна киселина 30 % (m/v).

3.4.Оцетна киселина 0,5 % (m/v).

3.5. Разтвор на натриев сулфат (Na₂SO₄), 10 %(m/v).

3.6. Концентрирана сярна киселина 95 до 97 % (m/m).

3.7.Сярна киселина 86 % (m/m).

3.8. Разтвор на хромотропова киселина, 5 % (m/v).

Преди всяко определяне се приготвя пресен разтвор чрез разтваряне на 500 mg динатриева сол на хромотроповата киселина (C₁₀H₆Na₂O₈S₂.2H₂О) в 10 ml дестилирана вода.

3.9. Разтвор на DL-ябълчна киселина - 0,5 g/l.

Разтварят се 250 mg/l ябълчна киселина (С₄H₆O₅) в достатъчно количество 10%^-eн разтвор на натриев сулфат (т. 3.5) и се долива до 500 ml с разтвор на динатриев сулфат (10 %).

4. Начин на работа

4.1. Приготвяне на йоннообменната смола

На дъното на колоната с размери 35 x 250 mm се поставя намокрен с дестилирана вода стъклен памук. Налива се водна суспензия от анионобменната смола в стъклената колона по такъв начин, че течността да остане на ниво 50 mm над нивото на смолата. Промива се с 1000 ml дестилирана вода. Колоната се промива с разтвор на натриев хидроксид (5%), като се оставя течността да достигне до 2-3 mm над нивото на смолата. Тази операция се повтаря още два пъти и смолата се оставя в контакт в продължение на един час. Колоната се промива с 1000 ml дестилирана вода. Напълва се отново колоната с 30%-на оцетна киселина и се оставя течността да изтече до 2-3 mm над нивото на смолата. Тази операция се повтаря още два пъти. Оставя се поне 24 h да престои преди употреба. Смолата се съхранява с 30%^-на оцетна киселина за по-късно използване.

4.2. Подготвяне на йоннообменната смола

В долния край на колоната с размери 11 x 300 mm се поставя тампон от стъклен памук. Суспензията от йоннообменната смола, приготвена както е описано в т. 4.1, се налива до височина 10 cm. Кранът се оставя отворен. Разтворът на 30%^-на оцетна киселина се оставя да изтече до 2-3 mm над горната повърхност на смолата. Колоната се измива с 50 ml 0,5%^-на оцетна киселина.

4.3. Изолиране на DL-ябълчна киселина

Прехвърлят се 10 ml вино или гроздова мъст в колоната, в която има йоннообменна смола, както е описано в т. 4.2. Оставя се да изтича капка по капка (дебитът да е около капка в секунда) и се спира изтичането при достигане на течността 2-3 mm над горното ниво на смолата. Колоната се измива първоначално с 50 ml 0,5%^-на оцетна киселина, а след това с 50 ml дестилирана вода, като ѝ се позволява да изтече до същото ниво и със същата скорост.

Киселините, задържани от смолата, се елюират с 10% разтвор на натриев сулфат (т. 3.5) при същите условия. Елюатът се събира в 100 ml мерителна колба. Колоната може да бъде регенерирана, като се следва процедурата, описана в т. 4.1.

4.4. Определяне на ябълчната киселина

Маркират се две 30-милилитрови епруветки с широко гърло и шлиф с "А" и "Б". Във всяка една епруветка се добавя по един милилитър от елюата (т. 4.3) и един милилитър от 5%^-на хромотропова киселина. Добавят се в епруветка "А" (контролата) 10 ml 86%^-на сярна киселина и 10 ml 96%^-на сярна киселина в епруветка "Б" (пробата). Запушва се и се хомогенизира чрез разклащане, като се внимава да не се навлажни стъклената запушалка. Епруветките се поставят в кипяща водна баня за 10 min. Охлаждат се епруветките на тъмно до 20°С. Точно 90 min от началото на охлаждането се измерва абсорбцията на съдържанието в епруветка "Б" спрямо контролата "А", при 420 nm в 10 mm кювети.

4.5. Построяване на калибрационна крива

В мерителни колби от 50 ml се отпипетирват по 5, 10, 15 и 20 ml от разтвор на ябълчна киселина с концентрация 5,0 g/l. Доливат се до марката с разтвор на 10%-ен натриев сулфат. Тези разтвори съответстват на елюати, получени от вино, със съдържание 0,5; 1,0; 1,5 и 2 g DL - ябълчна киселина/l.

Продължава се, както е описано в т. 4.4.

Графиката на стойностите на абсорбациите на тези разтвори е функция от концентрацията на ябълчната киселина в тях и представлява права линия, пресичаща началото на координатна система.

Интензитетът на полученото оцветяване зависи до голяма степен от концентрацията на сярната киселина. Необходимо е да се проверява калибрационната крива за поне една точка на серия определяния, за да се провери дали концентрацията на сярната киселина не се е променила.

5. Представяне на резултатите

Концентрацията на елюата се намира от калибрационната крива посредством екстраполиране на стойността на измерената абсорбация, за да се отчете съответстваща концентрация на ябълчната киселина в грамове на литър. Закръглява се до първия десетичен знак.

Повторяемост (r):
Съдържание < 2 g/l:	r = 0,1 g/l;
Съдържание > 2 g/l:	r = 0,2 g/l.
Възпроизводимост: (R)
R = 0,3 g/l

22. Определяне на сорбинова киселина

1. Принцип на методите

1.1 Определяне чрез ултравиолетова спектрофотометрия

Сорбиновата киселина (транс, транс 2,4 хексадеинова киселина), извлечена чрез дестилация с водна пара, се определя във винения дестилат чрез спектрофотометрия в ултравиолетовата област. Вещества, които пречат в ултравиолетовата област, се отстраняват чрез изпаряване до сухо с предварително леко алкализиране на дестилата с калциев хидроксид. Количества, по-малки от 20 mg/l, се потвърждават с използване на тънкослойна хроматография (чувствителност 1 mg/l).

1.2. Определяне чрез газова хроматография

Сорбиновата киселина се извлича с диетилов етер и се определя чрез газова хроматография с вътрешен стандарт.

1.3. Определяне на следи чрез тънкослойна хроматография.

Сорбиновата киселина, екстрахирана с диетилов етер, се определя чрез метода на тънкослойната хроматография. Нейната концентрация е отчетена полуколичествено.

2. Метод за определяне с ултравиолетова светлина

2.1. Реактиви

2.1.1. Кристална винена киселина (С₄Н₆О₆).

2.1.2. Разтвор на калциев хидроксид [Са(ОН)₂], приблизително 0,02 М.

2.1.3. Сравнителен разтвор на сорбинова киселина 20 милиграма на литър.

Разтварят се 20 mg сорбинова киселина (С₆Н₈О₂) в приблизително 2 ml от 0,1 M разтвор на натриев хидроксид. Прехвърля се в мерителна колба с обем 1000 ml и се допълва до марката с вода. Възможно е също така и да се разтворят 26,8 mg калиев сорбат С₆Н₇КО₂ във вода и да се допълни до 1000 ml с вода.

2.2 Апаратура

2.2.1. Парогенератор (вж. метод "14. Определяне на летлива киселинност").

2.2.2. Водна баня при 100°С.

2.2.3. Спектрофотометър, позволяващ измерване при дължина на вълната 256 nm, с кварцови кювети с оптичен път един сантиметър.

2.3. Начин на работа

2.3.1. Дестилация

В барботьора се прехвърлят 10 ml вино и се прибавя 1-2 g винена киселина (т. 2.1.1). Събират се 250 ml от дестилата.

2.3.2. Построяване на калибрационната крива

Чрез разреждане на сравнителния разтвор (т. 2.1.3) с вода се подготвят четири разтвора, съдържащи 0,5, 1,0, 2,5 и 5 mg сорбинова киселина/l. Измерва се тяхната абсорбция със спектрофотометър при 256 nm, използвайки дестилирана вода като контрола. Начертава се кривата, показваща изменението на абсорбцията, като функция на концентрацията. Функцията е линейна.

2.3.3. Определяния

5 ml от дестилата се поставят в изпарителен съд с диаметър 55 mm и се прибавя 1 ml разтвор на калциев хидроксид (т. 2.1.2). Изпарява се на водна баня до сухо.

Остатъкът се разтваря в няколко милилитра дестилирана вода. Пренася се количествено в 20 ml обемна колба и се добавя вода до марката. Със спектрофотометър се измерва абсорбцията при 256 nm. Като контрола се използва разтвор, който е получен чрез разреждане на 1 ml разтвор на калциев хидроксид (т. 2.1.2) до 20 ml. Нанасят се стойностите от измерената абсорбция на калибрационната крива и от нея се отчита концентрацията.

Забележка. В практиката изпарението може да се пренебрегне и да се работи директно върху дестилата, разреден с дестилирана вода до 1:4.

2.4. Представяне на резултатите

2.4.1. Изчисления

Концентрацията на сорбинова киселина във виното се изразява в mg/l; изчислява се по формулата:

100 С, където:

С е концентрацията на сорбинова киселина в разтвора, анализирана чрез спектрофотометрия, изразена в mg/l.

3. Анализ чрез газова хроматография

3.1. Реактиви

3.1.1. Диетилов етер [(С₂Н₅)₂О], дестилиран непосредствено преди употреба.

3.1.2. Вътрешен стандартен разтвор - разтвор от нонанова киселина (С₁₁Н₂₂О₂) в 95%^-eн етанол при концентрация един грам на литър.

3.1.3. Воден разтвор на сярна киселина (Н₂SO₄, r_20°C = 1,84 g/ml), разреден 1:3 (v/v).

3.2. Апаратура

3.2.1. Газов хроматограф, снабден с пламъчно-йонизиращ детектор и колона от неръждаема стомана (4 m x 1/8 инча), предварително обработена с диметилхлорозилен и напълнена със стационарна фаза, състояща се от смес от 5% диетиленгликол сукцинат и 1% DEGS-H₃PO₄ фосфорна киселина или от смес от 7% диетиленгликол адипат и 1% DEGА-H₃PO₄ фосфорна киселина, фиксирана върху Gaschrom Q 80 - 100 mesh.

За обработката с диметилдихлорсилан (DMDCS) през колоната се пропуска разтвор, съдържащ 2 - 3 g DMDCS в пречистен тoлуол. Колоната веднага се измива с метанол; пропуска се азот и след това се напълва с хексан и отново повече азот. След тези процедури колоната се напълва.

Оперативни условия:

температура на колоната - 175°С;

температура на инжектора и детектора - 230°С;

носещ газ - азот (скорост на потока 200 ml/min).

3.2.2. Микроспринцовка 10 ml, градуирана за измерване до 0,1 ml.

Забележка. Могат да се използват и други видове колони, които имат добра разделителна способност, в частност капилярни колони (примерно FFAP). Описаният работен метод е даден като пример.

3.3. Начин на работа

3.3.1. Подготовка на пробата за анализ

В стъклена епруветка с обем приблизително 40 ml, снабдена с шлифована запушалка, се прехвърлят 20 ml вино, прибавят се 2 ml от вътрешния стандартен разтвор (т. 3.1.2) и 1 ml от разредената сярна киселина (т. 3.1.3). След смесването на разтворите чрез неколкократно обръщане на епруветката към съдържанието се добавят 10 ml диетилов етер (т. 3.1.1). Сорбиновата киселина се екстрахира в органична фаза посредством разклащане в продължение на 5 min. Оставя се да се утаи.

3.3.2. Подготовка на сравнителния разтвор

Избира се вино, чийто етеров екстракт не дава на хроматограмата пик, съответстващ на елюирана сорбинова киселина. Във виното се добавя сорбинова киселина с концентрация 100 mg/l. Приготвят се 20 ml от анализирания разтвор, като се следва процедурата, описана в т. 3.3.1.

3.3.3. Хроматография

С микроспринцовка се инжектират 2 µl от екстрахираната с етер фаза, описана в т. 3.3.2, и 2 µl от екстрахираната с етер фаза, описана в т. 3.3.1.

Записване на хроматограмата: проверява се идентичността на съответните времена на задържане на сорбиновата киселина. Измерва се площта на всеки пик.

3.4. Изразяване на резултатите

3.4.1. Изчисления

Концентрацията на сорбинова киселина в анализираното вино, изразена в mg/l, се изчислява по формулата:

	h	I
100	___	___	mg/l, където,
	H	i

Н е височината на пика на сорбиновата киселина в сравнителния разтвор;

h - височината на пика на сорбиновата киселина в пробата;

I - височината на пика на вътрешния стандарт в сравнителния разтвор;

i - височината на пика на вътрешния стандарт в пробата.

Забележка. Концентрацията на сорбиновата киселина може да бъде определена по същия начин, но чрез измерване на площите на пиковете под съответните пикове.

4. Определяне на следи от сорбинова киселина чрез тънкослойна хроматография

4.1. Реактиви

4.1.1. Диетилов етер (С₂Н₅)₂О.

4.1.2. Воден разтвор на сярна киселина (H₂SO₄, r_20°C = 1,84 g/ml), разреден 1:3 (v/v).

4.1.3. Стандартен разтвор на сорбинова киселина в смес от етанол и вода с алкохолно съдържание 10 об.%, съдържащ 20 mg/l.

4.1.4. Подвижна фаза - хексан-пентан-оцетна киселина (20:20:3) (С₆Н₁₄^-С₅Н₁₂ - СН₃СООН, r_20°C = 1,05 g/ml)

4.2. Апаратура

4.2.1. Покрита плака за тънкослойна хроматография 20 x 20 cm, с полиамиден гел с дебелина 0,15 mm, с добавка от флуоресцентен индикатор.

4.2.2. Вана за тънкослойна хроматография.

4.2.3. Микропипета от 5 ml ± 0,1 ml

4.2.4. Ултравиолетова лампа (254 nm)

4.3. Начин на работа

4.3.1. Подготовка на пробата за анализ

В стъклена епруветка с шлифована запушалка от 25 ml се поставят 10 ml вино, след което се добавя 1 ml сярна киселина (т. 4.1.2) и 5 ml диетилов етер (т. 4.1.1). Смесва се, като епруветката се обръща многократно и се оставя да се утаи.

4.3.2. Приготвяне на сравнителен разтвор за разреждане

Чрез разреждане на разтвора, описан в т. 4.1.3, се приготвят пет разредени разтвора, съдържащи съответно 2, 4, 6, 8 и 10 mg сорбинова киселина/l.

4.3.3 Хроматография

С микропипета се поставят 5 ml от екстрахираната с етер фаза, получена в т. 4.3.1, и 5 ml от всеки разреден стандартен разтвор (т. 4.3.2) в положение 2 сm от по-ниския ръб на плаката и на 2 сm един от друг.

Подвижната фаза (т. 4.1.4) се поставя във ваната за хроматографиране на височина около 0,5 cm, така че да позволява насищането на атмосферата в него с парите на разтворителя. Плаката се поставя във ваната. Хроматограмата се развива над 12 до 15 сm (процесът трае около 30 min). Плаката се изсушава със струя студен въздух и хроматограмата се наблюдава под 254 nm UV лампа.

Петната, показващи наличието на сорбинова киселина, се оцветяват в тъмновиолетово на жълто флуоресциращия фон на плаката.

4.4. Изразяване на резултатите

Сравняването на интензитета на петната от анализираната проба и на тези от стандартния разтвор позволява полуколичественото определяне на концентрацията на сорбиновата киселина в количества между 2 и 10 mg/l. Концентрация от 1 mg/l може да бъде определена посредством анализиране на 10 ml от разтвора на пробата.

Концентрации над 10 mg/l могат да бъдат определени с анализиране на 5 ml (отмерени с микропипета).

23. Определяне L-аскорбинова киселина

1. Принцип на методите

Предложените методи позволяват определянето на L-аскорбинова киселина и на дехидроаскорбинова киселина във вина и мъст.

1.1. Сравнителен метод (флуорометричен)

L-аскорбиновата киселина се окислява с активен въглен в дехидроаскорбинова киселина. Последната образува флуоресциращо съединение с ортофенилендиамин (ОФДА). Провеждането на контролен тест в присъствието на борна киселина позволява определянето на съпътстваща флуоресценция (чрез формирането на комплекс борна киселина - дехидроаскорбинова киселина) и изваждането ѝ от резултата на флуориметричното изследване.

1.2. Обикновен метод (колориметричен)

L-аскорбиновата киселина се окислява с йод до дехидроаскорбинова киселина, която се утаява с динитрофенилхидразин с цел получаване на бис (2,4-динитрофенилхидразон). След разделяне с тънкослойна хроматография и разтваряне в оцетно-кисела среда червено оцветеният дериват се определя спектрофотометрично при 500 nm.

2. Сравнителен метод (флуорометричен)

2.1. Реактиви

2.1.1. Разтвор на ортофенилендиамин дихидрохлорид (C₆H₁₀C₁₂N₂) - 0,02 g в 100 ml, приготвен непосредствено преди употреба.

2.1.2. Разтвор на натриев ацетат трихидрат (NaCH₃COO.3H₂O) - 500 g/l.

2.1.3. Смесен разтвор на борна киселина и натриев ацетат:

Разтвор на 3 g борна киселина (H₃BO₃) в 100 ml разтвор на натриев ацетат (т. 2.1.2). Разтворът трябва да се приготвя непосредствено преди употреба.

2.1.4. Разтвор на ледена оцетна киселина CH₃COOH (r_20°C = 1,05 g/ml), разреден до 56% (v/v) с pH около 1,2.

2.1.5. Сравнителен разтвор на L-аскорбинова киселина, 1 g/l:

Приготвя се непосредствено преди употреба, като се разтварят 50 mg L-аскорбинова киселина (C₆H₈O₆), предварително дехидратирана в ексикатор, защитен от светлина, в 50 ml разтвор на оцетна киселина (т. 2.1.4).

2.1.6. Активен въглен - химически чист за анализ (Наименование "Негрил")

В ерленмаерова колба от 2 l се поставят 100 g активен въглен и се добавят 500 ml 10%^-ен (v/v) разтвор на солна киселина (HCl, r_20°C = 1,19 g/ml). Нагрява се до кипене. Филтрува се през шотов филтър с порьозност 3. Третираният по този начин въглен се събира в конусовидна колба от 2 l, добавя се един литър вода, разбърква се и се филтрира с шотов филтър с порьозност 3. Тази операция се повтаря още два пъти. Остатъкът се поставя в сушилня с регулируема температура до 115 ± 5°С за 12 h (примерно една нощ).

2.2. Апаратура

2.2.1. Флуориметър. Използва се спектрофлуориметър, снабден с лампа, даващ непрекъснат спектър при минимално напрежение. Оптималната дължина на вълната за възбуждане и емисия се определят предварително и зависят от използваното оборудване. Дължината на вълната за възбуждане ще бъде приблизително 350 nm, а тази на емисията 430 nm.

Кювети с оптичен път 1 cm.

2.2.2. Шотов стъклен филтър с порьозност 3.

2.2.3. Тест епруветки (диаметър около 10 mm).

2.2.4. Бъркалки за тест епруветки

2.3. Начин на работа

2.3.1. Подготовка на пробите от вино или мъст

Част от виното или мъстта се поставя в мерителна колба с обем 100 ml и се разрежда до марката с 56%^-ен разтвор на оцетна киселина (т. 2.1.4),за да се получи разтвор на L-аскорбинова киселина с концентрация между 0 и 60 mg/l. Съдържанието се хомогенизира чрез разбъркване. Добавят се 2 g активен въглен (т. 2.1.6) и се оставя 15 min, като от време на време се разбърква. Филтрира се през филтърна хартия и първите няколко милилитра от филтрата се отстраняват. В две други мерителни колби с обем 100 ml се поставят 5 ml от филтрата и 5 ml от смесен разтвор на борна киселина и натриев ацетат (т. 2.1.3) (контрола), а във втората - 5 ml от разтвора на натриевия ацетат (т. 2.1.2) (проба). Оставя се 15 min, като от време на време се разбърква. Разрежда се с дестилирана вода до 100 ml. Взимат се по 2 ml от съдържанието на всяка колба и се добавят 5 ml разтвор на орто-фенилендиамин (т. 2.1.1), разбърква се, оставя се 30 min, докато протече реакцията и разтворът потъмнее, след което се мери спектрофлуориметрично.

2.3.2. Изготвяне на калибрационна крива

В три мерителни колби с обем 100 ml се поставят съответно по 2,4 и 6 ml от разтвора на L-аскорбиновата киселина (т. 2.1.5), разрежда се до 100 ml с разтвор на оцетна киселина (т. 2.1.4) и чрез разбъркване се хомогенизира. Сравнителните разтвори, приготвени по този начин, съдържат съответно по 2,4 и 6 mg /100 ml. Добавят се 2 g активен въглен (т. 2.1.6) към всяка от колбите и се оставя за 15 min, като се разбъркват периодично. Филтрира се през обикновена филтърна хартия, като се отстраняват първите няколко милилитра от филтрата. Поставят се по 5 ml от всеки филтрат в три мерителни колби с обем 100 ml (първите серии). Операцията се повтаря. Получават се втори серии от трите мерителни колби. Към всяка от колбите в първите серии (отговарящи на контролите) се прибавят по 5 ml от смесения разтвор на борна киселина и натриев ацетат (т. 2.1.5) и към всяка от колбите от вторите серии - 5 ml от разтвора на натриев ацетат (т. 2.1.2). Оставят се за 15 min, като се разбъркват периодично. Доливат се до 100 ml с дестилирана вода. Взимат се по 2 ml от съдържанието на всяка от колбите, добавят се 5 ml разтвор на ортофенилендиамин (т. 2.1.1), разбъркват се. Реакцията протича за 30 min, докато разтворът потъмнее, и след това се измерва спектрофлуориметрично.

2.3.3. Флуориметрично определяне

Нулата на измерващата скала се регулира за всеки разтвор за построяване на калибриращата крива и определяните разтвори със съответната контрола. След това се измерва интензитетът на флуоресценция на всеки разтвор от тези на калибрационната крива и тези на опитните. Начертава се калибрационната крива, която е права линия, минаваща през началото на координационната система. На тази линия се намира стойността, която е определена с измерването, и тя съответства на определена концентрация на L-аскорбинова киселина + дехидроаскорбинова киселина в анализирания разтвор.

2.3.4. Изразяване на резултатите

Концентрацията на L-аскорбинова киселина и на дехидроаскорбинова киселина във виното в милиграми на литър се изчислява по формулата С x F, където F е факторът на разреждане.

3. Обикновен метод (колориметричен метод)

3.1 Реактиви:

3.1.1. Разтвор на мета-фосфорна киселина, 30 %^-на (m/v)

Вземат се 30 g мета-фосфорна киселина (HPO₃)_n, предварително стрита в хаван. Промива се бързо с дестилирана вода и се разбърква. Промитата киселина се разтваря в дестилирана вода, като се разклаща в мерителна колба с обем 100 ml и се долива до марката. Разтворът има концентрация приблизително 30% (m/v) мета-фосфорна киселина.

3.1.2. 3%^-ен (m/v) разтвор на мета-фосфорна киселина, приготвен непосредствено преди употребата посредством разреждане 1:10 с дестилирана вода на разтвор по т. 3.1.1.

3.1.3. 1%^-ен (m/v) разтвор на мета-фосфорна киселина, приготвен непосредствено преди употребата посредством разреждане 1:30 с дестилирана вода на разтвор по т. 3.1.1.

3.1.4. Полиамидна суспензия

Приготвя се суспензия от 10 g полиамид за хроматография с 60 ml дестилирана вода. Оставя се за два часа. Така приготвеното количество е достатъчно за четири анализа.

3.1.5. Тиокарбамид [(NH₂)₂CS].

3.1.6. 0,05 М разтвор на йод (I₂).

3.1.7. 6% (m/v) разтвор на 2,4-динитрофенилхидразин:

Приготвя се суспензия от 6 g 2,4-динитрофенилхидразин (C₆H₆N₄O₄) в 50 ml ледена оцетна киселина (r_20°C = 1,05 g/ml), добавят се 50 ml сярна киселина (r_20°C = 1,84 g/ml). 2,4-динитрофенилхидразинът се разтваря чрез разбъркване.

3.1.8. Етилацетат (C₄H₈O₂) - добавя се 2%^-на (v/v) ледена оцетна киселина (т. 3.1.12).

3.1.9. Хлороформ (CHCl₃).

3.1.10. 0,5% (m/v) воден разтвор на нишесте.

3.1.11. Подвижна фаза:

етилацетат - 50 об.%;

хлороформ - 60 об.%;

ледена оцетна киселина - 5 об.%.

Сместа от разтворители се оставя в покой за 12 h преди употреба.

3.1.12. Ледена оцетна киселина CH₃COOH (r_20°C = 1,05 g/ml).

3.1.13. Разтвор на L-аскорбинова киселина - 0,1 g/100 ml от 1%^-ен разтвор на мета-фосфорна киселина (т. 3.1.3).

3.2. Апаратура

3.2.1. Лабораторна центрофуга и центрофужни епруветки от 50 ml с шлифовани запушалки.

3.2.2. Водна баня за охлаждане с термостатично контролирана температура, между 5 и 10°С.

3.2.3. Термостатирана водна баня при 20°С.

3.2.4. Плаки за тънкослойна хроматография 20 x 20 сm, покрити със силикагел G (дебелина 0,25 или 0,3 mm).

3.2.5. Хроматографска вана.

3.2.6. Микропипети, позволяващи измерването на обеми до 0,2 ml.

3.2.7. Спектрофотометър, позволяващ измерване при 500 nm с кювети с оптичен път 1 cm.

3.3. Начин на работа

3.3.1. Окисляване на L-аскорбиновата киселина до дехидроаскорбинова.

В мерителна колба с обем 100 ml се поставят 50 ml от виното, добавят се 15 ml от полиамидната суспензия (т. 3.1.4) и се долива до марката с 3%^-ен разтвор на мета-фосфорна киселина (т. 3.1.2.). Разтворът се оставя за един час, като се разклаща на равномерни интервали от време. Филтрира се през нагънат филтър. В центрофужна епруветка се събират 20 ml от филтрата, добавя се 1 ml от 0,05 М разтвор на йод (т. 3.1.6). Хомогенизира се чрез разклащане на затворената центрофужна епруветка и след една минута отделящият се йод се редуцира посредством прибавяне на около 25 mg тиокарбамид.

3.3.2. Образуване и екстрахиране на бис (2,4-динитрофенилхидразин) на дикетоглутаровата киселина.

Епруветката се поставя в охладена водна баня с поддържана температура между 5 и 10°С, добавят се 4 ml от разтвора на 2,4-динитрофенилхидразин (т. 3.1.7). Съдържанието внимателно се смесва, като се избягва намокрянето на шлифованата запушалка. Епруветката се затваря плътно и се поставя във водната баня при 20°С, за около 16 h (примерно една нощ).

Към съдържанието на центрофужната епруветка се добавя 15 ml от етилацетата (т. 3.1.8). Епруветката се затваря и се разклаща енергично около 30 s. Центрофугира се около 5 min с центрофужна сила 350 - 400 g. Отпипетират се 10 ml от екстракта на етилацетата в конични колби с шлифована запушалка. Запушалката се отстранява и се добавят допълнително 5 ml етилацетат (т. 3.1.8) - центрофужната епруветка отново се разклаща 30 s и се центрофугира 5 min при същата скорост. Отпипетират се 5 ml от екстракта на етилацетат в конични колби, съдържащи 10 ml от първата екстракция. Сместа се хомогенизира с разклащане.

3.3.3. Разделяне на бис (2,4-динитрофенилхидразин) посредством хроматография. Процедурата продължава 2 h, следвайки екстракцията (т. 3.3.2).

Поставят се 0,2 ml от екстракта на етилацетат към стартовата линия, намираща се на 2 cm от ръба на плаката, оставя се 2 cm разстояние от двете страни на плаката. Подвижната фаза (т. 3.1.11) се поставя в хроматографската вана на дълбочина от 1 cm, като се позволява на атмосферата там да се насити с парите на разтворителя. Въвежда се плаката, като се оставя разтворителят да се придвижи към върха на плаката. Плаката се изсушава с вентилатор. Плаката трябва да се държи във вертикално положение над гланцирана хартия и с помощта на шпатула перпендикулярно на зоната на движение се изстъргват червените петна (които се характеризират с наличието на 2,4-динитрофенилхидразин). Праховидният продукт се прехвърля без загуби в конична колба, снабдена с шлифована запушалка, и се добавят 4 ml оцетна киселина (т. 3.1.12). Оставя се за 30 min, като периодично се разбърква. Филтрира се през нагъната филтърна хартия директно в кюветата на спектрофотометъра (т. 3.2.7). Полученият филтрат трябва да е напълно бистър. Измерва се абсорбцията на разтвора при 500 nm, като се използва оцетна киселина (т. 3.1.12) в сравнителната кювета за нулиране на апарата.

3.3.4. Построяване на калибрационна крива

В три мерителни колби от 100 ml се поставят съответно по 5, 10 и 15 ml разтвор на L-аскорбинова киселина (т. 3.1.13), след което се долива 1 %^-ен разтвор на мета-фосфорна киселина (т. 3.1.3) до марката. Така получените разтвори са с концентрация съответно 50, 100 и 150 mg аскорбинова киселина/l. Третират се по 50 ml от всеки от разтворите съгласно процедурите, описани в т. 3.3.1, 3.3.2 и 3.3.3. Начертава се калибрационната крива, която е права линия, преминаваща през началото на координационната система.

3.3.5. Изразяване на резултатите

Концентрацията на L-аскорбинова киселина + дехидроаскорбинова киселина във виното се изразява в милиграми на литър.

3.3.5.1. Изчисления

Стойността на абсорбцията, измерена съгласно т. 3.3.3, се намира на калибрационната крива и след това се определя концентрацията на L-аскорбинова киселина + дехидроаскорбинова киселина в анализирания разтвор.

Забележка. Ако концентрацията на L-аскорбинова киселина + дехидроаскорбинова киселина е по-голяма от 150 mg/l, обемът на пробите за анализ следва да се редуцира до 25, 20 или 10 ml вино, а полученият резултат се умножава по фактора на разреждане F.

24. Определяне на рH

1. Принцип на метода

Измерва се разликата в потенциала на двата електрода, потопени в анализираната течност. Единият от двата електрода има потенциал, който е функция от рН на течността, докато другият има фиксиран потенциал, който е известен и представлява сравнителния електрод.

2. Апаратура

2.1. рН-метър със скала, калибрирана в рН единици, позволяващ измерванията да бъдат направени с точност до ± 0,05.

2.2. Електроди:

2.2.1. Стъклен електрод, съхраняван в дестилирана вода.

2.2.2. Наситен с каломел калиево-хлориден сравнителен електрод, съхраняван в наситен разтвор на калиев хлорид.

2.2.3. Или комбиниран електрод, съхраняван в дестилирана вода.

3. Реактиви

3.1. Буферни разтвори

3.1.1. Наситен разтвор на калиев хидроген тартарат, съдържащ минимум 5,7 g/l калиев хидроген тартарат С₄Н₅КО₆ при 20°С.

Този разтвор може да бъде съхраняван до два месеца чрез добавяне на 0,1 g тимол на 200 ml.

	3,57 при 20°C
рН	3,56 при 25°C
	3,55 при 30°C

3.1.2. Разтвор на калиев хидрогенфталат, 0,05 М, съдържащ 10,211 g/l калиев хидроген фталат С₈Н₅КО₄ при 20°С.

(Максимален срок за съхранение: два месеца.)

	3,999 при 15°C
	4,003 при 20°C
рН	4,008 при 25°C
	4,015 при 30°C

3.1.3. Разтвор, съдържащ:

Монокалиев фосфат (KH₂PO₄) - 3,402 g;

Дикалиев фосфат (K₂HPO₄) - 4,354 g;

Вода - до един литър.

(Максимален срок на съхранение - 2 месеца.)

	6,90 при 15°C
	6,88 при 20°C
рН	6,86 при 25°C
	6,85 при 30°C

Забележка. Фирмени стандартни буфери също могат да се използват.

4. Начин на работа

4.1. Подготовка на пробите за анализ

4.1.1. За гроздова мъст и вино:

Работи се директно с мъст и вино.

4.1.2. За концентрирана ректифицирана мъст:

Ректифицираната и концентрирана мъст се разреждат с вода до концентрация 25% ± 0,5% (m\m) от общата захар (25° Brix).

Ако Р е процентът (m\m) общи захари в ректифицираната и концентрираната мъст, измерената маса се изчислява по формулата

2500

-------

и се довежда до 100 g с вода. Използваната вода трябва да е с проводимост под 2 микросименса на сантиметър.

4.2. Нулиране на уреда

Нулирането се извършва преди всяко измерване съгласно инструкциите към всеки уред.

4.3. Калибриране на рН-метъра

Уредът се калибрира при 20°С посредством буферен разтвор с рН 6,88 и 3,57 при 20°С.

За калибриране на рН-метъра се използват буферни разтвори с рН 4,00 при 20°С.

4.4. Определяне

Електродът се поставя в анализираната проба, където температурата е 20 - 25°С и възможно най-близо до 20°С. Стойността на рН се отчита директно от скалата. Необходимо е да бъдат осъществени най-малко по две измервания на всяка проба.

Крайният резултат се изразява като средноаритметична стойност на две измервания.

5. Изразяване на резултатите

рН на мъстта, виното или на 25%^-eн (m\m) (25°Brix) разтвор на концентрирана ректифицирана мъст се закръглява с точност до втория десетичен знак.

25. Определяне на серен диоксид

1. Определение

Свободен серен диоксид е серният диоксид, представен във виното или мъстта под следните форми - Н₂SO₃, НSO₃-, чието равновесие е функция от рН и температурата:

Н₂SO₃ <=====> Н⁺ + НSO^-₃,

Н₂SO₃ представлява молекулярният серен диоксид.

Общият серен диоксид е сума от различните форми на серния диоксид, намиращи се във виното, в свободно състояние или свързани с компонентите на виното.

2. Свободен и общ серен диоксид

2.1. Принцип на метода

2.1.1. Сравнителен метод

2.1.1.1. За вино и гроздова мъст

Серният диоксид се увлича от поток от въздух или азот. Той се улавя или окислява чрез барботиране в разтвор на водороден пероксид. Образувалата се сярна киселина се определя чрез титруване със стандартен разтвор на натриев хидроксид. Свободният серен диоксид се извлича от виното при ниска температура (10°С).

Общият серен диоксид от виното се извлича при висока температура (около 100°С).

2.1.1.2. За концентрирана ректифицирана мъст

Общият серен диоксид се извлича от предварително разредената концентрирана ректифицирана мъст при висока температура (около 100°С).

2.1.2. Бърз метод за определяне (за вино и мъст).

Свободният серен диоксид се определя чрез директно йодометрично титруване.

Свързаният серен диоксид се определя чрез йодометрично титруване след алкална хидролиза. Когато се добави към свободния серен диоксид, се получава общият серен диоксид.

2.2. Сравнителен метод

2.2.1. Апаратура

2.2.1.1. Използваният уред трябва да е в съответствие с показаната схема и в частност що се отнася до хладника.

Апаратура за определяне на серен диоксид

(дименсиите са в милиметри; вътрешните диаметри на четирите концентрични сонди, образуващи хладника, са 45, 34, 27 и 10 mm)

Сондата за отвеждане на газ в барботьора В завършва с малка сфера с диаметър 1 cm и с 20 отвора 0,2 mm около големия хоризонтален кръг. Като алтернатива на сондата може да се използва шотова плака, която да дава възможност за голям брой много малки мехурчета и по този начин да осигурява добър контакт между течността и газовата фаза.

Дебитът на газа трябва да бъде около 40 l/h. Смукателното шише от дясно на фигурата е предназначено да ограничава налягането, което се образува от водна помпа до 20 - 30 cm воден стълб. С цел регулиране на вакуума до необходимата величина се инсталира дебитомер с капилярна тръба между барботьора и смукателното шише.

2.2.1.2. Микробюрета

2.2.2. Реактиви

2.2.2.1. 85%^-на фосфорна киселина (Н₃РО₄, r_20°C = 1,71 g/ml).

2.2.2.2. Разтвор на водороден пероксид (Н₂О₂) - 9,1g/l -(три обема).

2.2.2.3. Индикаторен реактив:

- метил червено - 100 mg;

- метиленово синьо - 50 mg;

- спирт, 50 об. % - 100 ml.

2.2.2.4. 0,01 М разтвор на натриев хидроксид (NaOH).

2.2.3. Начин на работа

2.2.3.1. Определяне на свободния серен диоксид

Виното се съхранява в пълна и затворена бутилка при 20°С в продължение на два дни преди измерването.

• В барботьора В се поставят 2 до 3 ml от разтвора на водородния пероксид (т. 2.2.2.2). Две капки от индикатора се поставят в барботьора В и разтворът на водородния пероксид се неутрализира с 0,01 М разтвор на натриев хидроксид (т. 2.2.2.4). Барботьорът се свързва с апаратурата.

• В колбата А с обем от 250 ml се поставят 50 ml от пробата и 15 ml фосфорна киселина (т. 2.2.2.1). Колбата се свързва с апарата.

Мехурчета въздух (или азот) се пропускат в апарата за 15 min. Увлеченият серен диоксид се окислява до сярна киселина. Барботьор В се отстранява от уреда и образуваната киселина се титрува с 0,01 М разтвор на натриев хидроксид (т. 2.2.2.4) - n, ml.

2.2.3.2. Изразяване на резултатите

Свободният серен диоксид се изразява в милиграми на литър. Закръглява се до най-близкото цяло число.

2.2.3.2.1. Изчисления

Свободният серен диоксид в милиграми на литър е: 6,4.n.

2.2.3.3. Определяне на общия серен диоксид

2.2.3.3.1.За концентрирана ректифицирана мъст се използва проба, получена чрез разреждане на пробата за анализ до 40 %^-eн (m/v) разтвор, както е указано в метод "13. Определяне на обща киселинност", т. 5.1.2. В облодънна колба А с обем 250 ml се прехвърлят 50 ml от този разтвор, както и 5 ml фосфорна киселина (т. 2.2.2.1). Колбата се свързва с апаратурата.

2.2.3.3.2. Вино и мъст

Ако предполагаемата концентрация в пробата е по-малка или равна на 50 mg/l общ серен диоксид, в колба А се поставят 50 ml от пробата и 15 ml от фосфорната киселина (т. 2.2.2.1). Свързва се колбата с апаратурата.

2.2.3.3.3. Ако предполагаемата концентрация в пробата е по-голяма или равна на 50 mg/l от общия серен диоксид, в колба А с обем 100 ml се поставят 20 ml от пробата и 5 ml от фосфорната киселина (т. 2.2.2.1) и колбата се свързва с апаратурата.

В барботьора В се поставят 2-3 ml от разтвора на водороден пероксид (т. 2.2.2.2), неутрализира се, както е описано. Виното се налива в колба А и се загрява до кипене, като се използва малък пламък с височина 4 - 5 cm, който директно да докосва дъното на колбата. Тя не се поставя върху метална плочка, а върху диск с отвор, чийто диаметър е приблизително 30 mm. Това се прави, за да се избегне прегряване на екстрактните вещества във виното, които се отлагат по стените на колбата.

Кипенето се поддържа, докато се подава въздушна (или азотна) струя. Цялото количество серен диоксид се извлича и окислява за около 15 min. Образуваната сярна киселина се определя чрез титруване с 0,01 М разтвор на натриев хидроксид (т. 2.2.2.4.) - n ml.

2.2.3.4. Изразяване на резултатите.

Общото количество серен диоксид се измерва в милиграми на литър и в милиграми на килограм от общите захари. Закръглява се до цяло число.

2.2.3.4.1. Изчисления

• За вина и мъст

Общият серен диоксид, в милиграми на литър:

- проби с ниско съдържание на серен диоксид (тестова проба от 50 ml) е 6,4.n;

- други проби (тестова проба от 20 ml) - 16.n.

• За концентрирана ректифицирана мъст

Количеството на серен диоксид се изразява в милиграми общи захари (подготвена проба от 50 ml) (т. 2.2.3.3.1) и се изчислява по формулата

1600 n
------- ,	където
P

Р е процентът (m/m) от общото количество захари.

2.2.3.4.2. Повторяемост (r)

• съдържание < 50 mg/l (проба 50 ml), r = 1 mg/l;

• съдържание > 50 mg/l (проба 20 ml), r = 6 mg/l.

2.2.3.4.3. Възпроизводимост (R)

• съдържание < 50 mg/l (проба 50 ml), R = 9 mg/l;

• съдържание > 50 mg/l (проба 20 ml), R = 15 mg/l.

2.3. Бърз метод за определяне.

2.3.1. Реактиви

2.3.1.1. Етилендиаминтетраоцетна киселина (EDTA) (Complexon III): динатриева сол на EDTA (C₁₀H₁₄N₂Na₂O₈ 2H₂O).

2.3.1.2. Разтвор на натриев хидроксид (NaOH) - 4 M 160 g/l.

2.3.1.3. Разтвор (1:10 v/v) на сярна киселина (H₂SO₄, r_20°C = 1,84 g/ml).

2.3.1.4. Разтвор на нишесте - 5 g/l:

5 g нишесте се смесва с около 500 ml вода. Довежда се до кипене, като непрекъснато се разбърква и се поддържа кипенето в продължение на 10 min. Добавя се 200 g натриев хлорид (NaCl). След охлаждане разтворът се допълва до един литър.

2.3.1.5. 0,025 М йоден разтвор, (I₂).

2.3.2. Апаратура

2.3.2.1. Йодни колби 500 ml.

2.3.2.2. Бюрета.

2.3.2.3. Пипети от 1, 2, 5 и 50 ml.

2.3.3. Начин на работа

2.3.3.1. Свободен серен диоксид.

В йодни колби от 500 ml ce поставят:

- 50 ml вино;

- 5 ml разтвор на нишесте (т. 2.3.1.4);

- 30 mg EDTA (т. 2.3.1.1);

- 3 ml H₂SO₄ с концентрация 1:10 (v/v) (т. 2.3.1.3).

Титрува се веднага с 0,025 М йод (т. 2.3.1.5), докато сместа запази ясен син цвят за 10 - 15 s - n (ml изразходван йод).

2.3.3.2. Определяне на свързан серен диоксид

Добавя се 8 ml разтвор 4 М на натриев хидроксид (т. 2.3.1.2), сместа се разклаща веднъж и се оставя да престои 5 min. Бързо се добавя предварително налят в мерителен цилиндър или бехерова чаша 10 ml разтвор на сярна киселина с концентрация 1:10 (v/v) (т. 2.3.1.3) и при енергично разбъркване веднага се титрува с 0,025 М йод (т. 2.3.1.5) - n' (ml изразходван йод). Добавят се 20 ml 4М-ен разтвор на натриев хидроксид (т. 2.3.1.2), разклаща се веднъж и се оставя да престои 5 min. Разрежда се с 200 ml ледено студена вода, доколкото е възможно. Бързо се добавят, предварително наляти в мерителен цилиндър или бехерова чаша 30 ml разтвор на сярна киселина с концентрация 1:10 (v/v) (т. 2.3.1.3). При енергично разбъркване веднага се титрува с 0,025 М йод (т. 2.3.1.5) - n" (ml изразходван йод).

2.3.4. Изразяване на резултатите.

2.3.4.1. Изчисление.

- Свободният серен диоксид в mg/l, е 32n.

- Общото количество серен диоксид в mg/l е 32(n + n' + n").

Забележки:

1. За червени вина с ниска концентрация на SO₂ е подходящо да се използва йоден разтвор с по-ниска концентрация от 0,025 М (например 0,01 М; в този случай трябва да се замести коефициентът 32 от формулата - с 12,8).

2. Полезно е червените вина да се осветяват отдолу с лъч жълта светлина или от обикновена електрическа крушка, чийто лъч минава през разтвор на калиев хромат, или от натриева лампа. Наблюдението трябва да се извърши в тъмна стая, като се следи прозрачността на виното - при достигане на крайната точка то помътнява.

3. Ако количеството на серния диоксид е близо до или надвишава допустимите граници, общото количество серен диоксид трябва да се установи по сравнителния метод.

4. Ако е особено необходимо да се измери само свободният серен диоксид, анализът трябва да се извърши с проба, която е съхранявана при анаеробни условия при температура 20°С в продължение на два дни преди анализа. Измерването също трябва да се проведе при температура 20°С.

5. Поради това, че някои вещества се окисляват от йода в кисела среда, за по-прецизни измервания трябва отделно да се изчислява количеството на използвания йод. За тази цел свободният серен диоксид трябва да се свърже с излишък от етанал или пропанал, преди да се извърши йодното титруване. Поставят се 50 ml вино в йодна колба от 300 ml, добавят се 5 ml разтвор на етанал (C₂H₄O, в концентрация 7 g/l) или 5 ml разтвор на пропанал (C₃H₆O), с концентрация 10 g/l.

Колбата се запушва и се оставя да престои 30 min. Добавят се 3 ml сярна киселина 1:10 v/v (т. 2.3.1.3.) и 0,025 М йоден разтвор (т. 2.3.1.5.) в количество, достатъчно да причини промяна в цвета на нишестето - n''' (ml използван йод). Той се изважда от n (свободния серен диоксид) и от n+n'+n" (общото количество серен диоксид).

По принцип n''' е малък - 0,2 до 0,3 ml 0,025 М йоден разтвор. Ако към виното е добавена аскорбинова киселина, n''' ще има по-висока стойност и тогава е възможно количеството на това вещество да се измери поне приблизително, от стойността на n''', като се има предвид, че един милилитър от 0,025 М йоден разтвор окислява 4,4 mg аскорбинова киселина. С изчисляване на n''' твърде лесно може да се установи наличието на остатъчна аскорбинова киселина в количества над 20 mg/l във вината, към които тя е била добавена.

3. Молекулен серен диоксид

3.1. Принцип на метода

Процентното съдържание на молекулен серен диоксид (H₂SO₃) в свободния серен диоксид се изчислява като функция на pH, алкохолното съдържание и температурата.

За дадена температура и алкохолно съдържание:

Н₂SO₃ <=====> Н⁺ + НSO^-₃,

L = [H₂SO₃] + [НSO₃^-], където

- I е йонната сила;

- А и В - са коефициенти, вариращи с промяна на температурата и алкохолното съдържание;

- К_T е константа на термодинамична дисоциация: стойностите на рk_T са дадени в табл. 1 за различно алкохолно съдържание и температури;

- K_м - е константа на смесена дисоциация; в таблица 2 са дадени стойностите на рK_м за различни температури и алкохолно съдържание при средна стойност на йонната сила I = 0,038.

Съдържанието на молекулен серен диоксид, изчислено по формулата, е дадено в таблица 3 за различни стойности на рН, температура и алкохолно съдържание.

3.2. Изчисление.

При известни стойности на рН на виното и неговото алкохолно съдържание процентното съдържание Х% на молекулен серен диоксид е дадено в таблица 3 за температура t °С.

Съдържанието на молекулен серен диоксид в mg/l е Х x С, където С е съдържание на свободен серен диоксид в mg/l.

Таблица № 1

Стойности на термодинамичната константа рk_T

Алкохол в об.%

Температура, в °С

	20	25	30	35	40
0	1,798	2,000	2,219	2,334	2,493
5	1,897	2,098	2,299	2,397	2,527
10	1,997	2,198	2,394	2,488	2,606
15	2,099	2,301	2,503	2,607	2,728
20	2,203	2,406	2,628	2,754	2,895

Таблица № 2

Стойности на термодинамичната константа ркм (I = 0,038)

Алкохол в об.%

Температура, в °С

	20	25	30	35	40
0	1,723	1,925	2,143	2,257	2,416
5	1,819	2,020	2,220	2,317	2,446
10	1,916	2,116	2,311	2,405	2,522
15	2,014	2,216	2,417	2,520	2,640
20	2,114	2,317	2,538	2,663	2,803

Таблица № 3

Процент на молекулярен серен диоксид от свободния серен диоксид (I = 0, 038)

pH	T = 20°C
	алкохол, в об.%

	0	5	10	15	20
2,8	7,73	9,46	11,55	14,07	17,09
2,9	6,24	7,66	9,40	11,51	14,07
3,0	5,02	6,18	7,61	9,36	11,51
3,1	4,03	4,98	6,14	7,58	9,36
3,2	3,22	3,99	4,94	6,12	7,58
3,3	2,58	3,20	3,98	4,92	6,12
3,4	2,06	2,56	3,18	3,95	4,92
3,5	1,64	2,04	2,54	3,16	3,95
3,6	1,31	1,63	2,03	2,53	3,16
3,7	1,04	1,30	1,62	2,02	2,53
3,8	0,83	1,03	1,29	1,61	2,02

T = 25°С

2,8	11,47	14,23	17,15	20,67	24,75
2,9	9,58	11,65	14,12	17,15	22,71
3,0	7,76	9,48	11,55	14,12	17,18
3,1	6,27	7,68	9,40	11,55	14,15
3,2	5,04	6,20	7,61	9,40	11,58
3,3	4,05	4,99	6,14	7,61	9,42
3,4	3,24	4,00	4,94	6,14	7,63
3,5	2,60	3,20	3,97	4,94	6,16
3,6	2,07	2,56	3,18	3,97	4,55
3,7	1,65	2,05	2,54	3,18	3,98
3,8	1,32	1,63	2,03	2,54	3,18

T = 30°C

2,8	18,05	20,83	24,49	29,28	35,36
2,9	14,89	17,28	20,48	24,75	30,29
3,0	12,20	14,23	16,98	20,71	25,66
3,1	9,94	11,65	13,98	17,18	21,52
3,2	8,06	9,48	11,44	14,15	17,88
3,3	6,51	7,68	9,30	11,58	14,75
3,4	5,24	6,20	7,53	9,42	12,08
3,5	4,21	4,99	6,08	7,63	9,84
3,6	3,37	4,00	4,89	6,16	7,98
3,7	2,69	3,21	3,92	4,95	6,44
3,8	2,16	2,56	3,14	3,98	5,19

T = 35°C

2,8	22,27	24,75	28,71	34,42	42,18
2,9	18,53	20,71	24,24	29,42	36,69
3,0	15,31	17,18	20,26	24,88	31,52
3,1	12,55	14,15	16,79	20,83	26,77
3,2	10,24	11,58	13,82	17,28	22,51
3,3	8,31	9,42	11,30	14,23	18,74
3,4	6,71	7,63	9,19	11,65	15,49
3,5	5,44	6,16	7,44	9,48	12,71
3,6	4,34	4,95	6,00	7,68	10,36
3,7	3,48	3,98	4,88	6,20	8,41
3,8	2,78	3,18	3,87	4,99	6,80

T = 40°C

2,8	29,23	30,68	34,52	40,89	50,14
2,9	24,70	26,01	29,52	35,47	44,74
3,0	20,67	21,83	24,96	30,39	38,85
3,1	17,15	18,16	20,90	25,75	33,54
3,2	14,12	14,98	17,35	21,60	28,62
3,3	11,55	12,28	14,29	17,96	24,15
3,4	9,40	10,00	11,70	14,81	20,19
3,5	7,61	8,11	9,52	12,13	16,73
3,6	6,14	6,56	7,71	9,88	13,77
3,7	4,94	5,28	6,22	8,01	11,25
3,8	3,97	4,24	5,01	6, 47	9, 15

26. Определяне на натрий

1. Принцип на методите

1.1. Сравнителен метод - атомноабсорбционна спектрофотометрия.

Натрият във виното се измерва директно с атомноабсорбционна спектрофотометрия след добавяне на специален буфер от цезиев хлорид за подтискане йонизацията на натрия.

1.2. Обикновен метод - пламъкова фотометрия.

Натрият се измерва директно в разредено вино поне 1:10 чрез пламъкова фотометрия.

2. Сравнителен метод

2.1. Реактиви

2.1.1. Разтвор, съдържащ един грам натрий на литър:

Използва се стандартен търговски разтвор, съдържащ един грам натрий на литър. Такъв разтвор може да се приготви чрез разтваряне на 2,542 g безводен натриев хлорид (NaCl) в дестилирана вода и допълване на обема до един литър.

Този разтвор се съхранява в полиетиленова бутилка.

2.1.2. Моделен разтвор:

Лимонена киселина (C₆H₈O₇.Н₂О) - 3,5 g;

Захароза (C₁₂H₂₂O₁₁) - 1,5 g;

Глицерин (C₃H₈O₃) - 5,0 g;

Безводен калциев хлорид (CaCl₂) - 50 mg;

Безводен магнезиев хлорид (MgCl₂) - 50 g;

100 %-ов алкохол (C₂H₅OН) - 50 ml;

Дейонизирана вода - до 500 ml.

2.1.3. Разтвор на цезиев хлорид, съдържащ 5% цезий:

Разтварят се 6,330 g цезиев хлорид (CsCl) в 100 ml дестилирана вода.

2.2. Апаратура

2.2.1. Атомноабсорбционен спектрофотометър, снабден с горелка за пламък въздух - ацетилен.

2.2.2. Лампа с кух катод за определяне на натрий.

2.3. Начин на работа

2.3.1. Приготвяне на пробата

В мерителна колба от 50 ml се отмерват с пипета 2,5 ml от виното, добавя се един милилитър от разтвора на цезиев хлорид (т. 2.1.3.) и се допълва до марката с дестилирана вода.

2.3.2. Калибриране

Поставят се по 5,0 ml от моделния разтвор в набор мерителни колби с обем 100 ml и се добавят съответно по 0, 2,5, 5,0, 7,5 и 10 ml от разтвор на натрий с концентрация един грам на литър (т. 2.1.1.), предварително разреден в съотношение 1:100. Към всяка колба се добавя по 2 ml от разтвора на цезиев хлорид (т. 2.1.3.) и колбите се допълват до 100 ml с дестилирана вода.

Така приготвените стандартни разтвори съдържат съответно по 0, 0,25, 0,50, 0,75 и 1,00 милиграма натрий на литър и по един грам цезий на литър. Разтворите се съхраняват в полиетиленови съдове.

2.3.3. Измерване

Дължината на вълната се настройва на 589,0 nm. Абсорбционната скала се нулира, като се използва моделен разтвор, съдържащ един грам цезий на литър (т. 2.3.2.). Разреденото вино директно се впръсква в горелката на спектрофотометъра, след което последователно се впръскват стандартните разтвори (т. 2.3.2.). Отчитат се показанията за абсорбция. Всяко измерване се повтаря.

2.4. Изразяване на резултатите.

2.4.1. Метод на изчисление.

Графиката на абсорбцията се построява като функция от концентрацията на натрия в стандартните разтвори. Върху графиката се отбелязва получената абсорбция на разреденото вино и се определя концентрацията на натрий С в него, в милиграми на литър. Тогава концентрацията на натрий във виното, в mg/l, ще бъде равна на 20 С. Закръглява се до най-близкото цяло число.

2.4.2. Повторяемост (r)

r = 1 + 0,024x_i, mg/l,

където x_i - е концентрацията на натрий в пробата, в mg/l.

2.4.3. Възпроизводимост (R)

R = 2,5 + 0,05x_i, mg/l,

където x_i - е концентрацията на натрий в пробата, в mg/l.

3. Обикновен метод

3.1. Реактиви

3.1.1. Еталонен разтвор, съдържащ 20 mg натрий на литър:

100 %-ов алкохол (C₂H₅OH) - 10 ml;

Лимонена киселина (C₆H₈O₇.H₂O) - 700 mg;

Захароза (C₁₂H₂₂O₁₁) - 300 mg;

Глицерин (C₃H₈O₃) - 1000 mg;

Кисел калиев тартарат (C₄H₅KO₆) - 481,3 mg;

Безводен калциев хлорид (CaCl₂) - 10 mg;

Безводен магнезиев хлорид (MgCl₂) - 10 mg;

Сух натриев хлорид (NaCl) - 50,84 mg;

Вода - до един литър.

3.1.2. Разтвор за разреждане

100%-ов алкохол (C₂H₅OH) - 10 ml;

Лимонена киселина (C₆H₈O₇.H₂O) - 700 mg;

Захароза (C₁₂H₂₂O₁₁) - 300 mg;

Глицерин (C₃H₈O₃) - 1000 mg;

Кисел калиев тартарат (C₄H₅KO₆) - 481,3 mg;

Безводен калциев хлорид (CaCl₂) - 10 mg;

Безводен магнезиев хлорид (MgCl₂) - 10 mg;

Вода - до един литър.

За да се приготви разтворът от точки 3.1.1. и 3.1.2., киселият калиев тартарат се разтваря в приблизително 500 ml много гореща дестилирана вода. Този разтвор се смесва с 400 ml дестилирана вода, в която предварително са разтворени другите вещества, и се допълва до един литър.

Разтворите се съхраняват в полиетиленови съдове, като в тях се добавят по две капки алил изотиоцианат.

3.2. Апаратура

3.2.1. Пламъков фотометър, захранван с въздушно бутанова смес.

3.3 Начин на работа

3.3.1. Калибриране

В мерителни колби от 100 ml се поставят по 5, 10, 15, 20 и 25 ml от еталонния разтвор (т. 3.1.1) и се допълват до 100 ml с разреждащия разтвор (т. 3.1.2). По този начин се получават разтвори, съдържащи съответно по 1, 2, 3, 4 и 5 mg натрий на литър.

3.3.2 Измерване

Измерванията се извършват при 589,0 nm. С дестилирана вода уредът се настройва до 100% пропускливост. Директно в горелката на фотометъра последователно се впръскват стандартните разтвори (т. 3.3.1), след това се впръсква виното, разредено с дестилирана вода в съотношение 1:10, и се отчитат показанията на уреда за процент на пропускливост. Ако е необходимо, разреденото 1:10 вино може да се разреди допълнително с разреждащия разтвор (т. 3.1.2.).

3.4. Изразяване на резултатите

3.4.1 Метод на изчисление

Построява се графика за промените в процент на пропускливост в зависимост от концентрацията на натрий в стандартните разтвори. Върху тази графика се отбелязва пропускливостта, получена за пробата разредено вино, и се определя съответната концентрация на натрий С.

Концентрацията на натрий в милиграми на литър е С x F, където F е факторът на разреждане.

3.4.2 Повторяемост (r)

(С изключение на ликьорните вина)	r = 1,4 mg/l.
За ликьорни вина	r = 2,0 mg/l.

3.4.3 Възпроизводимост (R)

R = 4,7 + 0,08x_i, mg/l, където x_i е съдържанието на натрий в пробата, в mg/l.

27. Определяне на калий

1. Принцип на методите

1.1. Сравнителен метод

Калият се измерва директно в разредено вино с атомноабсорбционна спектрофтометрия след добавяне на специален буфер, цезиев хлорид, подтискащ йонизацията, за да се предотврати йонизирането на калия.

1.2. Обикновен метод.

Наличието на калий се установява директно в разреденото вино чрез пламъкова фотометрия.

2. Сравнителен метод

2.1. Реактиви

2.1.1. Разтвор, съдържащ един грам калий на литър:

Използва се стандартен търговски разтвор, съдържащ един грам калий на литър. Такъв разтвор може да се приготви чрез разтваряне на 4,813 g кисел калиев тартарат (C₄H₅KO₆) в дестилирана вода и допълване на обема до един литър.

2.1.2. Моделен разтвор:

Лимонена киселина (C₆H₈O₇Н₂О) - 3,5 g;

Захароза (C₁₂H₂₂O₁₁) - 1,5 g;

Глицерин (C₃H₈O₃) - 5,0 g;

Безводен калциев хлорид (CaCl₂) - 50 mg;

Безводен магнезиев хлорид (MgCl₂) - 50 mg;

100%-ов алкохол (C₂H₅OН) - 50 ml;

Дестилирана вода - до 500 ml.

2.1.3. Разтвор на цезиев хлорид, съдържащ 5% цезий:

Разтварят се 6,33 g цезиев хлорид (CsCl) в 100 ml дестилирана вода.

2.2 Апаратура

2.2.1 Атомноабсорбционен спектрофотометър, снабден с горелка за пламък въздух - ацетилен.

2.2.2 Лампа с кух катод за определяне на калий.

2.3 Начин на работа

2.3.1 Приготвяне на пробата

В мерителна колба от 50 ml се отмерват 2,5 ml от виното, предварително разредено в съотношение 1:10, и се добавя един милилитър от разтвора на цезиев хлорид (т. 2.1.3.). Допълва се до марката с дестилирана вода.

2.3.2 Калибриране

В комплект мерителни колби с обем 100 ml се поставят по 5,0 ml от моделния разтвор (т. 2.1.2.) и се добавят съответно по 0, 2,0, 4,0, 6,0 и 8,0 ml от калиевия разтвор един g/l (т. 2.1.1.), предварително разреден в съотношение 1:100. Към всяка колба се добавя по 2 ml от разтвора на цезиев хлорид (т. 2.1.3.) и с дестилирана вода колбите се допълват до 100 ml. Така приготвените стандартни разтвори съдържат съответно по 0, 2, 4, 6 и 8 милиграма калий на литър и по един грам цезий на литър. Разтворите се съхраняват в полиетиленови бутилки.

2.3.3 Измерване

Дължината на вълната се настройва на 769,9 nm. Абсорбционната скала се нулира, като се използва моделен разтвор, съдържащ един грам цезий на литър (т. 2.3.2.). Директно в горелката на спектрофотометъра се впръсква разреденото вино (т. 2.3.1.), след което последователно се впръскват стандартните разтвори (т. 2.3.2.). Отчитат се показанията за абсорбция. Всяко измерване се повтаря.

2.4 Изразяване на резултатите.

2.4.1. Метод на изчисление

Построява се графиката на промените в абсорбцията като функция от концентрацията на калий в стандартните разтвори. Върху графиката се записва средната стойност на абсорбцията, получена за пробата разредено вино, и се определя концентрацията на калий С в него, в милиграми на литър. Тогава концентрацията на калий във виното в милиграми на литър е F x С, където F е факторът на разреждане (в случая 200). Закръглява се до най-близкото цяло число.

2.4.2. Повторяемост (r):

r = 35 mg/l.

2.4.3. Възпроизводимост (R):

R = 66 mg/l.

2.4.4. Други начини за изразяване на резултатите:

- в милиеквиваленти на литър - 0,0256 x F x C.

- в милиграми на литър кисел калиев тартарат - 4,813 x F x C.

3. Обикновен метод - атомна абсорбция

3.1. Реактиви:

3.1.1. Сравнителен разтвор, съдържащ 100 mg калий на литър:

100%-ов алкохол (C₂H₅OH) - 10 ml;

Лимонена киселина (C₆H₈O₇.H₂O) - 700 mg;

Захароза (C₁₂H₂₂O₁₁) - 300 mg;

Глицерин (C₃H₈O₃) - 1000 mg;

Натриев хлорид (NaCl) - 50,8 mg;

Безводен калциев хлорид (CaCl₂) - 10 mg;

Безводен магнезиев хлорид (MgCl₂) - 10 mg;

Кисел калиев тартарат (C₄H₅KO₆) - 481,3 mg;

Дестилирана вода - до 1000 ml.

Киселият калиев тартарат се разтваря в около 500 ml много гореща дестилирана вода, този разтвор се смесва с 400 ml дестилирана вода, в която предварително са разтворени другите вещества, и се допълва до един литър.

3.1.2. Разтвор за разреждане

100 %-ов алкохол (C₂H₅OH) - 10 ml;

Лимонена киселина (C₆H₈O₇.H₂O) - 700 mg;

Захароза (C₁₂H₂₂O₁₁) - 300 mg;

Глицерин (C₃H₈O₃) - 1000 mg;

Натриев хлорид (NaCl) - 50,8 mg;

Безводен калциев хлорид (CaCl₂) - 10 mg;

Безводен магнезиев хлорид (MgCl₂) - 10 mg;

Винена киселина (C₄H₆O₆) - 383 mg;

Дестилирана вода - до 1000 ml.

Разтворите се съхраняват в полиетиленови бутилки, като към тях се добавят по две капки алилизотиоцианат.

3.2 Апаратура

3.2.1. Пламъков фотометър, захранван с въздушно бутанова смес.

3.3. Начин на работа

3.3.1. Калибриране

В мерителни колби с обем 100 ml се поставят съответно по 25, 50, 75 и 100 ml от еталонния разтвор (т. 3.1.1.) и се допълват до 100 ml с разреждащия разтвор (т. 3.1.2.). По този начин се получават разтвори, съдържащи съответно по 25, 50, 75 и 100 милиграма калий на литър.

3.3.2. Измерване

Измерванията се правят при 766 nm. С дестилирана вода уредът се настройва до 100% пропускливост. Последователно се впръскват стандартните разтвори (т. 3.3.1.) директно в горелката на фотометъра, след това се впръсква виното, разредено с дестилирана вода в съотношение 1:10, и се отчитат показанията на уреда. Разреденото 1:10 вино може да се разреди допълнително с разреждащия разтвор (т. 3.1.2.).

3.4. Изразяване на резултатите

3.4.1. Метод на изчисление

Построява се графиката за изменението на процента на пропускливост като функция от концентрацията на калий в стандартните разтвори. Върху тази графика се отчита пропускливостта, получена за пробата разредено вино, и се определя съответната концентрация на калий С.

Концентрацията на калий в милиграми на литър ще бъде C x F, където F е факторът на разреждане. Закръглява се до най-близкото цяло число.

3.4.2. Повторяемост (r):

r = 17 mg/l.

3.4.3. Възпроизводимост (R):

R = 66 mg/l.

3.4.4. Други начини за изразяване на резултатите.

- в милиеквиваленти на литър - 0,0256 x F x C;

- в милиграми кисел калиев тартарат на литър - 4,813 x F x C.

28. Определяне на магнезий

1. Принцип на метода

Магнезият се определя директно във виното след подходящо разреждане, чрез атомноабсорбционна спектрофотометрия.

2. Реактиви

2.1. Концентриран стандартен разтвор, съдържащ един грам магнезий на литър:

Използва се стандартен търговски магнезиев разтвор един грам на литър (1 g/l). Такъв разтвор може да се приготви чрез разтваряне на 8,3646 g магнезиев хлорид (MgCl₂.6H₂O) в дестилирана вода и допълване на обема до един литър.

2.2. Разреден стандартен разтвор, съдържащ 5 mg магнезий на литър.

Забележка. Стандартните магнезиеви разтвори се съхраняват в полиетиленови съдове.

3. Апаратура

3.1. Атомноабсорбционен спектрофотометър с горелка за пламък въздух - ацетилен.

3.2. Лампа с кух катод за определяне на магнезий.

4. Начин на работа

4.1. Приготвяне на пробата

Виното се разрежда с бидестилирана вода в съотношение 1:100.

4.2. Калибриране

В комплект мерителни колби с обем 100 ml се сипват съответно по 5, 10, 15 и 20 ml от разредения стандартен магнезиев разтвор (т. 2.2.) и колбите се допълват до 100 ml с дестилирана вода. Така приготвените стандартни разтвори съдържат съответно 0,25, 0,50, 0,75 и 1,0 mg магнезий на литър. Тези разтвори се съхраняват в полиетиленови съдове.

4.3. Измерване

Дължината на вълната се настройва на 285 nm. Абсорбционната скала се нулира, като се използва дестилирана вода. Разреденото вино директно се впръсква в горелката на спектрофотометъра, след което последователно се впръскват стандартните разтвори (т. 4.2.). Отчитат се показанията за абсорбция. Всяко измерване се повтаря.

5. Изразяване на резултатите

5.1. Метод на изчисление

Графиката за промените на абсорбцията се построява като функция от концентрацията на магнезий в стандартните разтвори. Върху графиката се отчита средната стойност на абсорбцията, получена за пробата разредено вино, и се определя концентрацията на магнезий С в него в mg/l. В такъв случай концентрацията на магнезий във виното е 100 C, mg/l. Закръглява се до най-близкото цяло число.

5.2. Повторяемост (r):

r = 3 mg/l.

5.3. Възпроизводимост (R):

R = 8 mg/l.

29. Определяне на калций

1. Принцип на метода

Калцият се определя директно във виното след подходящо разреждане чрез атомноабсорбционна спектрофотометрия и добавяне на буфер.

2. Реактиви

2.1. Стандартен разтвор, съдържащ един грам калций на литър:

Използва се стандартен търговски калциев разтвор от един грам на литър. Такъв разтвор може да се приготви чрез разтваряне на 2,5 g калциев карбонат (CaCO₃) в HCl 1:10 (v/v), в количество, достатъчно да го разтвори напълно. Разтворът се допълва с дестилирана вода до един литър.

2.2. Разреден стандартен разтвор, съдържащ 50 mg калций на литър.

Забележка. Стандартните калциеви разтвори се съхраняват в полиетиленови съдове.

2.3. Разтвор на лантанов хлорид, съдържащ 50 g лантан на литър.

Разтварят се 13,369 g лантанов хлорид (LaCl₃.7H₂O) в дестилирана вода; добавя се един милилитър солна киселина (HCl), разредена в съотношение 1:10 (v/v) и се допълва до 100 ml.

3. Апаратура

3.1. Атомноабсорбционен спектрофотометър с горелка за пламък въздух - ацетилен.

3.2. Лампа с кух катод за определяне на калций.

4. Начин на работа

4.1. Приготвяне на пробата

В мерителна колба с обем 20 ml се поставят един ml от виното и два ml от разтвора на лантановия хлорид (т. 2.3.). Колбата се допълва до марката с дестилирана вода. Виното, разредено в съотношение 1:20, съдържа 5 g лантан на литър.

Забележка. За сладки вина концентрация 5 g лантан на литър е достатъчна, при условие че разреждането не е намалило съдържанието на захар под границата от 2,5 g/l. При вина с по-висока концентрация на захар концентрацията на лантан се увеличава до 10 g/l.

4.2. Калибриране.

В набор мерителни колби с обем 100 ml се поставят съответно по 0, 5, 10, 15 и 20 ml от разредения стандартен калциев разтвор (т. 2.2.). Във всяка колба се добавя по 10 ml разтвор на лантанов хлорид (т. 2.3.) и с дестилирана вода се допълват до 100 ml. Така приготвените разтвори съдържат съответно 0, 2,5, 5,0, 7,5 и 10 mg калций на литър и по 5 g лантан на литър. Тези разтвори се съхраняват в полиетиленови съдове.

4.3. Измерване.

Дължината на вълната се настройва на 422,7 nm. Абсорбционната скала се нулира, като се използва разтвор, съдържащ 5 g лантан на литър(т. 4.2.). Разреденото вино директно се впръсква в горелката на спектрофотометъра, след което последователно се впръскват петте стандартни разтвора от т. 4.2. Отчитат се показанията за абсорбция. Всяко измерване се повтаря.

5. Изразяване на резултатите

5.1. Метод на изчисление.

Графиката за промените на абсорбцията се построява като функция от концентрацията на калций в стандартните разтвори. Върху графиката се отчита средната стойност на абсорбцията, получена за пробата разредено вино, и се определя концентрацията на калций С в него. Тогава концентрацията на калций във виното е 20 C, mg/l. Закръглява се до най-близкото цяло число.

5.2. Повторяемост (r):

Концентрация < 60 mg/l:	r = 2,7 mg/l.
Концентрация > 60 mg/l:	r = 4 mg/l.

5.3. Възпроизводимост (R):

R = 0,114x_i - 0,5, където

x_i - е концентрация в пробата, в mg/l.

30. Определяне на желязо

1. Принцип на методите

Сравнителен метод

След разреждане на виното в подходящо съотношение и отстраняване на алкохола желязото се измерва директно чрез атомноабсорбционна спектрофотометрия.

Обикновен метод

След минерализиране на виното с 30% разтвор на водороден пероксид желязото, което се намира под форма на тривалентно Fe (III), преминава в двувалентно Fe (II) и се определя по оцветяването, получено при взаимодействието му с ортофенантролин.

2.Сравнителен метод

2.1. Реактиви

2.1.1. Концентриран стандартен разтвор на желязо, съдържащ един грам Fe (III) на литър.

Използва се стандартен търговски разтвор - един грам на литър. Такъв разтвор може да се приготви чрез разтваряне на 8,6341 g фероамониев сулфат [FeNH₄(SO₄)₂.12H₂O] в бидестилирана вода, леко подкислена с 1М солна киселина. Обемът се допълва до един литър.

2.1.2. Разреден стандартен разтвор на желязо с концентрация 100 mg/l.

2.2. Апаратура

2.2.1. Ротационен изпарител във водна баня с термостатичен контрол.

2.2.2. Атомноабсорбционен спектрофотометър с горелка за пламък въздух - ацетилен.

2.2.3. Лампа с кух катод за определяне на желязо.

2.3. Начин на работа

2.3.1. Подготовка на пробата

Алкохолът в пробата се отстранява с ротационен изпарител (50 - 60°С) с намаляване на обема на пробата до половината от първоначалния ѝ обем. Пробата се допълва до първоначалния обем с бидестилирана вода. Пробата се разрежда преди измерването.

2.3.2 Калибриране

В набор мерителни колби с обем 100 ml се поставят съответно по 1, 2, 3, 4 и 5 ml от разтвора, съдържащ 100 mg желязо на литър (т. 2.1.2.), и колбите се допълват до 100 ml с дестилирана вода. Така приготвените разтвори съдържат съответно по 1, 2, 3, 4 и 5 mg желязо на литър. Тези разтвори се съхраняват в полиетиленови съдове.

2.3.3. Измерване

Дължината на вълната се настройва на 248,3 nm. Абсорбционната скала се нулира, като се използва дестилирана вода. Разредената проба директно се впръсква в горелката на спектрофотометъра, след което последователно се впръскват петте стандартни разтвора (т. 2.3.2.). Отчитат се показанията за абсорбция. Всяко измерване се повтаря.

2.4. Изразяване на резултатите

2.4.1. Метод на изчисление

Графиката за промените на абсорбцията се построява като функция от съдържанието на желязо в стандартните разтвори. Върху графиката се отчита средната стойност на абсорбцията, получена за пробата разредено вино, и се определя съдържанието на желязо С в него. Тогава съдържанието на желязо във виното е F x C, mg/l, където F е факторът на разреждане. Закръглява се до първия десетичен знак.

3. Обикновен метод

3.1. Реактиви

3.1.1. 30% (m/v) разтвор на водороден пероксид (Н₂О₂), несъдържащ желязо.

3.1.2. Разтвор на 1М солна киселина, несъдържащ желязо.

3.1.3. Амониев хидроокис [(NH4OH),(r_20°C = 0,92 g/ml)].

3.1.4. Раздробена пемза на гранули, третирана с вряща солна киселина, разредена в съотношение 1:2 и промита с дестилирана вода.

3.1.5. 2,5%-ен разтвор на хидрохинон (C₆H₆O₂), подкислен с един милилитър концентрирана сярна киселина (r_20°C = 1,84 g/ml) за 100 ml от разтвора. Този разтвор се съхранява в тъмна бутилка в хладилника и се изхвърля при най-малък признак на потъмняване.

3.1.6. 20%-ен разтвор на натриев сулфит (Na₂SO₃), приготвен от неутрален безводен натриев сулфит.

3.1.7. Ортофенантролинов разтвор (C₁₂H₈N₂.Н₂О) - 0,5 % в 96 об. % алкохол.

3.1.8. 20% (m/v) разтвор на амониев ацетат (CH₃COONH₄).

3.1.9. Разтвор на Fe (III), съдържащ един грам желязо на литър. Ако се предпочита, може да се използва стандартен търговски разтвор, който може да се приготви чрез разтваряне на 8,6341 g фероамониев сулфат [FeNH₄(SO₄) ₂.12H₂O] в 100 ml 1М солна киселина (т. 3.1.2.) и допълване на обема до един литър с 1М солна киселина (т. 3.1.2.).

3.1.10. Разреден стандартен разтвор на желязо, съдържащ 100 mg желязо на литър.

3.2. Апаратура

3.2.1. Киелдалова колба, 100 ml.

3.2.2. Спектрофотометър, с който могат да се правят измервания при дължина на вълната 508 nm.

3.3. Начин на работа

3.3.1. Минерализация

3.3.1.1. За вина със съдържание на захар под 50 g/l:

В Киелдалова колба с обем 100 ml се поставят 25 ml от виното, 10 ml от разтвора на водородния пероксид (т. 3.1.1.) и няколко гранули пемза (т. 3.1.4.). Разтворът се концентрира до обем 2 - 3 ml.

Течността се оставя да изстине и към нея се добавя амониев хидроокис (т. 3.1.3.) в количество, достатъчно за алкализиране на течността и утаяване на хидроксиди, като се внимава да не се намокрят стените на колбата. След охлаждането към алкализираната течност се добавя 1М солна киселина (т. 3.1.2.) в количество, достатъчно да разтвори утаените хидроокиси, и полученият разтвор се прехвърля в мерителна колба с обем 100 ml. Киелдаловата колба се изплаква с 1М солна киселина (т. 3.1.2.) и течността от изплакването се добавя към мерителната колба, допълвайки нейния обем до 100 ml.

3.3.1.2. За мъст и вина със съдържание на захар над 50 g/l.

3.3.1.2.1. Ако съдържанието на захар е между 50 и 200 g/l:

• пробата от 25 ml вино се третира с 20 ml разтвор на водороден пероксид (т. 3.1.1.);

• процедурата от т. 3.3.1.1. се повтаря.

3.3.1.2.2. Ако съдържанието на захар е над 200 g/l: Пробите вино или мъст се разреждат в съотношение 1:2 или 1:4, преди да се третират, според процедурата по т. 3.3.1.2.1.

3.3.2. Празна проба

Празната проба се извършва с дестилирана вода, като се използва същият обем от разтвора на водороден пероксид (т. 3.1.1.), използван при минерализирането, и се следва процедурата по т. 3.3.1.1.

3.3.3. Определяне

В две отделни мерителни колби с обем 50 ml се поставят 20 ml от разтвора на солната киселина, получен след минерализирането (т. 3.3.1.1.) и 20 ml от разтвора на солна киселина, получен от празната проба (т. 3.3.2). Към всяка колба се добавят по 2 ml от разтвора на хидрохинон (т. 3.1.5.), 2 ml от разтвора на сулфит (т. 3.1.6) и един милилитър от разтвора на ортофенантролин (т. 3.1.7.). Разтворите се оставят да престоят 15 min - през това време Fe (III) се редуцира до Fe (II). Добавят се по 10 ml от разтвора на амониев ацетат (т. 3.1.8.), допълват се обемите до 50 ml с дестилирана вода и двете мерителни колби се разклащат. Използва се разтворът, получен от празната проба, за да се нулира абсорбционната скала при 508 nm. Измерва се абсорбцията на разтвора при същата дължина на вълната.

3.3.4. Калибриране

В набор мерителни колби с обем 50 ml се поставят съответно по 0,5, 1, 1,5 и 2 ml от разтвора, съдържащ 100 mg желязо на литър (т. 3.1.10) и към всяка от тях се добавят по 20 ml дестилирана вода. Процедурата, описана в т. 3.3.3 се повтаря, за да се измери абсорбцията на всеки от така приготвените стандартни разтвори, които съдържат съответно по 50, 100, 150 и 200 mg желязо.

3.4. Изразяване на резултатите

Метод на изчисление

Графиката за изменението на абсорбцията се построява като функция от съдържанието на желязо в стандартните разтвори. Отчита се абсорбцията, получена с разтвора за изследване, и се изчислява съдържанието на желязо С в пробата солна киселина от 20 ml, получена след процедурата по минерализиране, т.е. в 5 ml от винената проба за анализ.

• Съдържанието на желязо във виното е 200 C, mg/l. Закръглява се до първия десетичен знак.

• Ако виното (или мъстта) е било разредено, съдържанието на желязо е 200 x F x C, mg/l, където F е факторът на разреждане. Закръглява се до първия десетичен знак.

31. Определяне на мед

1. Принцип на метода

Методът се основава на атомноабсорбционна спектрофотометрия.

2. Апаратура

2.1. Платинено блюдо

2.2. Атомноабсорбционен спектрофотометър.

2.3. Лампа с кух катод за определяне на мед.

2.4. Захранване с газ - въздух-ацетилен или азотен окис-ацетилен.

3. Реактиви

3.1. Мед (метал).

3.2. Азотна киселина (HNO₃), (r_20°C = 1,38 g/ml), с концентрация 65%.

3.3. Разредена азотна киселина, 1:2 (v/v).

3.4. Разтвор на мед в концентрация 1 g/l:

Използва се стандартен фирмен разтвор на мед. Такъв разтвор може да се приготви, като се отмери един грам мед (чист метал) и се прехвърли без загуба в мерителна колба от 1000 ml. Добавя се разредена азотна киселина в съотношение 1:2 (v/v) (т. 3.3), в количество, достатъчно (но без излишък) да разтвори метала, добавят се 10 ml от концентрираната азотна киселина (т. 3.2) и с бидестилирана вода колбата се допълва до марката.

3.5. Разтвор, съдържащ мед в концентрация 100 mg/l:

В мерителна колба с обем 100 ml се поставят 10 ml от разтвора, приготвен според т. 3.4, и с бидестилирана вода колбата се допълва до пълния ѝ обем.

4. Начин на работа

4.1. Подготовка на пробата и измерване съдържанието на мед.

Приготвя се подходящо разреден разтвор с бидестилирана вода.

4.2. Калибриране

В набор мерителни колби с обем 100 ml се отмерват съответно по 0,5, 1,0 и 2,0 ml от разтвора по т. 3.5. (100 mg/l мед) и обемът им се допълва до 100 ml с бидестилирана вода. Така приготвените разтвори съдържат съответно по 0,5, 1,0 и 2,0 mg мед на литър.

4.3. Измерване

Абсорбцията се измерва при 324,8 nm. Скалата се нулира с бидестилирана вода. Абсорбцията на стандартните разтвори се измерва директно, в последователност, приготвени според инструкциите в т. 4.2. Всяко измерване се повтаря.

5. Изразяване на резултатите

Метод на изчисление. Графиката за промените на абсорбцията се построява като функция от концентрацията на мед в стандартните разтвори.

Като се използва измерената абсорбция на пробите, върху калибрационната крива се отчита концентрацията С в милиграми на литър.

Концентрацията на съдържащата се мед е F x C, mg/l, където F е факторът на разреждане. Закръглява се до втория десетичен знак.

Забележки:

1. Разтворите за построяване на калибрационната крива и разрежданията на пробата се избират в съответствие с чувствителността на апарата, който ще се използва, и концентрацията на мед в пробата.

2. Когато в пробата за анализ се очакват много ниски концентрации на мед, се следва процедурата: В платинено блюдо се поставят 100 ml от пробата и течността се изпарява на водна баня при 100°С, докато придобие гъстота на сироп. Капка по капка се добавят 2,5 ml концентрирана азотна киселина (т. 3.2), докато дъното на блюдото се покрие изцяло. Внимателно утайката се изгаря до пепел на електрически котлон или слаб пламък; след това блюдото се поставя в муфелна пещ, загрята до 500°С ± 25°С, и се оставя в пещта за около един час. След охлаждане пепелта се овлажнява с един милилитър концентрирана азотна киселина (т. 3.2.), докато в същото време се раздробява със стъклена пръчка; сместа се оставя да се изпари и отново се изгаря до пепел, както преди това. Блюдото отново се поставя в муфелната пещ за 15 min. Третирането с азотна киселина се повтаря поне три пъти. Пепелта се разтваря, като в блюдото се добави един милилитър концентрирана азотна киселина (т. 3.2.) и 2 ml бидестилирана вода и сместа се прехвърля в колба от 10 ml. Блюдото се измива три пъти, като всеки път се използват по 2 ml бидестилирана вода. Накрая обемът на колбата се допълва с бидестилирана вода.

32. Определяне на кадмий

1. Принцип на метода

Кадмият се измерва директно във виното чрез атомноабсорбционна спектрофотометрия.

2. Апаратура

Преди употреба всички стъклени прибори трябва да се измиват в концентрирана азотна киселина, загрята до 70 - 80°С, а след това да се изплакнат в бидестилирана вода.

2.1. Атомноабсорбционен спектрофотометър, снабден с графитна пещ, мултипотенциометър и с възможност за корекция на фона.

2.2. Лампа с кух катод за определяне на кадмий.

2.3. Автоматични микропипети от 5 ml, със сменяеми връхчета, за еднократна употреба.

3. Реактиви

Използваната вода трябва да бъде бидестилирана в боросиликатен стъклен апарат или да се използва вода с подобна степен на пречистеност. Всички реактиви трябва да имат потвърдена чистота за анализ и е особено важно да не съдържат кадмий.

3.1. 85 % фосфорна киселина (r_20°C = 1,71 g/ml).

3.2. Разтвор на фосфорна киселина, получен чрез разреждане на 8 ml фосфорна киселина с вода до 100 ml.

3.3. 0,02 М разтвор на двувалентна натриева сол на етилендиаминтетраоцетната киселина (EDTA).

3.4. pH 9 буферен разтвор: в мерителна колба 100 ml се разтварят 5,4 g амониев хлорид в няколко милилитра вода, добавят се 35 ml разтвор на амониев хидроксид (r_20°C = 0,92 g/ml), разреден до 25% (v/v) и се допълва с вода до 100 ml.

3.5. Черно ерихромно Т - 1% (m/m) твърда смес от натриев хлорид.

3.6. Кадмиев сулфат (CdSO₄.8H₂O).

Титърът на разтвора на кадмиевия сулфат се проверява по следния метод:

В цилиндричен съд с малко вода се отмерват точно 102,6 mg от пробата на кадмиев сулфат и съдът се разклаща, докато съдържанието му се разтвори; добавят се 5 ml от буферния разтвор с pH 9 и приблизително 20 mg от черно ерихром Т. Титрува се с разтвора на EDTA, докато индикаторът започне да се оцветява в синьо.

Обемът на добавената EDTA е 20 ml. Ако има малка разлика в обема, премерената доза кадмиев сулфат за тестване, използвана при приготвянето на еталонния разтвор, се коригира в съответствие с тази разлика.

3.7. Еталонен разтвор на кадмий, с концентрация един грам на литър

Използва се стандартен разтвор. Той може да се приготви чрез разтваряне на 2,2820 g кадмиев сулфат във вода и с допълване на обема до един литър . Разтворът се съхранява в бутилка от боросиликатно стъкло с шлифована стъклена запушалка.

4. Начин на работа

4.1. Приготвяне на пробата:

Виното се разрежда в съотношение 1:2 (v/v) с разтвор на фосфорна киселина.

4.2. Подготовка на калибрационния обхват на разтворите:

Еталонният разтвор на кадмий се използва за приготвяне на серия от разредени разтвори с титър, съответно 2,5; 5; 10 и 15 mg кадмий на литър.

4.3. Измерване

4.3.1. Програмиране на пещта (долната информация служи само за ориентация):

- изсушаване при 100°С в продължение на 30 s;

- минерализация при 900°С в продължение на 20 s;

- атомизация при 2250°С в продължение на 2-3 s;

- дебит на азот (продухващ газ) - 6 l/min.

Забележка. В края на процедурата температурата се увеличава до 2700°С, за да се почисти пещта.

4.3.2. Измервания на атомната абсорбция:

Избира се дължина на вълната 228,8 nm. Абсорбционната скала се нулира с бидестилирана вода. С помощта на микропипета трикратно се отмерват и поставят в пещта по 5 ml от всеки от разтворите в калибрационния обхват и от пробата на разтвора за анализ. След всяко поставяне се отчита измерената абсорбция. Абсорбцията се изчислява като средна стойност на резултатите от трите измервания

5. Изразяване на резултатите

5.1. Метод на изчисление

Кривата за изменението на абсорбцията се построява като функция от концентрацията на кадмий в разтворите от калибрационния обхват. Промените следват линейна зависимост. Средната стойност на абсорбцията, получена за пробата на разтвора, се отбелязва върху кривата и се отчита съответната концентрация на кадмий С. Концентрацията на кадмий във виното е 2 C, mg/l.

33. Определяне на сребро

1. Принцип на метода

Методът се основава на атомноабсорбционна спектрофотометрия след минерализиране на пробата.

2. Апаратура

2.1. Платинено блюдо.

2.2. Водна баня с термостатичен контрол до 100°С.

2.3. Пещ с контрол на температурата до 500-525°С.

2.4. Атомноабсорбционен спектрофотометър.

2.5. Лампа с кух катод за определяне на сребро.

2.6. Захранване с газ: въздух, ацетилен.

3. Реактиви

3.1. Сребърен нитрат (AgNO₃).

3.2. Азотна киселина (HNO₃)(r_20°C = 1,38 g/ml) с концентрация 65 %.

3.3. Разредена азотна киселина - 1:10 (v/v).

3.4. Разтвор, съдържащ сребро в концентрация един грам на литър (1 g/l).

Използва се стандартен търговски разтвор на сребро. Той се приготвя чрез разтваряне на 1,575 g сребърен нитрат в разредена азотна киселина и допълване на обема до 1000 ml с разредена азотна киселина (т. 3.3).

3.5. Разтвор, съдържащ сребро в концентрация 10 mg/l:

10 ml от разтвора, приготвен според инструкциите в т. 3.4, се разреждат до 1000 ml с разредена азотна киселина.

4. Начин на работа

4.1. Подготовка на пробата:

В платинено блюдо се поставят 20 ml от пробата и течността се изпарява до сухо на кипяща водна баня. В пещта остатъкът се изгаря до пепел при 500 - 525°С. Бялата пепел се овлажнява с един милилитър концентрирана азотна киселина (т. 3.2). Течността се изпарява на кипяща водна баня, като се добавя отново един милилитър азотна киселина (т. 3.2) и повторно се изпарява. Добавят се 5 ml от разредената азотна киселина (т. 3.3) и сместа леко се нагрява до разтваряне.

4.2. Калибриране

В набор мерителни колби с обем 100 ml с пипета се отмерват съответно по 2, 4, 6, 8, 10 и 20 ml от разтвора в т. 3.5 (10 mg сребро на литър) и колбите се допълват до марката с разредена азотна киселина (т. 3.3). Така приготвените разтвори съдържат съответно по 0,20, 0,40, 0,60, 0,80, 1,0 и 2,0 mg сребро на литър.

4.3. Измерване

Дължината на вълната се настройва на 328,1 nm. Абсорбционната скала се нулира с разредена азотна киселина (3.3). Абсорбцията на разтвора, получен съгласно т. 4.1, се измерва директно на спектрофотометъра, а след това се измерва абсорбцията на еталонните разтвори. Всяко измерване се повтаря.

5. Изразяване на резултатите

Метод на изчисление

Графиката на изменението на абсорбцията се построява като функция от концентрацията на сребро в стандартните разтвори. Като се използва измерената абсорбция на пробата от калибрационната крива, се отчита концентрацията С в mg/l. Концентрацията на сребро във виното е 25 C, mg/l. Закръглява се до втория десетичен знак.

Забележка. Концентрацията на разтворите за построяване на калибрационната крива, обемът на използваната проба и крайният обем на течността се избират така, че да съответстват на чувствителността на уреда, който се използва.

34. Определяне на цинк

1. Принцип на метода

След отстраняване на алкохола, цинкът се измерва директно във виното с атомноабсорбционна спектрофотометрия.

2. Реактиви

Използваната вода трябва да е бидестилирана вода или друга вода със същата чистота и съхранявана в стъкленица от боросиликатно стъкло.

2.1. Стандартен разтвор, съдържащ един грам цинк на литър:

Използва се стандартен търговски разтвор на цинк. Той може да се приготви и чрез разтваряне на 4,3975 g цинков сулфат (ZnSO₄.7H₂O) във вода и допълване на обема до един литър.

2.2. Разреден разтвор на цинк, съдържащ 100 mg цинк на литър.

3. Апаратура

3.1. Ротационен изпарител във водна баня с термостатичен контрол.

3.2. Атомен абсорбционен спектрофотометър с ацетиленова горелка.

3.3. Лампа с кух катод за определяне на цинк.

4. Начин на работа

4.1. Приготвяне на пробата:

От проба 100 ml вино се отстранява алкохолът, като се намали обемът на пробата наполовина, използвайки ротационния изпарител (температура 50 - 60°С). Допълва се до първоначалния обем 100 ml с бидестилирана вода.

4.2. Калибриране

В четири мерителни колби с обем 100 ml се поставят съответно по 0,5, 1,0, 1,5 и 2,0 ml от разтвора, съдържащ 100 mg цинк на литър (т. 2.2), и те се допълват до марката с бидестилирана вода. Така приготвените разтвори съдържат съответно по 0,5, 1,0, 1,5 и 2,0 mg цинк на литър.

4.3. Измерване

Дължината на вълната се настройва на 213,9 nm. Абсорбционната скала се нулира с бидестилирана вода. Виното се впръсква директно с горелката на спектрофотометъра, след което последователно се впръскват четирите стандартни разтвора. Отчитат се показанията за абсорбция. Всяко измерване се повтаря.

5. Изразяване на резултатите

5.1. Метод на изчисление

Графиката на промените на абсорбцията се построява като функция от концентрацията на цинк в стандартните разтвори. Върху графиката се отбелязва средната стойност на абсорбцията, получена за пробата разредено вино, и се отчита концентрацията на цинк в нея. Закръглява се с точност до първия десетичен знак.

35. Определяне на олово

1. Принцип на метода

Оловото във виното се измерва директно с атомноабсорбционна спектрофотометрия.

2. Апаратура

Преди употреба всички стъклени прибори се измиват с концентрирана азотна киселина, загрята до 70 - 80°С, а след това се изплакват с бидестилирана вода.

2.1. Атомноабсорбционен спектрофотометър, снабден с графитна пещ, мултипотенциометър с възможност за корекция на неспецифичната абсорбция.

2.2. Лампа с кух катод за определяне на олово.

2.3. Автоматични микропипети от 5 ml със сменяеми връхчета за еднократна употреба.

3. Реактиви

Всички реактиви трябва да имат потвърдена чистота за анализ и е особено важно да не съдържат олово. Използваната вода трябва да бъде бидестилирана, съхранявана в боросиликатни стъкленици, или да се използва вода с подобна степен на чистота.

3.1. 85%-на фосфорна киселина (r_20°C = 1,71 g/ml).

3.2. Разтвор на фосфорна киселина, получен чрез разреждане на 8 ml фосфорна киселина с вода до 100 ml.

3.3. Азотна киселина (r_20°C = 1,38 g/ml).

3.4. Разтвор на олово в концентрация един грам на литър (1 g/l).

Използва се стандартен търговски разтвор. Този разтвор може да се приготви и чрез разтваряне на 1,600 g оловен (II) нитрат [Pb(NO₃)₂] в азотна киселина, разредена до един процент (v/v) и с допълване на обема до един литър. Разтворът се съхранява в съд от боросиликатно стъкло с шлифована стъклена запушалка.

4. Начин на работа

4.1. Приготвяне на пробата:

Виното се разрежда в съотношение 1:2 или 1:3 с разтвор на фосфорна киселина, в зависимост от предполагаемата концентрация на олово.

4.2. Подготовка на калибрационния обхват на разтворите:

Като се използва еталонният разтвор на олово, се приготвят серия от разтвори с титър съответно 2,5, 5, 10 и 15 µg олово на литър, чрез разреждане с бидестилирана вода.

4.3. Определяне

4.3.1. Програмиране на пещта (долната информация служи само за ориентация):

- изсушаване при 100°С в продължение на 30 s;

- минерализация при 900°С в продължение на 20 s;

- атомизация при 2250°С за 2 - 3 s;

- поток от азот (носещ газ) - 6 l/min.

Забележка: В края на процедурата температурата се увеличава до 2700°С с цел почистване на пещта.

4.3.2. Измервания

Избира се дължина на вълната 217 nm. Абсорбционната скала се нулира с бидестилирана вода. С помощта на микропипета в програмираната пещ се въвеждат на порции по 5 ml от всеки от разтворите в калибрационния обхват и от разтворите на анализираната проба. Записват се измерените абсорбции. Намира се средната стойност от три измервания.

5. Изразяване на резултатите

Метод на изчисляване. Кривата на изменението на абсорбцията се начертава като функция от концентрациите на оловото в калибрационния обхват. Зависимостта е линейна. Стойностите на абсорбцията на анализираните разтвори на пробата се нанасят на калибрационната крива, получена от концентрациите на оловото С. Концентрацията на олово е F x C, mg/l, където F е факторът на разреждане.

36. Определяне на флуориди

1. Принцип на метода

Съдържанието на флуориди във виното, към което е прибавен буфер, се определя със селективен електрод с твърда мембрана. Измереният потенциал е пропорционален на логаритъма от активността на флуоридните йони в средата, съгласно с уравнението:

- E = E₀ ± S log a_F, където:

- Е е потенциалът на йон-селективния електрод, измерен със сравнителен електрод в анализираната среда;

- Е₀ - стандартният потенциал на измерващата клетка;

- S - напрежението на йон-селективния електрод (фактор на Нернст); при 25°С теоретичното напрежение е равно на 59,2 mV;

- a_F - активността на флуоридните йони в изследвания разтвор.

2. Апаратура

2.1. Флуориден йон-селективен кристален мембранен електрод

2.2. Референтен електрод (каломелов Ag/AgCl)

2.3. Миливолтметър (рН-метър с разширена скала в миливолта), с точност до 0,1 mV.

2.4. Магнитна бъркалка с покрита пластина, която предпазва анализирания разтвор от топлината на мотора. Съдът за разбъркване е покрит с пластмаса (полиетилен или еквивалентен материал).

2.5. Пластмасови чашки с вместимост 30 - 50 ml и пластмасови съдове (полиетилен или еквивалентен материал).

2.6. Точни пипети (градуирани в микролитри или други еквивалентни пипети).

3. Реактиви

3.1. Стандартен разтвор на флуориди от един грам на литър.

Използват се стандартни търговски разтвори от един грам на литър. Разтворът може да бъде приготвен и чрез разтваряне на 2,210 g натриев флуорид (предварително изсушен 3 h при 105°С) в дестилирана вода. Долива се до един литър с дестилирана вода. Разтворът се съхранява в пластмасов съд.

3.2. Стандартните разтвори на флуориди с подходящи концентрации се приготвят чрез разреждане на нормалния разтвор с дестилирана вода и се съхраняват в пластмасови съдове. Разтворите със съдържание на флуориди в mg/l се приготвят непосредствено преди работа с тях.

3.3. Буферен разтвор с рН 5,5

Към вода (около 50 ml) се добавят 10 g от циклохексан-диамин-(1,2)-тетраоцетна киселина (ЦДТА); в 700 ml дестилирана вода се добавя разтвор, съдържащ 58 g натриев хлорид и 29,4 g тринатриев цитрат. ЦДТА се разтваря посредством прибавяне на около 6 ml от 32% (m/v) разтвор на натриев хидроксид. Накрая се добавят 57 ml оцетна киселина (r_20°C = 1,05 g/ml) и с 32% натриев хидроксид (около 45 ml) рН се довежда до 5,5. Охлажда се с дестилирана вода и се долива до един литър.

4. Начин на работа

Първоначални бележки:

Необходимо е да се внимава всички разтвори по време на измерването да останат при температура 25°С ± 1 °С (отклонение от повече от 1 °С причинява промени от ± 0,2 mV).

4.1. Директен метод

Определеният обем вино се поставя в пластмасова чашка заедно със същия обем буферен разтвор. Разтворът се разбърква внимателно. Когато индикаторът на апарата се стабилизира (стабилността е достигната, когато потенциалът варира не повече от 0,2 - 0,3 mV за 3 min), се отчита стойността на потенциала в mV.

4.2. Метод на стандартната добавка

Без да се прекъсва разбъркването, с помощта на прецизна пипета се добавя известен обем от стандартния разтвор на флуорида към анализираната среда. След стабилизиране показанията на апарата стойността на потенциала се отчита в mV.

Концентрацията на стандартния разтвор, който следва да се добави, се избира, както следва:

а) два или три пъти се увеличава концентрацията на флуорида в анализираната среда;

б) обемът на анализираната среда трябва да остане практически константна величина (увеличение на обема до £ 1%).

Условие "б" улеснява изчисленията (вж. 5).

Приблизителната концентрация на анализираната среда се отчита на калибрационната крива, построена на семи-логаритмична скала със стандартни разтвори на флуориди с титър съответно: 0,1, 0,2, 0,5, 1,0 и 2,0 mg/l.

Забележка. Ако приблизителната концентрация на изследваната проба е по-висока от концентрациите на еталонните разтвори, пробата се разрежда.

Пример:

Ако приблизителното съдържание на флуориди в анализираната среда (обем 20 ml) е 0,25 mg/l F^-, концентрацията се увеличава с 0,25 mg/l. За тази цел е необходимо да се използва подходяща пипета. Прибавят се например 0,20 ml от стандартния разтвор (1 %), съдържащ 25 mg/l F^-, или 0,50 ml стандартен разтвор със 100 mg/l F^-.

5. Изчисления

Съдържанието на флуориди в анализираната среда се изразява в mg/l и се изчислява по формулата:

С_F е концентрацията на флуориди в анализираната среда, mg/l;

С_a - концентрацията на добавените флуориди в анализираната среда (V_a), mg/l;

V_o - първоначалният обем на анализираната среда преди добавянето, ml;

V_a - обемът на добавения разтвор, ml;

DЕ - разликата в потенциалите Е₁ и Е₂, получени в т. 4.1 и 4.2, в mV;

S - напрежението на електрода в анализираната среда.

Ако V_a е много близо до V_o (вж. т. 4.2.), С_F се изчислява по формулата:

Получената стойност се умножава по фактора на разреждане, получен от добавянето на буферен разтвор.

37. Определяне на въглероден диоксид

1. Принцип на методите

1.1. Сравнителен метод

1.1.1.Негазирани вина (налягане на СО₂ £ 0,5 • 10⁵ Ра) (10⁵ паскала (Ра) = 1 бар.)

Обемът вино, взет от пробата, се охлажда до около 0°С и се смесва с подходящо количество натриев хидроксид до рН 10 - 11. Титрува се с разтвор на киселина в присъствието на карбоанхидраза. Съдържанието на въглероден диоксид се изчислява от обема на киселината, необходим за промяната на рН от 8,6 (бикарбонатна форма) до 4,0 (въглена киселина). Контролно титруване се провежда при същите условия с вино, освободено от въглероден диоксид, с цел да се отчете обемът на разтвора на натриев хидроксид, необходим за неутрализирането на киселините на виното.

1.1.2. Пенливи и искрящи вина

Пробата от виното за анализ се охлажда почти до точката на замръзване. След отделяне на определено количество вино, което ще служи за контрола, след отделяне на въглеродния диоксид, останалата част от бутилката се алкализира, за да се фиксира въглеродният диоксид под формата на Nа₂СО₃. Титрува се с разтвор на киселина в присъствието на карбоанхидраза. Съдържанието на въглеродния диоксид е приспаднато от обема на разтвора на киселината, поставен, за да се промени рН от 8,6 (бикарбонатна форма) до 4,0 (въглена киселина). Контролно титруване се провежда при същите условия с вино, от което е отделен въглеродният диоксид с цел да се определи обемът натриев хидроксид, изразходван за неутрализиране на киселините на виното.

1.2. Обикновен метод - пенливи и искрящи вина.

Манометричен метод - отделеното налягане от въглеродния диоксид се измерва директно в бутилка посредством афрометър.

2. Сравнителен метод

2.1. Негазирани вина (налягането на СО₂ £ 0,5 • 10⁵ Ра).

2.1.1. Апаратура

2.1.1.1. Магнитна бъркалка.

2.1.1.2. рН-метър.

2.1.2. Реактиви

2.1.2.1. 0,1 М разтвор на натриев хидроксид (NаОН).

2.1.2.2. 0,05 М разтвор на сярна киселина (Н₂SО₄).

2.1.2.3. Разтвор на карбоанхидраза, 1 g/l.

2.1.3. Начин на работа

Пробата от виното заедно с пипетата от 10 ml, използвана за взимането на пробата, се охлажда до около 0°С.

В чаша с обем 100 ml се поставят 25 ml натриев хидроксид (т. 2.1.2.1.) и се добавят две капки воден разтвор на карбоанхидраза (т. 2.1.2.3.). Посредством пипета, охладена до 0°С, се добавят 10 ml от виното. Чашата се поставя на магнитната бъркалка, включва се електродът на рН-метъра и се бърка на бавни обороти. Когато температурата на течността достигне стайна температура, се титрува бавно с разтвор на сярна киселина (т. 2.1.2.2.) до рН 8,6.

Титруването се продължава със сярна киселина (т. 2.1.2.2.) до достигане на рН до 4,0 - n, ml.

Въглеродният диоксид се отстранява от около 50 ml от пробата вино посредством разбъркване под вакуум за около 3 min, като колбата се загрява на водна баня до около 25°С. Същата процедура се повтаря и с 10 ml от виното, от което е отстранен въглеродният диоксид - n', ml.

2.1.4. Изразяване на резултатите

Един милилитър от титрувания 0,1 М разтвор на натриев хидроксид отговаря на 4,4 mg въглероден диоксид.

Количеството въглероден диоксид в грамове на литър вино е равно на

0,44(n - n'), където:

n - използваният обем сярна киселина за промяна на рН от 8,6 до 4,0;

n' - използваният обем сярна киселина за титруване на декарбонизираното вино.

Закръглява се до втория десетичен знак.

Забележка.

Когато виното е леко наситено с въглероден диоксид (съдържанието на СО₂ e по-малко от един грам на литър), не е необходимо добавянето на карбоанхидраза за катализиране на хидратацията на СО₂.

2.2. Пенливи и искрящи вина

2.2.1. Апаратура

2.2.1.1. Магнитна бъркалка

2.2.1.2. рН-метър

2.2.2. Реактиви

2.2.2.1. 50% (m/m) разтвор на натриев хидроксид (NаОН).

2.2.2.2. 0,05 М разтвор на сярна киселина (Н₂SО₄).

2.2.2.3. Разтвор на карбоанхидраза, един грам на литър.

2.2.3. Начин на работа.

Нивото на виното в бутилката се маркира и след това се охлажда до началото на замръзване. Бутилката се оставя леко да се загрее, като се разклаща, докато изчезнат ледените кристали. Запушалката бързо се отстранява и 45 - 50 ml от виното се поставят в мерителен цилиндър за контролно титруване. Точно отделеният обем v милилитра се определя от скалата на цилиндъра, след като той се върне до стайна температура.

След като контролната проба е отстранена, в бутилка с обем 750 ml се добавят 20 ml от разтвора на натриев хидроксид (т. 2.2.2.1.). Изчаква се, докато виното достигне стайна температура. В бехерова чаша от 100 ml се прехвърлят 30 ml преварена, дестилирана вода и две капки от разтвора на карбоанхидразата (т. 2.2.2.3.). Добавят се 10 ml от предварително алкализираното вино. Чашката се поставя на магнитната бъркалка, включва се електродът и се бърка на бавни обороти. Титрува се бавно с разтвор на сярна киселина (т. 2.2.2.2.) до достигане на рН 8,6. Резултатите се отчитат на бюретата. Титруването продължава бавно с разтвор на сярна киселина (т. 2.2.2.2.) до достигане на рН 4,0 - n, ml (обемът киселина, изразходван за промяна на рН от 8,6 - 4,0).

Отстранява се СО₂ от v ml вино, поставено от една страна за контролно титруване чрез третиране под вакуум за 3 min, като колбата се загрява на водна баня до около 25°С. Поставят се 10 ml от декарбонизираното вино и се добавят 30 ml преварена дестилирана вода, както и 2-3 капки разтвор на натриев хидроксид (т. 2.2.2.1.), за довеждане на рН до 10 - 11. Процедурата продължава, както е описано - n' ml (обемът на добавената 0,05 М сярна киселина).

2.2.4. Изразяване на резултатите

Един милилитър 0,05 М сярна киселина отговаря на 4,4 mg СО₂.

Бутилката алкализирано вино се изпразва и първоначалният обем се определя с точност до един милилитър, посредством доливане до марката с вода - V ml.

Количеството на СО₂ в грамове на литър вино е

	V - v + 20
0,44(n - n')	----------- ,	където:
	V - v

V е първоначалният обем на анализираното вино;

v - отделеният обем на пробата вино, доведена до стайна температура (вж. т. 2.2.3).

Закръглява се до втория десетичен знак.

2.3. Изразяване на резултатите

Изходното налягане при 20°С (Рафр₂₀) се изчислява в паскали по формулата:

където:

Q е съдържанието на СО₂, g/l;

А - алкохолното съдържание на виното, при 20°С;

S - съдържанието на захар във виното, g/l;

Р_атм е атмосферното налягане, Pa.

3. Обикновен метод (пенливи и искрящи вина)

3.1. Апаратура

Афрометър

Налягането в бутилките с пенливо и искрящо вино се измерва с афрометър. Той има различни форми в зависимост от начина, по който бутилката е затворена (с метална запушалка, капачка, коркова или пластмасова тапа, вж. фиг. 1 и 2). Афрометрите са градуирани в паскали (Ра) (1 паскал (Ра) = 1 N/m² = 10^-5 бара.), независимо, че обичайно като мерни единици се използват 10⁵ паскали или килопаскали.

Те попадат в различни класове. Класът на манометъра е прецизиран за пълно отчитане в зависимост от точността на скалата, изразена в процент (примерно манометър 1000 кРа клас 1 означава, че максималното налягане от 1000 кРа може да бъде отчетено с точност до ± 10 кРа). За прецизно измерване се препоръчва инструмент от клас 1.

Афрометърът трябва да бъде проверяван редовно (поне веднъж годишно).

3.2. Начин на работа

Измерванията се провеждат с бутилки, чиято температура е стабилизирана в продължение на 24 h.

След като се пробие капачката, тапата или запушалката на бутилката, тя трябва да бъде разклатена енергично, докато налягането се установи до постоянно, за да бъде отчетено.

3.3. Изразяване на резултатите

Свръхналягането при 20°С (Рафр₂₀) се изразява в Ра или кРа и е в съответствие с прецизността на манометъра.

Показанията трябва да се във форма, съответстваща на точността на манометъра (примерно: 6,3•10⁵ Ра или 630 кРа, а не 6,33•10⁵ Ра или 633 кРа за клас 1, манометър с пълна скала на отчитане от 1000 кРа).

Ако температурата, при която се извършва измерването, е различна от 20°С, се прави корекция на резултатите, като измереното налягане се умножи по коефициента

Това превръща резултатите в резултати при 20°С.

4. Връзка между налягането и количеството на въглеродния диоксид в пенливо вино (Не се взема предвид присъствието на други газове (О₂, N₂ и т.н.), които имат много малко влияние върху налягането.).

От изходното налягане при 20°С (Рафр₂₀) се изчислява абсолютното налягане при 20°С (Pабс₂₀) по формулата:

Pабс₂₀ = Р_атм + Рафр₂₀,

където:

P_атм е атмосферното налягане, изразено в Pa.

Количеството на въглеродния диоксид във виното се изразява чрез изразите:

- в литри СО₂ на литър вино:

0,987.10^-5Pабс₂₀(0,86 - 0,01А)(1 - 0,00144S);

- в грамове СО₂ на литър вино:

1,951.10^-5Pабс₂₀(0,86 - 0,01А)(1 - 0,00144S),

където:

А е алкохолното съдържание във виното при 20°С;

S - съдържанието на захари във виното, g/l.

Таблица

Отношение на налягането Рафр₂₀ за пенливи и искрящи вина при 20°С и налягането Рафр_t при температура t

0	1,85	13	1,24
1	1,80	14	1,20
2	1,74	15	1,16
3	1,68	16	1,13
4	1,64	17	1,09
5	1,59	18	1,06
6	1,54	19	1,03
7	1,50	20	1,00
8	1,45	21	0,97
9	1,40	22	0,95
10	1,36	23	0,93
11	1,32	24	0,91
12	1,28	25	0,88

38. Определяне на цианидни производни

(Внимание! Необходимо е да се спазват изискванията за безопасност при работа с химикалите хлорамин-T, пиридин, калиев цианид, солна киселина и фосфорна киселина. Изхвърлянето на използваните продукти трябва да се извършва съгласно действащите разпоредби, свързани с околната среда. Да се внимава с циановодородната киселина, която се отделя при дестилиране на подкислени вина.)

1. Принцип

Цялото количество свободна циановодородна киселина във виното се отделя чрез киселинна хидролиза и се изолира чрез дестилация. След като реагира с хлорамин-T и пиридин, образуваният глутакон диалдехид се определя чрез колориметрия въз основа на синьото оцветяване с 1,3-диметил-барбитурова киселина.

2. Апаратура

2.1. Дестилационна апаратура

За определяне на алкохолното съдържание на виното се използва класическият метод за дестилация (т. 4.1).

2.2. Колба от 500 ml с кръгло дъно със стандартизирани шлифовани свързващи елементи.

2.3. Водна баня с термостатично регулиране при 20°C

2.4. Спектрофотометър, даващ възможност да се правят измервания при дължина на вълната 590 nm

2.5. Стъклени кювети или кювети за еднократна употреба с оптичен път 20 mm

3. Реактиви

3.1. 25% (m/v) фосфорна киселина (H₃PO₄)

3.2. 3% (m/v) разтвор на хлорамин-T (C₇H₇ClNNa O₂S.3Н₂О)

3.3. Разтвор на 1,3-диметил-барбитурова киселина - разтварят се 3,658 g 1,3-диметил-барбитурова киселина (C₆H₈N₂O₃) в 15 ml пиридин и 3 ml солна киселина (r_20°C = 1,19 g/ml) и се добавят 50 ml дестилирана вода.

3.4. Калиев цианид (KCN).

3.5. 10%-ен (m/v) разтвор на калиев йодид (KJ).

3.6. Разтвор на сребърен нитрат (AgNO₃) 0,1 M.

4. Процедура

4.1. Дестилация

В 500-милилитрова колба (т. 2.2) се наливат 25 ml вино, 50 ml дестилирана вода, един милилитър фосфорна киселина (т.3.1) и се пускат няколко стъклени топчета. Колбата веднага се поставя в дестилатора. Използва се фуния за преливане на дестилата в градуирана колба с обем 50 ml, съдържаща 10 ml вода. Градуираната колба се потопява във вода с лед. В градуираната колба се събират 30-35 ml дестилат (или общо около 45 ml течност).

Фунията на кондензатора се промива с няколко милилитра дестилирана вода. Дестилатът се оставя да достигне 20°C и се налива дестилирана вода до съответната марка.

4.2. Измерване

В 50-милилитрова конична колба с шлифована стъклена пробка се прехвърлят 25 ml дестилат, добавя се 1 ml разтвор на хлорамин-T (т. 3.2) и с пробката колбата се затваря херметично. След 60 s се добавят 3 ml 1,3-диметил-барбитурова киселина (т. 3.3), съдът се затваря херметично с пробката и се оставя в продължение на 10 min. След това се измерва поглъщането по отношение на контролен образец (25 ml дестилирана вода вместо 25 ml дестилат) при дължина на вълната 590 nm, в кювети с оптичен път 20 mm.

5. Построяване на калибровъчната крива

5.1. Аргентометрично титруване на калиевия цианид

Измерването се прави внимателно. В градуирана колба с обем 300 ml се разтварят около 0,2 g KCN (т. 3.4) в 100 ml дестилирана вода, добавят се 0,2 ml разтвор на калиев йодид (т.3.5) и се титрува с разтвор на 0,1 M сребърен нитрат (т.3.6) до получаване на устойчиво жълтеникаво оцветяване.

Като се има предвид фактът, че един милилитър разтвор на 0,1 M сребърен нитрат отговаря на 13,2 mg KCN, се изчислява концентрацията на KCN в пробата.

5.2. Стандартна крива

5.2.1. Приготвяне на стандартни разтвори

След като е установена концентрацията на KCN съгласно процедурата, описана в т. 5.1., се приготвя стандартен разтвор, съдържащ 30 mg циановодородна киселина на литър (30 mg HCN = 72,3 mg KCN). Разтворът се разрежда до 1/10.

В мерителна колба с обем 100 ml се прехвърлят съответно по 1,0, 2,0, 3,0, 4,0, и 5,0 ml от разредения разтвор (пробата) и колбите се допълват с дестилирана вода до марката. Приготвените разтвори съдържат съответно по 30, 60, 90, 120 и 150 mg циановодородна киселина на литър.

5.2.2. Титруване

Вземат се 25-милилитрови проби от получените по този начин стандартни разтвори и се продължава съгласно указанията в т. 4.1 и 4.2.

Стойностите, които се получават за поглъщането на стандартните разтвори в зависимост от съдържанието на циановодородна киселина, трябва да образуват графично права линия, пресичаща началото на координатната система.

6. Изразяване на резултатите

Циановодородната киселина се изразява в микрограмове на литър и се закръглява до цяло число.

Метод на изчисляване. Концентрацията на циановодородната киселина се отчита по калибрационната крива. Ако пробата за анализ е била разредена, резултатът се умножава с коефициента на разреждане.

Повторяемост (r) и възпроизводимост (R)

бяло вино:

r = 3,1 mg/l или приблизително 6 % x_i;

R = 12 mg/l или приблизително 25 % x_i.

червено вино:

r = 6,4 mg/l или приблизително 8 % x_i;

R = 23 mg/l или приблизително 29 % x_i,

където:

x_i е средната концентрация на HCN във виното;

за бяло вино - x_i = 48,4 mg/l;

за червено вино - x_i = 48,4 mg/l.

39. Определяне на алил изотиоцианат

1. Принцип на метода

Алил изотиоцианатът, съдържащ се във виното, се отделя чрез дестилация и се определя посредством газова хроматография.

2. Реактиви

2.1. Абсолютен алкохол

2.2. Стандартен разтвор: разтвор на алил изотиоцианат в абсолютен алкохол, съдържащ 15 mg/l активен алил изотиоцианат.

2.3. Замразена смес, състояща се от етанол и сух лед (температура минус 60°С).

3. Апаратура

3.1. Апарат за дестилация, през който непрекъснато се пропуска струя от азот.

3.2. Подгряващо покритие, термостатично контролирано.

3.3. Дебитометър.

3.4. Газов хроматограф с пламъко-фотометричен детектор, снабден със селективен филтър за серни компоненти (дължина на вълната 394 nm), или друг подходящ детектор.

3.5. Хроматографска колона от неръждаема стомана с вътрешен диаметър 3 mm и дължина 3 m, пълна с Carbowax 20M върху 10% на хромосорб WHP, 80 - 100 mesh.

3.6. Mикроспринцовка от 10 ml

4. Начин на работа

В дестилационната колба се наливат два литра вино. В двете епруветки за събиране се добавят няколко милилитра етанол (т. 2.1.) така, че порьозните части на газовите тръби да бъдат напълно покрити. Двете епруветки се изстудяват отвън със замръзнала смес. Колбата се свързва със събирателните епруветки и започва да се вкарва азот с обем 3 l/h. Виното се загрява до 80°С с помощта на загряващата обвивка, дестилира се и се отделят 45-50 ml от дестилата.

Хроматографът се кондиционира: препоръчително е да се използват следните условия:

- температура на инжектора - 200°С;

- температура на колоната - 130°С;

- газов поток от хелиев носител - 20 ml/min.

С помощта на микроспринцовка се въвежда определено количество стандартен разтвор, така че пикът, съответстващ на алил изотиоцианата, лесно да се отличава на хроматограмата.

По същия начин се въвежда и еквивалентно количество от дестилата. Времето на задържане се установява по пика, който съответства на този на алил изотиоцианата.

При описаните условия компонентите, които са естествено представени във виното, не дават заблуждаващи пикове на хроматограмата на пробата.

Фиг. Апарат за дестилация в ток от азот

40. Цветни характеристики

1. Вина и гроздова мъст

1.1. Определение

Хроматичните характеристики на виното са:

• пропускливост - тя варира обратно пропорционално на цветния интензитет на виното;

• хроматичност - характеризира се с доминиращата дължина на вълната (която характеризира нюанса) и чистотата.

Цветните характеристики на червените вина и вината розе се изразяват чрез цветния интензитет и нюанса, които се определят по обикновения метод.

1.2. Принцип на методите

1.2.1. Сравнителен метод - спектрофотометричен метод, който позволява определянето на тримерните величини. Необходими са три-хроматични координати за определянето на цвета, както е залегнало в Международната комисия по осветяването (International Commission on Illumination CIE).

1.2.2. Обикновен метод (приложим за червени вина и вина розе) - спектрофотометричен метод, чрез който се определят цветните характеристики. По принцип се изразява с интензитета на цвета, даден от сумата на абсорбциите при дължина на вълната 420, 520 и 620 nm за един сантиметър оптичен път в пробата.

Цветът се изразява като абсорбция при 420 и 520 nm.

1.3. Сравнителен метод

1.3.1. Апаратура

1.3.1.1. Спектрофотометър, позволяващ измерване между 300 и 700 nm

1.3.1.2. Чифт стъклени кювети с оптичен път b 0,1, 0,2, 0,5, 1, 2 и 4 cm.

1.3.2. Начин на работа

1.3.2.1. Подготовка на пробата

Мътното вино трябва да бъде избистрено чрез центрофугиране. Въглеродният диоксид в младото и пенливо вино трябва да бъде отстранен посредством разклащане под вакуум.

1.3.2.2. Измервания

Оптичният път b в стъклените кювети също трябва да бъде избран така, че измерваната абсорбция да попада в интервала между 0,3 и 0,7. Подходящо е да се използват кювети с 2 (или 4) cm оптичен път за бели вина; един сантиметър - за вина розе, и 0,1 (или 0,2) cm - за червени вина. Спектрофотометричното измерване трябва да бъде извършено с дестилирана вода като сравнителна течност в кювети със същия оптичен път b с цел нулиране на абсорбцията по скалата при дължини на вълната 445, 495, 550 и 625 nm.

Четирите съответстващи абсорбции за виното трябва да бъдат закръглени до третия десетичен знак за оптичен път b - А₄₄₅, А₄₉₅, А₅₅₀ и А₆₂₅.

1.3.3. Изчисления

Стойностите на абсорбциите за оптичен път b cm се отчитат от таблица I. Изчисляват се съответните пропускливости (Т%), отговарящи на T₄₄₅, T₄₉₅, T₅₅₀ и T₆₂₅.

Изчисляват се тримерните величини Х, У, Z, закръглени до първия знак след десетичната запетая, от следните уравнения:

Х = 0,42Т₆₂₅ + 0,35Т₅₅₀ + 0,21Т₄₄₅

У = 0,20Т₆₂₅ + 0,63Т₅₅₀ + 0,17Т₄₉₅

Z = 0,24Т₄₉₅ + 0,94Т₄₄₅

Изчисляват се координатите на цвета х и у по формулите:

	X		Y
x =	----------	y =	----------
	X + Y + Z		X + Y + Z

1.3.4. Изразяване на резултатите

1.3.4.1. Относителната пропускливост се дава от стойността на У, изразена в проценти (за черно У = 0 %; за безцветни течности У = 100 %).

1.3.4.2. Хроматичността се определя от доминиращата дължина на вълната и чистотата. Диаграмата на хроматичността е изразена на фиг. 1. Точката 0 отговаря на източник на бяла светлина, представена чрез стандарта С с координати х_o = 0,3101 и у_o = 0,3163, храктеризиращи средно ярка дневна светлина.

• Доминираща дължина на вълната. Точка С се намира върху диаграмата с координати х и у. Ако С е извън триъгълника АОВ, се прекарва права линия, свързваща точките О и С. Тя се продължава и пресича спектъра в точка S, която отговаря на доминиращата дължина на вълната. Ако точка С е във вътрешността на триъгълника АОВ, прекарва се права от С към О и тя пресича спектъра в точка, която отговаря на дължината на вълната, характеризираща допълнителния цвят на виното. Тази дължина на вълната се изразява чрез стойността на буквата С.

• Чистота. Когато точката С е извън триъгълника АОВ, чистотата се изразява в %, чрез съотношението:

	разстояние от точка С до точка О
100	---------------------------------------
	разстояние от точка O до точка S

Когато точката С е в триъгълника АОВ, чистотата се определя от процента на съотношението:

	разстоянието от точка С до точка О (*)
100	---------------------------------------------
	разстоянието от точка О до точка Р

(*) Това разстояние се пресмята в смисъл на ОС.

Р е точката, където правата линия ОС пресича линията на ярко червения цвят (линия АВ). Чистотата се дава директно от диаграмите за хроматичност, като се познават х и у (фиг. 2, 3, 4, 5 и 6).

1.3.4.3. Резултати

Луминесцентността, хроматичността (изразени с доминираща дължина на вълната) и чистотата дефинират напълно цвета на виното. Тези величини се представят в анализното свидетелство заедно със стойността на оптичния път, при която са били направени измерванията.

1.4. Обикновен метод

1.4.1. Апаратура

1.4.1.1. Спектрофотометър, позволяващ измерване между 300 и 700 nm.

1.4.1.2. Чифт стъклени кювети с оптичен път b, - 0,1, 0,2, 0, 5 и 1 cm.

1.4.2. Предварителна подготовка на пробата

Мътното вино се центрофугира.

Въглеродният диоксид в младото и пенливото вино се отстранява посредством разклащане под вакуум.

1.4.3. Начин на работа

Оптичният път b в градуирани кювети се избира, така че да позволява измерване на абсорбцията А между 0,3 и 0,7.

Спектрофотометричното измерване се извършва с дестилирана вода като сравнителна течност в кювета със същия оптичен път b с цел нулиране на абсорбцията по скалата при дължина на вълната 420, 520 и 620 nm.

1.4.4. Изразяване на резултатите

1.4.4.1. Изчисления

Абсорбциите се изчисляват за един сантиметър оптичен път при три дължини на вълните, разделено на b (дебелина на кюветата) в сантиметри - А₄₂₀, А₅₂₀ и А₆₂₀.

Интензитетът I се изразява с формулата:

I = А₄₂₀ + А₅₂₀ + А₆₂₀, където:

А₄₂₀ - абсорбцията при дължина на вълната 420 nm;

А₅₂₀ - абсорбцията при дължина на вълната 520 nm;

А₆₂₀ - абсорбцията при дължина на вълната 620 nm.

Закръглява се с точност до третия десетичен знак.

Нюансът се изразява с формулата

Закръглява се до третия десетичен знак.

Таблица I

Трансформация на поглъщанията към излъчванията (Т %)

Начин на работа

Първият знак на абсорбцията се отчита във вертикалната колона 1, а вторият знак след десетичната запетая се отчита върху хоризонталната линия 2. Намира се цифрата, отговаряща на точката на пресичането им. За да се получи пропускливостта, това число се разделя на 10, ако абсорбцията е по-малка от единица; на 100 - ако лежи между едно и 2; на 1000 - ако е между 2 и 3.

Забележка. Числото горе вдясно на всяко квадратче позволява да се държи сметка чрез интерполация за третия десетичен знак върху стойността на поглъщане.

Пример:

Абсорбция	0,47	1,47	2,47	3,47
Проводимост Т %	33,9	3,4	0,3	0

Проводимостта Т % е изразена с точност до 0,1 %.

Фиг. 1. Хроматична диаграма, включваща всички цветове в спектъра

Фиг. 2. Хроматична диаграма за вина с ярко червен цвят и вина с керемидено червен цвят

Фиг. 3. Хроматична диаграма за вина с ярко червен цвят и вина с керемидено червен цвят

Фиг. 4. Хроматична диаграма за вина с ярко червен цвят и с виолетов цвят

Фиг. 5. Хроматична диаграма за вина с ярко червен цвят и с виолетов цвят

Фиг. 6. Хроматична диаграма за вина с ярко червен цвят и с виолетов цвят

2. Концентрирана ректифицирана гроздова мъст

2.1. Принцип на метода

Абсорбцията на ректифицираната гроздова мъст се измерва при дължина на вълната 425 nm, оптичен път един сантиметър след разреждане, до достигане на концентрация на захарта 25 % (m/m) (25° по Брикс).

2.2. Апаратура

2.2.1. Спектрофотометър, позволяващ измерване от 300 до 700 nm.

2.2.2. Стъклени кювети с оптична дължина един сантиметър.

2.2.3. Мембранен филтър с размер на порите 0,45 µm.

2.3. Начин на работа

2.3.1. Подготовка на пробата

Използва се разтворът със захарна концентрация 25 % (m/m) (25° по Брикс), приготвен, както е описано в метода "24. Определяне на pH", т. 4.1.2. Филтрира се през мембранния филтър с пори с диаметър 0,45 µm.

2.3.2. Определяне на абсорбцията

Абсорбционната скала се нулира при дължина на вълната 425 nm, като се използва кювета, съдържаща дестилирана вода, с оптична дължина от един сантиметър.

Абсорбцията А се измерва при същата дължина на вълната с разтвор, съдържащ 25% захар (25° по Брикс), приготвен както в т. 2.3.1 и поставен в кювета с оптична дължина един сантиметър.

2.4. Изразяване на резултатите

Стойността на абсорбцията на концентрирана ректифицирана гроздова мъст при дължина на вълната 425 nm в 25%-ен разтвор (25° по Брикс) се закръглява до втория десетичен знак.

41. Определяне на индекса на Фолин-Чикалто

1. Определение

Индексът на Фолин-Чикалто се използва за определяне на фенолните съединения.

2. Принцип на метода

Всички фенолни съединения, съдържащи се във виното, се окисляват чрез реактива на Фолин-Чикалто. Този реактив се получава от смес от фосфор-волфрамова киселина (H₃PW₁₂O₄₀) и фосфор-молибденова киселина (H₃PMo₁₂O₄₀), която след окисляване на фенолите се редуцира до смес от сини окиси на волфрама (W₈O₂₃) и молибдена (Mo₈O₂₃). Полученото синьо оцветяване има максимум на абсорбцията при 750 nm и е пропорционално на общото количество първоначални фенолни съединения.

3. Реактиви

Всички са с квалификация "химически чист за анализ". Използваната вода е дестилирана или с подобна чистота.

3.1. Реактив на Фолин-Чикалто

Този реактив може да се намери в търговската мрежа, готов за използване. Приготвя се по следния начин: В 700 ml дестилирана вода се разтварят 100 g натриев волфромат (Na₂WO₄.2H₂O) и 25 g натриев молибдат (Na₂MoO₄.2H₂O). Добавят се 50 ml 85% фосфорна киселина (r_20°C = 1,71 g/ml) и 100 ml концентрирана солна киселина (r_20°C = 1,19 g/ml). Разтворът се оставя да ври в продължение на 10 h, при условия на свободно извиране на водата, след което се добавят 150 g литиев сулфат (LiSO₄.H₂O) и няколко капки бром и се поставя отново да ври в продължение на 15 min. Оставя се да се охлади и се долива дестилирана вода до един литър.

3.2. 20 %-ен (m/v) разтвор на безводен натриев карбонат (Na₂CO₃).

4. Апаратура

Нормална лабораторна апаратура, в случая:

4.1. мерителни колби от 100 ml;

4.2. спектрофотометър, работещ при 750 nm.

5. Начин на работа

5.1. Червени вина

В мерителна колба от 100 ml (т. 4.1) се прехвърлят задължително в следната последователност: един милилитър от виното, предварително разредено 1:5; 50 ml дестилирана вода; 5 ml от реактива на Фолин-Чикалто (т. 3.1); 20 ml от разтвора на натриевия карбонат (т. 3.2). В колбата се долива с дестилирана вода до 100 ml. Разбърква се до получаването на хомогенна смес. Изчаква се 30 min, за да се стабилизира реакцията. Абсорбцията се определя при 750 nm в кювета с оптичен път един сантиметър, спрямо чиста дестилирана вода, измерена вместо виното (контрола). Ако абсорбцията не е около 0,3, то пробата подходящо се разрежда.

5.2. Бели вина

Същата процедура се изпълнява с един милилитър неразредено вино.

5.3. Концентрирана ректифицирана гроздова мъст

5.3.1. Подготовка на пробата

Използва се разтворът с концентрация на захарта 25 %(m/m) (25° по Брикс), подготвена по начин, описан в метода "24. Определяне на pH", т. 4.1.2.

5.3.2. Измерване

Процедира се по описания начин за червено вино (т. 5.1), като се използват 5 ml от пробата по описания в т. 5.3.1 начин и се измерва абсорбцията спрямо контролната проба, приготвена с 25% (m/m) разтвор на инвертна захар.

6. Изразяване на резултатите

6.1. Метод на изчисляване

Резултатът е изразен чрез индекс, получен чрез умножаване на абсорбцията по 100 за червени вина, разредени в съотношение 1:5 (или като се използва съответният фактор на разреждане) и съответно по 20 за бели вина. За концентрирана ректифицирана гроздова мъст резултатът се умножава по 16.

6.2. Повторяемост

Разликата между резултатите от две определяния, извършени едновременно или непосредствено едно след друго, от един и същ анализатор, върху една и съща проба, при еднакви условия, не трябва да е по-голяма от единица. Добрата повторяемост на резултатите се постига с изключително чиста апаратура (мерителните колби и спектрофотометричните кювети).

42. Специфичен анализ на концентрирана и ректифицирана гроздова мъст

а) Общи катиони

1. Принцип на метода

Пробата се третира чрез силно кисела катионобменна смола. Катионите се обменят срещу Н⁺. Те се изразяват чрез разликата между общата киселинност на елюата и тази на анализираната проба.

2. Апаратура

2.1. Стъклена колона с вътрешен диаметър 10 - 11 mm и дължина приблизително 300 mm, с кран.

2.2. pH-метър със скала, разграфена най-малко с 0,1 pH мерни единици.

2.3. Електроди:

- стъклен електрод, потопен в дестилирана вода;

- сравнителен каломелов електрод, потопен в разтвор на наситен калиев хлорид;

- или комбиниран електрод, потопен в дестилирана вода.

3. Реактиви

3.1. Силна катион-обменна смола в Н⁺ форма, предварително накисната във вода една нощ, за да набъбне.

3.2. 0,1 M разтвор на натриев хидроксид.

3.3. Хартиен pH индикатор

4. Начин на работа

4.1. Подготовка на пробата

Използва се разтворът, получен чрез разреждане на концентрирана ректифицирана гроздова мъст до 40% (m/v), както е описано в метода "13. Определяне на обща киселинност", т. 5.1.2.

4.2. Подготовка на йонно-обменната колона

В колоната се поставят приблизително 10 ml от предварително набъбнала смола в Н+форма. Колоната се изплаква с дестилирана вода, докато се премахне киселинността, като за проверка се използва хартиен индикатор.

4.3. Йонен обмен

През колоната се пропускат 100 ml от разтвора на концентрираната и ректифицирана гроздова мъст, приготвен съгласно т. 4.1, със скорост една капка на секунда. Елюатът се събира в чаша. Колоната се изплаква с 50 ml дестилирана вода. Киселинността на елюата (включително водата от изплакването) се титрува с 0,1M разтвор на натриев хидроксид, докато рН стане 7 при 20°С. Алкалният разтвор се прибавя бавно и постоянно при разклащане на получения разтвор от време на време - n, ml.

5. Изразяване на резултатите

Киселинността на елюата се изразява в милиеквивалента на килограм общи захари с точност до първия десетичен знак.

5.1. Изчисления

• Киселинността на елюата се изразява в милиеквивалента на килограм концентрирана ректифицирана гроздова мъст по формулата:

Е = 2,5n, където

n са използваните милилитри 0,1 M разтвор на натриев хидроксид.

• Общата киселинност на концентрирана и ректифицирана мъст се изразява в милиеквивалента на килограм (вж. метод "13. Определяне на обща киселинност", т. 6.1.2): а.

• Общите катиони се изразяват в милиеквиваленти на килограм общи захари:

	2,5n - a
100	--------- ,
	P

където:

Р е процентът на общите захари (m/m);

а - общата киселинност в милиеквиваленти на килограм концентрирана ректифицирана мъст

б) Проводимост

1. Принцип на метода

Измерва се електрическата проводимост на колона с течност, ограничена с два паралелни платинени електрода, които съставляват едно от отклоненията на Уитстонов мост. Проводимостта варира с изменението на температурата. Измерванията се правят при 20°С.

2. Апаратура

2.1.Уред за анализ на проводимостта, позволяващ измерване на проводимостта в граници 1 - 1000 микросименса на сантиметър.

2.2. Водна баня, даваща възможност за достигане на температура на анализираната проба около 20°С ± 2°С.

3. Реактиви

3.1. Дейонизирана вода със специфична проводимост под 2 микросименса на сантиметър при 20°С.

3.2. Сравнителен разтвор на калиев хлорид

В дейонизирана вода (т. 3.1) се разтварят 0,581 g калиев хлорид (КCl), предварително изсушен до постоянна маса при температура 105°С. Допълва се до един литър с дейонизирана вода (т. 3.1). Този разтвор има проводимост от 1000 микросименса на сантиметър, при 20°С. Съхранява се не повече от три месеца.

4. Начин на работа

4.1. Подготовка на пробата за анализ

Използва се разтвор с обща концентрация на захарите 25%(m/m) (25° по Брикс), както е описано в метода "24. Определяне на pH", т. 4.1.2.

4.2. Определяне на проводимостта

Температурата на анализираната проба се довежда до 20°С чрез поставянето ѝ на водна баня и тази температура се поддържа до ± 0,1°С. Клетката за проводимост се изплаква два пъти с изследвания разтвор. Измерва се проводимостта и полученият резултат се изразява в микросименси на сантиметър.

5. Изразяване на резултатите

Резултатът се изразява в микросименси на сантиметър (Scm^-1) при 20°С, при 25% (m/m) (25° по Брикс) разтвор на концентрирана ректифицирана гроздова мъст. Закръглява се до цяло число.

Изчисления. Ако апаратът не е снабден с компенсатор на температурата, проводимостта се коригира, като се използва таблицата. Ако температурата е под 20°С, корекцията се добавя, а ако температурата е над 20°С - се изважда.

Таблица

Корекции на проводимостта (за температури, различни от 20°С) в микросименси на сантиметър^-1

Про-	Температури

води-	20,2	20,4	20,6	20,8	21,0	21,2	21,4	21,6	21,8	22, 0 ⁽¹⁾
мост	19,8	19,6	19,4	19,2	19,0	18,8	18,6	18,4	18,2	18,0 ⁽²⁾
0	0	0	0	0	0	0	0	0	0	0
50	0	0	1	1	1	1	1	2	2	2
100	0	1	1	2	2	3	3	3	4	4
150	1	1	2	3	3	4	5	5	6	7
200	1	2	3	3	4	5	6	7	8	9
250	1	2	3	4	6	7	8	9	10	11
300	1	3	4	5	7	8	9	11	12	13
350	1	3	5	6	8	9	11	12	14	15
400	2	3	5	7	9	11	12	14	16	18
450	2	3	6	8	10	12	14	16	18	20
500	2	4	7	9	11	13	15	18	20	22
550	2	5	7	10	12	14	17	19	22	24
600	3	5	8	11	13	16	18	21	24	26

⁽¹⁾ изваждане на корекцията

⁽²⁾ добавяне на корекцията

в) Хидроксиметилфурфурол

1. Принцип на метода

1.1. Колориметричен метод

Алдехидните деривати на фурана, най-важният от които е хидроксиметилфурфурол, реагират с барбитуровата киселина и пара-толуидина, при което се получава червено съединение. Определя се чрез колориметрия при 550 nm.

1.2. Високоефективна течна хроматография (HPLC).

Разделяне чрез пропускане през хроматографска колона с обърната фаза и определяне при 280 nm.

2. Колориметричен метод

2.1. Апаратура

2.1.1. Спректрофотометър за измервания между 300 - 700 nm.

2.1.2. Стъклени кювети с оптична дължина един сантиметър.

2.2. Реактиви

2.2.1. 0,5% разтвор (m/v) на барбитурова киселина.

В дестилирана вода се разтварят 500 mg барбитурова киселина (C₄O₃N₂H₄) и разтворът се загрява на водна баня до 100°С. Долива се с дестилирана вода до 100 ml. Разтворът се съхранява до една седмица.

2.2.2. 10 % (m/v) разтвор на паратулоидин.

В мерителна колба с обем 100 ml се прехвърлят 10 g паратулоидин [C₆H₄(CH₃)NH₂], добавят се 50 ml изопропанол [CH₃CH(OH)CH₃] и 10 ml ледена оцетна киселина [CH₃COOH (r_20°C = 1,05 g/ml)]; добавя се изопропанол до обем 100 ml. Този разтвор се подновява всеки ден.

2.2.3. 1%-ен (m/v) разтвор на етанал (ацеталдехид) (CH₃CHO).

Приготвя се непосредствено преди употреба.

2.2.4. Разтвор на хидроксиметилфурфурол (C₆O₃H₆), съдържащ един g/l.

Последователно се приготвят разтвори, съдържащи съответно 5, 10, 20, 30, и 40 mg/l. Разтворът с концентрация един грам на литър, а така също и разредените разтвори се приготвят непосредствено преди употреба.

2.3 Подготовка за работа

2.3.1. Подготовка на пробата.

Използва се разтвор, получен при разреждане на концентрирана ректифицирана гроздова мъст до 40% (m/v), както е описано в метода "13. Определяне на обща киселинност", т. 5.1.2. Анализът се извършва върху 2 ml от този разтвор.

2.3.2. Колориметрично определяне

Във всяка една от двете колби "а" и "b" с обем 25 ml със стъклени запушалки се поставят по 2 ml от пробата, приготвена както е указано в т. 2.3.1. Във всяка колба се поставя по 5 ml разтвор на паратолуидин (т. 2.2.2) и се разбърква. Добавя се един милилитър дестилирана вода в колба "b" (контрола) и един милилитър барбитурова киселина (т. 2.2.1) в колба "а". Разклащат се за хомогенизиране. Съдържанието от колбите се прехвърля в спектрофотометрични кювети с оптичен път един сантиметър. Абсорбционната скала се нулира, като се използва съдържанието на колба "b" и дължина на вълната 550 nm. Промяната в абсорбцията се следва в зависимост от съдържанието на колба "а"; записва се максималната стойност на абсорбцията А, която се достига след две до пет минути.

Пробите с концентрация на хидроксиметилфурфурола над 30 mg/l се разреждат преди анализа.

2.3.3. Построяване на калибрационната кривата

Прехвърлят се в две колби "а" и "б" с обем 25 ml по 2 ml от всеки разтвор на хидроксиметилфурфурол с концентрация съответно 5, 10, 20, 30, и 40 mg/l (т. 2.2.4) и се процедира, както е описано в т. 2.3.2.

Графиката, изобразяваща изменението в абсорбцията като зависимост от концентрацията на хидроксиметилфурфурола в милиграма на литър, е права линия, преминаваща през центъра на координатната система.

2.4. Изразяване на резултатите

Концентрацията на хидроксиметилфурфурола в концентрирана ректифицирана гроздова мъст се изразява в милиграма на килограм (mg/kg) от общите захари.

2.4.1. Начин на изчисляване

Концентрацията на хидроксиметилфурфурола, С mg/l, в изследваната проба се получава, като абсорбцията А на пробата се отнесе към калибрационната крива.

Концентрацията на хидроксиметилфурфурола е

	C
250	--- ,	mg/kg от общите захари, където:
	P

Р е процентът (m/m) на общите захари на ректифицираната и концентрирана гроздова мъст.

3. Високоефективна течна хроматография (HPLC)

3.1. Апаратура

3.1.1. Течен хроматограф под високо налягане, оборудван със:

- инжектор с обем 5 и 10 ml;

- спектрофотометричен детектор за измервания при 280 nm;

- колона (например Bondopak C₁₈, Waters Ass.);

- регистриращ уред, по възможност интегратор;

- скорост на потока на подвижната фаза - 1,5 ml/min.

3.1.2. Мембранен филтър (с диаметър на порите 0,45 mm).

3.2. Реактиви

3.2.1. Двойно дестилирана вода

3.2.2. Метанол (CH3OH), дестилиран или за HPLC.

3.2.3. Оцетна киселина [(CH₃COOH), r_20°C = 1,05 g/ml].

3.2.4. Подвижна фаза: вода-метанол (т. 3.2.2) и оцетна киселина (т. 3.2.3), предварително филтрирани през мембранен филтър (0,45 mm) в съотношение 40:9:1 (v/v). Тази смес ежедневно се приготвя и дегазира преди употреба.

3.2.5. Сравнителен разтвор на хидроксиметилфурфурол - 25 mg/l (m/v).

В мерителна колба с обем 100 ml се поставят 25 mg точно претеглен хидроксиметилфурфурол (C₆H₃О₆) и до марката се долива метанол (т. 3.2.2). Този разтвор се разрежда 1:10 с метанол (т. 3.2.2.). Филтрира се през мембранен филтър 0,45 mm. Ако се съхранява в кафява стъклена бутилка в хладилник, този разтвор остава траен от два до три месеца.

3.3. Начин на работа

3.3.1. Подготовка на пробата

Използва се разтвор, получен чрез разреждане на концентрирана гроздова мъст до 40% (m/v), както е описано в метода "13. Определяне на обща киселинност", т. 5.1.2, и се филтрира през мембранен филтър (с размер на порите 0,45 mm).

3.3.2. Определяне чрез хроматография

В хроматографа се инжектирват 5 (или 10) ml от пробата, подготвена съгласно т. 3.3.1 и 5 (или 10) ml от сравнителния разтвор на хидроксиметилфурфурол (т. 3.2.5). Хроматограмата се записва. Времето на задържане на хидроксиметилфурфурола е приблизително 6 - 7 min.

3.4. Изразяване на резултатите

Съдържанието на хидроксиметилфурфурол в концентрирана ректифицирана мъст се изразява в милиграма на килограм от общото съдържание на захари.

3.4.1. Начин на изчисляване

Ако С в mg/l е концентрацията на хидроксиметилфурфурол в разтвор 40% (m/v) на концентрирана и ректифицирана мъст, концентрацията на хидроксиметилфурфурол е

250 C
------ ,	mg/kg общи захари,
P

където:

Р е процентът на общите захари в концентрирана и ректифицирана гроздова мъст (m/m).

г) Тежки метали

1. Принцип на метода

Бърз метод за оценка на тежки метали

Тежките метали се откриват в подходящо разредена концентрирана гроздова мъст чрез оцветяване, получено при образуването на сулфиди. Те се оценяват чрез сравнение със сравнителен разтвор на олово, който отговаря на максимално допустимата концентрация.

Определяне на съдържанието на олово с атомноабсорбционна спектрофотометрия.

Полученият хелат от взаимодействието на амониев пиролидиндитиокарбамат с оловото се екстрахира с метилизобутилкетона и абсорбцията се измерва при 283,3 nm. Съдържанието на олово се определя, като за сравнение се използват стандартни разтвори с известна концентрация.

2. Бърз метод на оценка на тежки метали

2.1. Реактиви

2.1.1. Разредена солна киселина, 70% (m/v). Разреждат се 70 g (HCl)(r_20°C= 1,16 до 1,19 g/ml) с вода до 100 ml.

2.1.2. Разредена солна киселина, 20% (m/v). Разреждат се 20 g солна киселина (HCl) (r_20°C = 1,16 до 1,19 g/ml) с вода до 100 ml.

2.1.3. Разтвор на амоняк. Разреждат се 14 g амоняк (NH₃) (r_20°C = 0,931 до 0,934 g/ml) с вода до 100 ml.

2.1.4. Буферен разтвор с рН 3,5

В 25 ml вода се разтварят 25 g амониев ацетат (СН₃СООNН₄) и се прибавят 38 ml разредена солна киселина (т. 2.1.1). Ако е необходимо, рН се коригира с разредена солна киселина (т. 2.1.2) или разреден амоняк (т. 2.1.3). Допълва се с вода до 100 ml.

2.1.5. 4%-ен (m/v) разтвор на тиоацетамид (C₂H₅NS).

2.1.6. 85%-ен (m/v) разтвор на глицерол (С₃Н₈О₃), (n_D^20°C = 1,449 до 1,455).

2.1.7. Реактив на тиоацетамид

Към 0,2 ml разтвор на тиоацетамид (т. 2.1.5) се прибавя един милилитър от смес, приготвена от 5 ml вода, 15 ml разтвор на 1 M натриев хидроксид и 20 ml глицерол (т. 2.1.6). Загрява се на водна баня при 100°С в продължение на 20 s. Подготвя се непосредствено преди употреба.

2.1.8. Разтвор на олово със съдържание 0,002 g/l.

Разтвор на олово един грам на литър се приготвя, като в колба с обем 250 ml се разтворят във вода 0,400 g оловен нитрат [Pb(NO₃)₂] и се долее до марката с вода. Преди употреба този разтвор се разрежда 500 пъти с вода (2 ml до 1000), за да се получи разтвор с концентрация 0,002 g/l.

2.2. Начин на работа

10 g от концентрирана ректифицирана гроздова мъст се разтварят в 10 ml вода. Прибавят се 2 ml буферен разтвор с рН 3,5 (т. 2.1.4) и се смесват. Прибавя се 1,2 ml реактив - тиоацетамид (т. 2.1.7). Смесват се веднага. Контролната проба се подготвя при същите условия, като се използва оловен разтвор 0,002 g/l (т. 2.1.8). След 2 min се появява евентуално кафяво оцветяване на разтвора на ректифицираната и концентрирана гроздова мъст и то не е по-наситено от колкото е в контролната проба.

2.3. Изчисления

При условията на тази процедура контролната проба отговаря на максимално допустимата концентрация на тежки метали (изразена като олово - 2 mg/kg) в концентрирана ректифицирана гроздова мъст.

3. Определяне на съдържанието на олово с атомноабсорбационен спектрофотометър

3.1. Апаратура

3.1.1. Атомноабсорбционен спектрофотометър, снабден с горелка за пламък въздух - ацетилен.

3.1.2. Лампа с кух катод за определяне на олово.

3.2. Реактиви

3.2.1. Ледена оцетна киселина

12 g ледена оцетна киселина (r_20°C = 1,05 g/ml) се разтварят с вода до 100 ml.

3.2.2. 1 %-ен (m/v) разтвор на амониев пиролидиндитиокарбамат (C₅H₁₂N₂S₂).

3.2.3. Метилизобутилкетон [(CH₃)₂CHCH₂COCH₃].

3.2.4. Разтвор на олово, съдържащ 0,010 g олово на литър.

Разтвор на олово с концентрация един g/l (т. 2.1.8) се разрежда до 1 %-ен (v/v) разтвор, т. е. 100 пъти.

3.3. Начин на работа

3.3.1. Разтвор за изпитване.

Разтварят се 10 g от ректифицираната и концентрирана мъст в разтвор от равни обеми ледена оцетна киселина и вода (т. 3.2.1) и се допълва до 100 ml с този разтвор. Добавят се 2 ml от разтвора на амониев пиролидиндитиокарбамат (т. 3.2.2) и 10 ml метилизобутилкетон (т. 3.2.3). Разбърква се и се оставя да е закрит от светлина за около 30 s. Оставя се да се разслоят двата слоя. Използва се метилизобутилкетоновият слой.

3.3.2. Сравнителен разтвор

Подготвят се три сравнителни разтвора, съдържащи повече от 10 g концентрирана ректифицирана мъст, респ. 1,0 2,0 и 3 ml от разтвора на олово 0,010 g/l (т. 3.2.4). Третира се както изпитващият разтвор.

3.3.3. Контрола

Контролата се подготвя при същите условия, описани в т. 3.3.1 за разтвора за изпитване, но без добавяне на концентрирана ректифицирана мъст.

3.3.4. Определяне

Избира се дължина на вълната 283,3 nm.

Контролата се впръсква в пламъка и се регулира абсорбционната нула.

Оперира се с метилизобутилкетоновия слой на екстрактите и се определят абсорбциите за изпитващия и контролните разтвори.

3.4. Изразяване на резултатите

Съдържанието на олово се изразява в милиграми на килограм концентрирана и ректифицирана мъст. Закръглява се до първия десетичен знак.

3.4.1. Изчисления

Прекарва се крива, представляваща абсорбцията като функция на концентрацията на олово, добавено в сравнителните разтвори. Нулевата концентрация съответства на изпитващия разтвор.

Екстраполира се пресечната точка на правата с отрицателната част на оста на концентрацията. Разстоянието от точката на пресичане до началото на координатната система дава концентрацията на олово в изпитвания разтвор.

д) Химично определяне на етанол

Този метод се използва за определяне на алкохола в нискоалкохолни течности като мъст, концентрирана мъст и концентрирана ректифицирана мъст.

1. Принцип на метода

Обикновена дестилация. Окисляване на етанола в дестилата с калиев бихромат. Титруване на излишъка от бихромата с разтвор на желязо (II).

2. Апаратура

2.1. Използва се дестилационната апаратура, описана в метода "3. Определяне на алкохолното съдържание", т. 3.2.

3. Реактиви

3.1. Разтвор на калиев бихромат

В достатъчно количество вода се разтварят 33,600 g калиев бихромат, (K₂Cr₂O₇), за да се получи един литър разтвор при 20°С. Един милилитър от този разтвор окислява 7,8924 mg алкохол.

3.2. Разтвор на феро (II) амониев сулфат

В достатъчно количество вода се разтварят 135 g феро (II) амониев сулфат [FeSO₄.(NH₄) ₂SO₄.6H₂O], за да се получи един литър разтвор, и се долива 20 ml концентрирана сярна киселина (H₂SO₄) (r_20°C = 1,84 g/ml). Този разтвор малко или много съответства на половината от обема на бихроматния разтвор, когато е прясно приготвен. Той се окислява бавно с течение на времето.

3.3. Разтвор на калиев перманганат

1,088 g от калиевия перманганат (KMnO₄) се разтварят в достатъчно количество вода, за да се получи един литър разтвор.

3.4. Разредена сярна киселина 1:2 (v/v).

Към 500 ml вода при непрекъснато разбъркване и на порции се прибавят 500 ml сярна киселина (H₂SO₄)(r_20°C = 1,84 g/ml).

3.5. Разтвор на фероортофенантролин

0,695 g железен сулфат (FeSO₄.7H₂O) се разтварят в 100 ml вода и се добавят 1,485 g ортофенантролинов монохидрат (C₁₂H₈N₂.H₂O). Загрява се, за да се разтвори по-добре. Полученият яркочервен разтвор се съхранява много добре.

4. Начин на работа

4.1 Дестилация

В дестилационна колба се поставят 100 g концентрирана и ректифицирана гроздова мъст и 100 ml вода. Дестилира се и дестилатът се събира в мерителна колба с обем 100 ml, след което се довежда до марката с вода.

4.2 Окисляване

Взема се колба със стъклена запушалка и широко гърло, позволяващо измиването му без загуби. В колбата се поставят 20 ml от разтвора за титруване - калиев бихромат (т. 3.1) и 20 ml от разредената сярна киселина 1:2 (v/v) (т. 3.4), и се разклаща. Добавят се 20 ml от дестилата. Колбата се запушва и разклаща и се изчаква поне 30 min, като се разклаща от време на време (това е колбата с разтвор за анализ).

Титрува се с разтвор на феро (II) амониев сулфат (т. 3.2) спрямо калиево-бихроматния разтвор чрез поставяне в идентична колба на същите количества реактиви, като 20 ml дестилат се заменят с 20 ml дестилирана вода (това е контролната колба).

4.3 Титруване

Към съдържанието на "колбата с пробата за анализ" се добавят четири капки от ортофенантролиновия разтвор (т. 3.5). Излишният бихромат се титрува чрез добавяне на феро (II) амониев сулфат (т. 3.2). Добавянето на феро (II) амониев сулфат се преустановява, когато сместа промени цвета си от зеленосин на кафяв. За по-точното определяне края на титруването, се променя цвета на сместа обратно от кафяв на зеленосин с разтвор на калиев перманганат (т. 3.3). Изважда се една десета от обема на използвания разтвор от обема на добавения феро (II) амониев сулфат - n, ml (разлика от обемите).

По същия начин се процедира с "контролната колба" - n', ml (разлика от обемите).

5. Изразяване на резултатите

Количеството етанол се изразява в грамове на килограм общи захари. Закръглява се до първия десетичен знак.

5.1 Метод на изчисляване

n' са милилитрите от железния разтвор, който редуцира 20 ml бихроматен разтвор, а той окислява 157,85 mg чист етанол.

Един милилитър от феро (II) разтвора има същата редуцираща сила, както:

157,85
-------- ,	mg етанол;
n'

n' - n са милилитрите разтвор на феро (II) разтвора и имат същата редуцираща способност, както:

	n' - n
157,85	-------- ,	mg етанол.
	n'

Етанолът, в g/kg, концентрирана и ректифицирана мъст, е:

	n' - n
7,892	----------- .
	n'

Етанолът, в g/kg общи захари, е:

	n' - n
789,2	-------- ,
	n'P

където:

P е съдържанието на общите захари, в % (m/m).

e) Мезо-инозитол, ксило-инозитол и захароза

1. Принцип на метода

Газова хроматография на силанови производни

2. Реактиви

2.1. Вътрешен стандарт - ксилол (течен разтвор от около 10 g/l, към който с върха на шпатула е добавен натриев азид).

2.2. Бис-триметилсилил-трифлуорацетамид (C₈H₁₈F₃NOSi₂).

2.3. Триметилхлоросилен (C₃H₉ClSi).

2.4. Пиридин химически чист за анализ (C₅H₅N).

2.5. Мезо-инозитол (C₆H₁₂O₆).

3. Апаратура

3.1. Газов хроматограф, оборудван със:

3.2. Капилярна колона (например с размери: дължина 25 m и вътрешен диаметър 0,3 mm, покрита с филм OV 1 с дебелина 0,15 mm).

Експериментални условия: газ носител - водород или хелий;

скорост на носещия газ - около 2 ml/min;

температура на инжектора и детектора - 300°С;

програмиране на температурата - една минута при 160°С, 4 °С/min до 260°С, поддържане на температура 260°С за около 15 min;

съотношение на разделяне - около 1:20.

3.3. Интегратор.

3.4. Микроспринцовка 10 ml.

3.5. Микропипети 50, 100 и 200 ml.

3.6. Колба 2 ml с тефлонова запушалка.

3.7. Сушилня.

4. Метод на работа

Прецизно претеглена проба от около 5 g концентрирана и ректифицирана гроздова мъст се поставя в колба с обем 50 ml. Добавя се един милилитър от стандартен разтвор на ксилол (т. 2.1) и вода до марката. След хомогенизиране на пробата се вземат 100 ml от сместа, поставят се в колба и се изсушава на лек въздушен поток. За да се подпомогне изпаряването, при необходимост може да се добави 100 ml чист етилов алкохол. Остатъкът внимателно се разтваря в 100 ml пиридин (т. 2.4) и 100 ml бис-триметилсилил-трифлуорацетамид (т. 2.2) и 10 ml триметилхлорсилан (т. 2.3). Колбата се запушва с тефлоновата запушалка и се нагрява в сушилня до 60°С в продължение на един час.

Инжектират се 0,5 ml от тази течност в хроматографа посредством празна и затоплена игла.

5. Изчисляване на резултатите

Приготвя се разтвор, който съдържа:

60 g/l глюкоза, 60 g/l фруктоза, един грам на литър мезо-инозитол, един грам на литър захароза. Претеглят се 5 g от разтвора и се следва процедурата, описана в т. 4. От получената хроматограма се изчисляват резултатите за мезо-инозитола и захарозата по отношение на ксилитола.

За сцило-инозитол, който не се предлага готов в търговската мрежа и има време на задържане, лежащо между последния пик на аномеричната форма на глюкозата и пика на мезо-инозитола (вж. приложената диаграма), се взима същият резултат, както за мезо-инозитола.

6. Изразяване на резултатите

Мезо-инозитол и сцило-инозитол се изразяват в милиграми на килограм общи захари. Захарозата се изразява в грамове на килограм гроздова мъст.

Фиг. 1. Газхроматограма на мезо-инозитол, сцило-инозитол и захароза.

43. Определяне на изотопното отношение ¹⁸О/¹⁶О във водата на вината

I. Описание на метода

1. Цел на метода

Целта на този метод е да се измери изотопното отношение ¹⁸О/¹⁶О на води с различен произход. Изотопното отношение ¹⁸О/¹⁶О може да се изрази като отклонение d 0/00 на отношението спрямо стойността на изотопното отношение на международния еталонен образец V.SMOW

2. Принцип

Изотопното отношение ¹⁸О/¹⁶О се определя чрез масова спектрометрия на изотопните отношения (МСИО) от йонен ток m/z 46 (¹²C¹⁶O¹⁸O) и m/z 44 (¹²C¹⁶O₂), генериран от въглероден диоксид, получен след обмен с водата във виното, в съответствие с реакцията:

C¹⁶O₂ + H₂¹⁸O <======> C¹⁶O¹⁸O + H₂¹⁶O.

Въглеродният диоксид в газова фаза се използва за анализ.

3. Реактиви

- въглероден диоксид за анализ;

- SMOW (стандартна средна океанска вода);

- GISP (Greenland Ice Sheet Precipitation);

- SLAP (Standard Light Arctic Precipitation);

- вода за сравнение, специфична за лабораторията, внимателно стандартизирана по отношение на еталонния образец на Международната агенция за атомна енергия във Виена (IAEA).

4. Лабораторно оборудване

- масспектрометър за изотопни отношения със собствена повторяемост 0,05 ‰;

- троен колектор за едновременно регистриране на йони с m/z 44, 45 и 46 или - по подразбиране - двоен колектор за измерване на йони с m/z 44 и 46;

- термостатна система (± 0,5°C) за реализиране на равновесие между CO₂ и водното съдържание във виното;

- вакуумна помпа, която е в състояние да достигне вътрешно налягане 0,13 (Pa);

- ампули за проби с обем 15 ml и капилярна добавъчна тръбичка с вътрешен диаметър около 0,015 mm;

- пипета на Епендорф с пластмасова конична част за еднократна употреба.

5. Експериментални методи

5.1. Ръчен метод

Работен режим на равновесния метод

Вкарване на пробата

- Взема се пипета на Епендорф с фиксиран обем 1,5 ml, поставя се конична част и се изпомпва анализираната течност, за да бъде вкарана в балонна колба. След това се нанася силиконова смазка около гърлото на балонната колба, тя се прикрепя към вентила, като едновременно с това се проверява дали той е затворен плътно.

- Процедурата се повтаря за всяка балонна колба от работната рампа, като в един от балоните се налива лабораторната вода за сравнение.

Дегазиране на рампата

Двете рампи се охлаждат с течен азот, след което чрез отваряне на вентилите цялата система се продухва до 0,1 mm Hg.

След това вентилите се затварят и се оставя да се нагрее. Цикълът на дегазиране се повтаря, докато не изчезнат промените в налягането.

Привеждане на водата и CO₂ в равновесие:

Работната рампа се охлажда до минус 70°C (смес от течен азот и алкохол), за да може водата да замръзне, след което рампата се поставя в условия на вакуум. След стабилизиране на вакуума рампата се изолира чрез задействане на вентила и активиране системата за вкарване на CO₂. CO₂ се вкарва в работната рампа и след като е изолирана от останалата част на системата - рампата се поставя в термостатна вана при 25°C (± 0,5°C) в продължение на 12 h (една нощ). За да се оптимизира процесът по отношение на времето, необходимо за привеждане в равновесие, препоръчително е да се приготвят пробите в края на деня, за да може през нощта да се установи равновесие.

Прехвърляне на CO₂, обменен в мерителните клетки

На празен ред непосредствено до работната рампа се поставя поставка за пробите, в която има толкова мерителни клетки, колкото са балонните колби, съдържащи обменен CO₂. Празните клетки внимателно се продухват и обменените газове, съдържащи се в балоните, се прехвърлят един след друг в мерителните клетки, охладени с течен азот. След това мерителните клетки се оставят да се нагреят до стайна температура.

5.2. Използване на апаратура за автоматичен обмен.

За да се получи равновесие, ампулите за пробите се пълнят с 2 ml вино или 2 ml вода (лабораторен работен еталонен образец) и се охлаждат до минус 18 °C. Плъзгачите с пробите, съдържащи замразените продукти, се адаптират към равновесната система и след създаване на вакуум в системата се вкарва въглероден диоксид при налягане 800 хектопаскала (hPa).

Балансът се постига при температура 22 ± 0,5°C след минимален период от 5 h, при умерено разбъркване. Тъй като времето на установяване на равновесие зависи от геометрията на ампулите, оптималната продължителност трябва да се определи най-напред за използваната система.

След това съдържащият се в ампулите въглероден диоксид се прехвърля във въвеждащата камера на масовия спектрометър с помощта на капилярна тръбичка и измерването се извършва съгласно специфичния протокол за конкретния вид оборудване.

6. Изчисления и изразяване на резултатите

Относителната разлика d' на интензитетите на йоните m/z 46 и 44 (I₄₆/I₄₄) между пробите и еталонния образец се изчислява с помощта на формулата

Съдържанието на ¹⁸О в пробите, сравнено с еталона V.SMOW на скалата V.SMOW/SLAP, се изчислява по формулата

Приетата за SLAP стойност е равна на 55,5 0/00 в сравнение с V.SMOW. Изотопното отношение на еталонния образец се определя след всяка серия от 10 измервания на неизвестни проби.

7. Точност:

- повторяемостта	r е 0,24 0/00.
- възпроизводимостта	R е 0,50 0/00.

44. Определяне на етилкарбамат във виното: селективни методи на анализ с използване на газова хроматография/масспектрометрия

(Приложими за определяне на етилкарбамат при концентрация между 10 и 200 mg/l.)

(Внимание! Спазват се изискванията за безопасност при работа с химикали, етилов алкохол, ацетон и канцерогенни продукти (етилкарбамат и дихлорметан). Изхвърлянето на използваните разтворители трябва да се извършва съгласно действащите разпоредби, свързани с околната среда.)

А. Принцип

Пропил карбамат се добавя към образци, използвани като вътрешен стандарт; разтворът се разрежда с вода и се зарежда в 50-милиметрова екстракционна колона за твърда фаза. Етилкарбаматът и пропилкарбаматът се елюират с дихлорметан.

Елюатът се концентрира във вакуумен ротационен изпарител. Концентратът се анализира чрез газова хроматография (GC). Детектирането се извършва чрез масспектрометрия с използване на фрагментометрия в SIM (селективно регистриране на йони).

Б. Апаратура и хроматографски условия (пример)

а) Газова хроматограма/масспектрометър (GC/MS) и при необходимост филтър за пробите и система за обработка на данните или еквивалентни средства.

Капилярна колона от кварц с размери: дължина 30 m (При определени много гъсти вина може да се предпочете използването на капилярна колона от 50 m.) и вътрешен диаметър 0,25 mm на Carbowax 20M.

Хроматографски условия: температура на инжектора - 180°C; скорост на газа (хелий) - един милилитър на минута; метод на инжектиране - директно.

Температурна програма: 40°C за 0,75 min, нарастваща след това с 10°C/min до 60°C, след това с 3 °C/min до 150°C (При определени много гъсти вина може да се предпочете прилагането на температурна програма 2 °C/min.), покачване до 220°C и поддържане на тази температура в продължение на 4,25 min . Специфичното време на задържане за етилкарбамата е 23 - 27 min, а за пропилкарбамата - 2 - 31 min.

Интерфейс на газова хроматография/масспектрометър (GC/MS): трансферна линия 220°C.

Параметрите на масспектрометъра се настройват ръчно с перфлуоротрибутиламин и се оптимизират за по-ниска чувствителност по отношение на масата, режим на SIM регистриране, време на задържане на разтворителя и началото на хроматограмата - 22 min, време на задържане / йон 100 ms.

б) Вакуумен ротационен изпарител или концентрираща система, подобна на Kuderna Danish.

Забележка. Аналитичният добив на етилкарбамата от пробите за анализ C (g) трябва да бъде между 90 и 110 % по време на анализа.

в) Колба - облодънна с обем 300 ml, с единично шлифовано гърло.

г) Епруветка - 4 ml, градуирана, със свързващ елемент, който е покрит с тефлон, с тапа.

В. Реактиви

а) Ацетон - качество GC.

Забележка. Всяка партида преди използване се проверява в газовия хроматограф / масспектрометър (GC/MS) за липса на чувствителност за йони с m/z 62, 74 и 89.

б) Дихлорометан.

Забележка. Преди използване всяка партида се проверява в газовия хроматограф/ масспектрометър (GC/MS) след 200-кратна концентрация с цел проверка за липса на чувствителност за йони с m/z 62, 74 и 89.

в) Етилов алкохол - безводен.

г) Етилкарбамат (EC), стандартни разтвори.

1. Изходен разтвор - 1,00 mg/ml. Претеглят се 100 mg EC (чистота ³ 99%), наливат се в мерителна колба с обем 100 ml и се разреждат с ацетон.

2. Стандартен работен разтвор - 10,0 mg/ml. Пресипва се един милилитър изходен разтвор на EC в мерителна колба с обем 100 ml и се разрежда с ацетон до марката.

д) Пропилкарбамат (PC), стандартни разтвори:

1. Изходен разтвор - 1,00 mg/ml. Претеглят се 100 mg PC (чистота ³ 99%), прехвърлят се в мерителна колба с обем 100 ml и се разреждат с ацетон до марката.

2. Стандартен работен разтвор - 10,0 mg/ml. Прехвърля се един милилитър изходен разтвор на PC в мерителна колба с обем 100 ml и се разрежда с ацетон до марката.

3. Разтвор PC - 400 ng/ml, вътрешен стандартен разтвор. Прехвърлят се 4 ml стандартен работен разтвор на PC в мерителна колба с обем 100 ml и се разреждат с ацетон до марката.

е) Стандартни калибрирани разтвори EC - PC.

Разреждат се стандартен работен разтвор EC буква "г", т. 2 и стандартен работен разтвор PC буква "д", т. (2) с дихлорометан, за да се получат:

1. (100 ng EC и 400 ng PC)/ ml;

2. (200 ng EC и 400 ng PC)/ ml;

3. (400 ng EC и 400 ng PC)/ ml;

4. (800 ng EC и 400 ng PC)/ ml;

5. (1600 ng EC и 400 ng PC)/ ml.

ж) Проба за анализ - 100 ng EC/ml в 40% етилов алкохол.

Пресипва се един милилитър стандартен работен разтвор EC буква "г", т. 2 в мерителна колба 100 ml и се разрежда с 40 % етилов алкохол до марката.

з) Екстракционна колона за твърда фаза - материал за еднократна употреба, предварително запълнена с диатомит(кизелгур), вместимост 50 ml.

Забележка. Преди анализа се проверява всяка партида екстракционни колони за възстановяване на EC и PC и за липса на чувствителност за йони с m/z 62, 74 и 89. Приготвя се проба за анализ със 100 ng EC/ml, буква "ж". Прави се анализ на 5,00 ml от пробата, както е описано в букви Г ("а"), Д и Е. Възстановяването на 90 - 110 ng EC/ml е достатъчно. Абсорбенти, чиито частици се характеризират с неравномерен диаметър, могат да предизвикат бавен поток, който да повлияе на възстановяването на EC и PC. Ако след няколко опита не бъдат получени 90 до 110 % от стойността за анализираната проба, колоната се сменя или се използва коригирана калибровъчна крива на възстановяването, за целите на количественото определяне на EC. За да се получи коригирана калибровъчна крива, се приготвят стандартни разтвори, както е описано в буква "е", чрез използване на 40% етилов алкохол, вместо дихлорометан.

Прави се анализ на един милилитър от стандартния калибровъчен разтвор, както е описано в букви Г, Д и Е.

Създава се нова калибровъчна крива чрез използване на съотношението EC/РС на екстрахираните стандарти.

Г. Приготвяне на пробата за анализ

Поставят се следните обеми вещество за анализ в две отделни чаши с обем 100 ml за преливане:

а) вина, съдържащи над 14 об.% алкохол - 5,00 ± 0,01 ml;

б) вина, съдържащи максимум 14 об.% алкохол - 20,00 ± 0,01 ml.

Към всяка чаша се добавя един милилитър PC разтвор, служещ за вътрешен стандарт,както е описано в буква В("д") (т. 3), и вода, за да се получи общ обем 40 ml (или 40 g).

Д. Екстракция

Екстракцията се извършва под капака на екстрактора, с необходимата вентилация.

Пробата, приготвена съгласно буква Г, се поставя в екстракционната колона. Чашата се изплаква с 10 ml вода и изплакващата вода се излива в колоната. Оставя се течността да бъде абсорбирана в продължение на 4 min. Елюира се с 2 x 80 ml дихлорометан. Елюатът се събира в конична колба с обем от 300 ml. Елюатът се изпарява до 2 - 3 ml в ротационен изпарител с водна баня при 30°C. (Забележка. Не се оставя да ври до изсъхване.) Концентрираният остатък се прехвърля с пипета на Пастьор в градуирана епруветка от 4 ml. Колбата се изплаква с един милилитър дихлорометан и се прелива в епруветката изплакващата вода. Концентрацията на пробата се увеличава до един милилитър чрез слаб азотен поток. Концентратът се премества в колба за автоматично пробовземане за GC/MS анализ.

Е. GC/MS анализ

а) Калибровъчна крива

Инжектира се един микролитър от всеки стандартен калибровъчен разтвор, описани в буква B("e") в GC/MS. Начертава се графика, като по вертикалната ос се отчита отношението на площите EC-PC за регистрираните йони m/z 62, а по хоризонталната ос - количеството EC в нанограма за милилитър (100, 200, 400, 800, 1600 ng/ml).

б) Количествено определение на EC

В системата GC/MS се инжектира един микролитър концентриран екстракт, приготвен съгласно буква Д, и се изчислява отношението на площите EC-PC за йони m/z 62. Установява се концентрацията на EC нанограма за милилитър в екстракта чрез използване на калибровъчната крива на вътрешния стандарт. Изчислява се концентрацията на EC в пробата за анализ (ng/ml) чрез разделяне на количеството EC нанограми (ng) в екстракта на обема на пробата за анализ (ml).

в) Потвърждение на идентичността на етилкарбамата

Определя се дали има регистриране на йони с m/z 62, 74 и 89 по време на периода на задържане на ЕС. Регистрирането на тези йони е свързано - съответно с основните фрагменти (M - C₂H₂)+ и (M - CH₃)+ и молекулните йони (M)+. Наличието на EC се потвърждава, ако относителните съотношения на тези йони са в границите на 20% от съотношенията за стандартните образци EC. Може да е необходимо допълнително увеличаване на концентрацията на екстракта, за да се получи достатъчно добра чувствителност за йони m/z 89.

Ж. Съвместен анализ

Таблицата показва отделни резултати за използван на практика образец и за двата вида вино. Критерият на Кохран води до елиминирането само на една двойка резултати - за вино с алкохолно съдържание над 14 об.% и за вино с алкохолно съдържание 14 об.% или по-малко - от две различни лаборатории.

Относителната възпроизводимост (RSDR) се характеризира с намаление при увеличение на концентрацията на етилкарбамата.

Характеризиране на метода за определяне на етилкарбамат в спиртни напитки чрез GC/MS (газ/мас).

Проба	Средна	Аналитичен	Sr	SR	RSDr	RSDR
	проба	добив за			(%)	(%)
	етилкарбамат,	добавката
	намерено в	от етил-
	(ng/ml)	карбамат
		(%)
Вина с	40		1,59	4,77	4,01	12,02
алкохолно	80	89	3,32	7,00	4,14	8,74
съдържание	162	90	8,20	11,11	5,05	6,84
> 14 об.%
Вина с	11		0,43	2,03	3,94	18,47
алкохолно	25	93	1,67	2,67	6,73	10,73
съдържание	48	93	1,97	4,25	4,10	8,86
<= 14 об.%

Приложение № 5 към чл. 29, ал. 1 и 4

МЕТОДИ ЗА АНАЛИЗ НА СПИРТ И СПИРТНИ НАПИТКИ

1. Определяне алкохолното съдържание

(обикновен метод)

1. Определение

Обемният алкохолен градус е равен на литрите алкохол, съдържащи се в 100 l спиртна напитка, като съответните обеми са измерени при 20°С.

2. Начин на работа

Алкохолното съдържание на спирт се определя със спиртомер или ареометър и корекционни алкохолометрични таблици (метод "3. Определяне алкохолното съдържание" към приложение № 3).

2. Оценка на цвета и бистротата на спирт

1. Цел на метода

Методът позволява да се оценят цветът и бистротата на неутралния алкохол.

2. Определение

Под цвят и бистрота се разбират цветът и бистротата, определени по процедурата, описана в т. 5 на метода.

3. Принцип

Цветът и бистротата се оценяват визуално чрез сравнение с вода на бял фон и на черен фон.

4. Апаратура - безцветни епруветки с дължина най-малко 40 cm.

5. Начин на работа

На бял и черен фон се поставят две епруветки (съгласно т. 4); в една от епруветките се поставя определено количество от пробата на височина около 40 cm; в другата епруветка се сипва вода до същата височина. Пробата се наблюдава отгоре, по дължината на оста на епруветката и се сравнява с еталона.

6. Изразяване на резултатите

Оценяват се цветът и бистротата на пробата, като се наблюдава по начина, описан в т. 5.

3. Определяне на времето за обезцветяване на разтвор от калиев перманганат

1. Цел на метода

Методът цели да се определи времето, за което неутрален алкохол обезцветява разтвор на калиев перманганат.

2. Определение

Времето за обезцветяване на разтвор на калиев перманганат, определено по описания метод, е броят на минутите, за които оцветяването на пробата се изравнява с това на еталона след добавката на един милилитър разтвор на калиев перманганат, с концентрация 1 mmol/l в проба от 10 ml.

3. Принцип

Определя се времето, за което цветът на пробата след добавянето на разтвор на калиев перманганат се уеднаквява с този на еталона, като това време се назовава време за обезцветяване на разтвор на калиев перманганат.

4. Реактиви

4.1. Разтвор на калиев перманганат с концентрация един милимол на литър. Разтворът трябва да бъде приготвен непосредствено преди употреба.

4.2. Оцветяващ разтвор А (червен):

- Претеглят се точно 59,50 g (CoCl₂.6H₂O).

- Приготвя се смес, съставена от 25 ml солна киселина (r_20°C = 1,19 g/ml) и 975 ml вода.

- Поставя се претегленото количество кобалтов дихлорид и част от сместа в мерителна колба с обем 1000 ml и се долива с остатъка от сместа до марката при температура от 20°C.

4.3. Оцветяващ разтвор Б (жълт):

- Претеглят се точно 45,00 грама (FeCl₃.6H₂O).

- Приготвя се смес от 25 ml солна киселина (HCl) (r_20°C = 1,19 g/ml) и 975 ml вода, след което с количеството железен трихлорид се постъпва както с претегленото количество кобалтов дихлорид при оцветяващия разтвор А.

4.4. Еталон за оцветяване

С пипета се вземат 13 ml от оцветяващия разтвор А и 5,5 ml от оцветяващия разтвор Б и се поставят в мерителни колби с обем 100 ml, след което при температура 20°C се добавя вода до марката.

Забележка.

Оцветяващите разтвори А и Б могат да бъдат запазени в продължение на повече от месец, като се съхраняват при температура 4°C и защитени от светлина. Еталонът за оцветяване трябва да бъде приготвян периодично на определени интервали от време.

5. Апаратура

5.1. Епруветки тип Nessler от 100 ml от прозрачно безцветно стъкло, градуирани до 50 ml, със запушалка от шлифовано стъкло или обикновени епруветки, безцветни, с диаметър 20 mm.

5.2. Пипети от 1, 2, 5, 10 и 50 ml.

5.3. Термометър, измерващ до 50°C, градуиран през 0,1 или 0,2°C.

5.4. Аналитична везна.

5.5. Термостатична вана при 20 ± 0,5°C.

5.6. Мерителни колби с обем 1000 и 100 ml с шлифовани запушалки.

6. Начин на работа

С пипета се вземат 10 ml от пробата и се поставят в обикновена епруветка или в епруветка тип Nessler;

- поставят се в термостатична вана при 20°C;

- в зависимост от количеството на използваната проба се добавят 1 - 5 ml от разтвор на KMnO₄ (1 mmol/l), смесва се и се оставя в термостатичната вана при 20°C;

- отбелязва се началният момент;

- с пипета се вземат 10 ml от контролния разтвор и се поставят в обикновена епруветка със същия диаметър или 50 ml от контролния разтвор в епруветка тип Nessler;

- наблюдава се промяната на цвета на пробата и се сравнява от време на време на бял фон с цвета на еталона;

- когато цветът на пробата се уеднакви с този на контролния разтвор, се определя времето, изтекло от началния момент.

Забележка. По време на опита анализираният разтвор не трябва де се излага на прякото въздействие на слънчева светлина.

7. Отчитане на резултатите

7.1. Изразяване на резултатите

Времето за обезцветяване е времето, за което цветът на епруветката, съдържаща пробата, се уеднакви с това на контролната епруветка. При неутрален алкохол продължителността трябва да бъде най-малко 18 min при температура 20°C.

7.2. Повторяемост

Разликата във времената за обезцветяване при два опита, извършени едновременно или непосредствено един след друг с една и съща проба от един и същ анализатор при еднакви условия, не трябва да надвишава 2 min.

8. Бележки

8.1. Следи от манганов диоксид оказват катализиращ ефект върху реакцията. Необходимо е използваните пипети и епруветки да бъдат грижливо почистени и да са били използвани само за тази цел. Да се почистят със солна киселина и изплакнат внимателно с вода. Стъклото не трябва да има никаква следа от жълто оцветяване.

8.2. Необходимо е да се контролира качеството на водата, използвана за приготвяне на разредения разтвор на калиев перманганат (т. 4.1). Тя не трябва да абсорбира калиев перманганат. Ако е невъзможно да се постигне необходимото качество, трябва да се нагрее до кипване дестилираната вода и към нея да се прибави неголямо количество калиев перманганат, така че да се получи леко розово оцветяване. Този разтвор трябва да се охлади, за да се използва за разреждане.

8.3. При някои проби обезцветяването може да се извърши, без да се преминава точно през същия нюанс на контролния разтвор.

8.4. Опитът с калиев перманганат може да бъде опорочен, ако алкохолната проба, която се анализира, не е била съхранявана в абсолютно чисто стъклено шише, затворено със запушалка от шлифовано стъкло, промита с алкохол, или с друга запушалка с калаено или алуминиево покритие.

4. Определяне на съдържанието на алдехиди (обикновен метод)

1. Цел на метода

Методът се състои в определяне на съдържанието на алдехиди в неутралния алкохол, изразено като ацеталдехид.

2. Определение

Количеството на алдехидите, изразени като ацеталдехид, се определя по описания метод.

3. Принцип на метода

Цветът, който придобива пробата след реакцията с реактива на Schiff, се сравнява с цвета на контролните разтвори, имащи установено съдържание на ацеталдехид.

4. Реактиви

- Хлорхидрат на р-розанилин (фуксинова основа).

- Натриев сулфит или натриев метабисулфит, безводен.

- Солна киселина (r_20°C = 1,19 g/ml).

- Активен въглен на прах.

- Разтвор на нишесте, приготвен от един грам разтворимо нишесте и 5 g HgI₂ (съхраняван), от които се образува суспензия в малко хладка вода. Смесват се с 500 ml вряща вода, подложени на кипене в продължение на 5 min. След това разтворът се филтрира и охлажда.

- Разтвор на йод 0,05 mole/l.

- Амино-етанол [CH₃CH(NH₂)OH] (МG 61.08).

Приговяне на реактива на Schiff (Шиф):

- разтварят се 5,0 g хлорхидрат на р-розанилин с около 1000 ml топла вода в мерителна колба с обем 2000 ml;

- при необходимост се оставя да престои във вана до пълно разтваряне;

- разтварят се 30 g натриев сулфит (или същото количество натриев метабисулфит, безводен) в около 200 ml вода и се добавя към охладения разтвор на

р-розанилин;

- оставя се да престои около 10 min;

- добавят се 60 ml солна киселина (r_20°C = 1,19 g/ml);

- след обезцветяването на разтвора е възможна появата на слабо оцветяване в кафяво - разтворът се долива до марката с вода;

- ако е необходимо, се филтрира през нагънат филтър с малко активен въглен, така че разтворът да стане безцветен.

Бележки:

• Реактивът на Schiff трябва да бъде приготвен поне 14 дни преди използването му.

• Съдържанието на свободен SO₂ в реактива трябва да бъде в рамките на 2,8 - 6,0 mmole/100 ml, а pH трябва да бъде 1.

Определяне на съдържанието на свободен SO₂

Вземат се с пипета 10 ml от реактива на Schiff и се поставят в Ерленмайерова колба с обем 250 ml; добавя се 200 ml вода; добавя се 5 ml нишестен разтвор; титрува се с помощта на йоден разтвор (0,05 mole/l) до оцветяване на нишестето; ако съдържанието на свободен SO₂ не е в указаните граници, той трябва или да се приведе до приемлива стойност чрез повишаването му с добавка на необходимото количество натриев метабисулфит (0,126 g Na₂SO₃/100 ml) от реактива на милимол-липсващ SO₂, или да се понижи чрез разбъркване на реактива с вкарване на въздух.

Изчисляване на свободния SO₂ в реактива:

- милимол свободен SO₂/100 ml от реактива е равен на:

	ml от консумирания йоден разтвор (0,05mol/l•3,2•100)
=	----------------------------------------------------------------
	64•10
	ml от консумирания йоден разтвор (0,05mol/l)
=	-----------------------------------------------------------------
	2

Важна бележка.

В случай че бъдат възприети други начини за приготвяне на реактива на Schiff, е необходимо да се провери чувствителността на реактива, която трябва да бъде такава, че по време на опита:

- не трябва да се появява никакво оцветяване при опит на празна проба с освободен от алдехиди неутрален алкохол;

- розовото оцветяване трябва да бъде забележимо при наличие на 0,1 g ацеталдехид/хектолитър абсолютен алкохол.

• Пречистване на търговски продукт 1-амино-етанол:

Разтварят се напълно 5 g 1-амино-етанол в около 15 ml чист етанол; добавят се около 50 ml сух диетилов етер (за утаяване 1-амино-етанол); поставя се в хладилна камера в продължение на няколко часа; филтрират се кристалите и се изплаква със сух диетилов етер; суши се в продължение на 3 - 4 h във вакуумна сушилня в присъствието на сярна киселина.

Забележка. Пречистеният 1-амино-етанол да e бял; в противен случай е необходимо да се повтори кристализацията.

5. Апаратура

5.1. Епруветки за колориметрия 20 ml, снабдени със запушалка от шлифовано стъкло.

5.2. Пипети от 1, 2, 3, 4, 5 и 10 ml.

5.3. Термостатична вана при 20 ± 0,5°C.

5.4. Абсорбционен спектрофотометър, оборудван с кювети с оптичен път 50 mm.

6. Начин на работа

6.1. Предварителна забележка.

Когато се определя съдържанието на алдехид по този метод, е необходимо да се следи съдържанието на алкохол от пробата да бъде минимум 90,0 об.%. В противен случай съдържанието на алкохол следва да се повиши с добавка на съответно количество химически чист етанол.

6.2. Контролна крива.

Претеглят се на аналитична везна 1,3860 g пречистен сух 1-амино-етанол; разтваря се в химически чист етанол в мерителна колба с вместимост от 1000 ml; допълва се до марката с вода при температура 20°C; разтворът съдържа 1% ацеталдехид на литър; провежда се серия от разреждания на два етапа, така че да се получат 10 контролни разтвора със съдържание от 0,1 - 1,0 mg ацеталдехид в 100 ml от разтвора; с помощта на тези контролни разтвори в съответствие с т. 6.3 се определят абсорбционните стойности и се изготвя крива.

6.3. Определяне на съдържанието на алдехиди.

С пипета се вземат 5 ml от мострата и се поставят в епруветка за колориметрия; добавят се 5 ml вода, смесват се и се държат при постоянна температура от 20°C; едновременно се приготвя контрола с 5 ml 96 об.% химически чист етанол, прибавят се 5 ml вода, смесват се и се държат също при температура от 20°C; след това се добавят всеки път по 5 ml от реактива на Schiff в епруветките с шлифована запушалка и се разклащат силно; държат се в термостатична вана при 20°C в продължение на 20 min; съдържанието се излива в кювети; абсорбционната стойност се определя при 546 nm.

Бележки:

• За да се определят стойностите на алдехидите, е необходимо при всеки анализ да се проверява валидността на контролната крива чрез сравняване с разтвори образци и при необходимост се изготвя отново контролната крива.

• При всеки случай трябва да се следи контролата да бъде безцветна.

7. Отчитане на резултатите

7.1. Формула и метод за изчисляване

Изготвя се графика, показваща отклоненията в оптическата плътност в зависимост от съдържанието на алдехид, и на тази графика се определя съдържанието на алдехиди в пробата.

Съдържанието на алдехиди, изразено в грамове ацеталдехид на хектолитър абсолютен алкохол, е

100А

--------,

където:

А е съдържанието на ацеталдехид в пробата, изразено в g/hl, чиято стойност е определена по контролната крива;

Т - алкохолното съдържание в об.%, определено по метод "3. Определяне алкохолното съдържание" към приложение № 3.

7.2. Повторяемост

Разликата между резултатите от две определяния, извършени едновременно или непосредствено едно след друго, от един и същ анализатор, върху една и съща проба, при еднакви условия, не трябва да надвишава 0,1 g алдехид на хектолитър абсолютен алкохол.

5. Определяне на съдържанието на висши алкохоли (обикновен метод)

1. Цел на метода

Отнася се за метод за определяне на съдържанието на висши алкохоли в неутралния алкохол, изразено като метил-2-пропанол-1.

2. Определение

Количеството на висшите алкохоли, изразено като метил-2-пропанол-1, се определя по описания метод.

3. Принцип

Определя се оптическата плътност на цветно съединение при 560 nm, с корекция в случай на наличие на алдехиди в пробата. При взаимодействието на висшите алкохоли с ароматен алдехид с разредена сярна киселина се получава цветно съединение (реакция на Комаровски), което се сравнява с оцветяването, получено от реакцията с метил-2-пропанол-1 при същите условия.

4. Реактиви

4.1. Разтвор на салицилов алдехид един тегловен %, приготвен чрез добавяне на един грам салицилов алдехид към 99 g химически чист етанол при 96 об. %.

4.2. Концентрирана сярна киселина (r_20°C Н₂SO₄ = 1,84 g/ml).

4.3. Метил-2-пропанол-1.

4.4. Контролни разтвори на метил-2-пропанол-1.

Във воден разтвор на етанол при 96 об.% се разрежда метил-2-пропанол-1 (т. 4.3), за да се получи серия от контролни разтвори, съдържащи съответно по 0,1, 0,2, 0,4, 0,6 и 1,0 g/hl метил-2-пропанол-1 от разтвора.

4.5. Контролни разтвори на ацеталдехид.

Контролният разтвор на ацеталдехид се приготвя, както е описано в т. 6.2 за определяне на алдехиди.

4.6. Етанол при 96 об.%, химически чист, свободен от висши алкохоли и алдехиди.

5. Апаратура

5.1. UV-VIS-спектрофотометър, позволяващ да се определи абсорбирането на разтвори при 560 nm.

5.2. Кювети за спектрофотометри с дебелина 10, 20 и 50 mm.

5.3. Регулируема термостатична вана при температура 20 ± 0,5°C.

5.4. Лабораторни съдове за колориметрия (от огнеупорно стъкло или друг подобен материал) от дебелостенно стъкло, снабдени с шлифована запушалка, с капацитет около 50 ml.

6. Начин на работа

6.1. Съдържание на алдехиди.

Определя се съдържанието на алдехиди в пробата, изразени като ацеталдехид, по метод 4 "Определяне на алдехиди (обикновен метод).

6.2. Контролна крива - метил-2-пропанол-1.

С пипета се отмерват 10 ml от всеки контролен разтвор на метил-2-пропанол-1 (т. 4.4) и се поставят в епруветки от 50 ml, снабдени със запушалки от шлифовано стъкло. С пипета се отмерва един милилитър от разтвора на салицилов алдехид (т. 4.1) и се поставя в съдовете; добавят се 20 ml сярна киселина (т. 4.2). Внимателно се смесва съдържанието на съдовете чрез обръщане, като от време на време запушалката се повдига. Оставя се да престои при нормална стайна температура в продължение на 10 min, след това се поставя в термостатична вана (т. 5.3) при температура 20 ± 0,5°C. След 20 min съдържанието на съдовете се изсипва в кюветите на спектрофотометъра. Точно 30 min след като е добавена сярна киселина се определя абсорбирането на разтворите при 560 nm. Сравняването се прави спрямо вода в контролната кювета. На графика се нанасят стойностите на абсорбирането в зависимост от концентрацията на метил-2-пропанол-1.

6.3. Контролна крива - алдехиди.

Повтаря се описаната в т. 6.2 операция, като 10-те ml от всеки от контролните разтвори на метил-2-пропанол-1 се заменят с 10 ml от контролните разтвори на ацеталдехид. Изобразяват се в графичен вид стойностите на абсорбирането при 560 nm в зависимост от концентрацията на ацеталдехид.

6.4. Определяне на пробата.

Повтаря се описаната в т. 6.2 операция, като 10-те ml от всеки от контролните разтвори на метил-2-пропанол-1 се заменят с 10 ml от пробата. Определя се абсорбирането на пробата.

7. Отчитане на резултатите

7.1. Формула и метод за изчисляване

7.1.1. Стойността на абсорбиране на пробата се коригира, като се извади стойността на абсорбиране, съответстваща на съдържанието на алдехиди на мострата (определено въз основа на контролната крива, съставена съобразно т. 6.3).

7.1.2. Съдържанието на висши алкохоли, изразени като метил-2-пропанол-1, в пробата се коригира с помощта на контролната крива, съставена съобразно т. 6.2, като се използва коригираната стойност (7.1.1).

7.1.3. Съдържанието на висши алкохоли, изразени като метил-2-пропанол-1 в грамове на хектолитър (g/hl) абсолютен алкохол, е

100А

--------,

където:

А е съдържание на висши алкохоли в пробата, изчислено съгласно т. 7.1.2;

Т - алкохолното съдържание на пробата, определено по метода "3. Определяне алкохолното съдържание" на приложение № 3.

7.2. Повторяемост

6. Определяне на общата киселинност

1. Цел на метода

Методът дава възможност за определяне на общата киселинност на неутрален алкохол, изразена като оцетна киселина.

2. Определение

Общата киселинност, изразена като оцетна киселина, се определя по описания метод.

3. Принцип

След отделяне на газовете пробата се титрува с помощта на еталонен разтвор на натриев хидроксид.

4. Реактиви

4.1. Разтвори на натриев хидроксид (0,01 и 0,1 mole/l), съхранявани при условия, позволяващи редуциране до минимум контакта с въглероден диоксид.

4.2. Разтвор на индигов кармин (А): претеглят се 0,2 g индигов кармин; разтварят се в 40 ml вода в колба с обем 100 ml и се допълват с етанол до марката.

Разтвор на фенолруж (Б): претеглят се 0,2 g фенолруж; разтварят се в 6 ml натриев хидроксид (0,1 mole/l) в мерителна колба с обем 100 ml. Разтворът се довежда до марката с вода.

5. Апаратура

5.1. Стъкленица или апарат за титруване.

5.2. Пипета 100 ml.

5.3. Облодънна колба с обем 250 ml с шлифована запушалка.

5.4. Обратен хладник с шлифована запушалка.

6. Начин на работа

В облодънна колба с обем 250 ml с пипета се поставят 100 ml от пробата; прибавят се стъклени перли, ускоряващи кипенето, и за кратко се подлага на кипене на обратен хладник; в топлия разтвор се добавя по една капка от всеки от разтворите А и Б. Титрува се с натриев хидроксид (0,01 mole/l) до момента на преминаване на зеленожълтия цвят във виолетов.

7. Отчитане на резултатите

7.1. Формула и метод за изчисляване

Общата киселинност, изразена като оцетна киселина в грамове на хектолитър абсолютен алкохол, е

60V

--------,

където:

V са милилитрите разтвор на натриев хидроксид при 0,01 mole/l, необходими за неутрализиране;

Т е алкохолното съдържание, определено по метода "3. Определяне алкохолното съдържание" към приложение № 3.

7.2. Повторяемост

7. Определяне на съдържанието на естери (обикновен метод)

1. Цел на метода

Методът се състои в определяне на съдържанието на естери в неутрален алкохол, изразено като етилацетат.

2. Определение

Количеството на естерите, изразени като етилацетат, се определя по описания метод.

3. Принцип

В присъствието на хидроксиламин хидрохлорид в алкален разтвор естерите реагират в количествено отношение, за да образуват хидроксаминови киселини, които в присъствието на железни йони в киселинен разтвор образуват оцветени съединения. Измерват се оптичните плътности на тези съединения при 525 nm.

4. Реактиви

4.1. Солна киселина при 4 mol/l.

4.2. Разтвор на ферихлорид 0,37 mole/l в солна киселина 1 mole/l.

4.3. Разтвор на хидроксиламин хидрохлорид (2 mol/l), който се съхранява в хладилна камера.

4.4. Разтвор на натриев хидроксид при 3,5 mol/l.

4.5. Контролни разтвори на етилов ацетат, съдържащи съответно 0,0, 0,2, 0,4, 0,6, 0,8 и 1,0 g етил ацетат в хектолитър химически чист етанол при 96 об.%.

5. Апаратура - абсорбционен спектрофотометър, оборудван с кювети с дебелина 50 mm.

6. Начин на работа

6.1. Калибровъчна крива: С аналитична везна се отмерва един грам етилов ацетат; разтваря се в мерителна колба с обем 1000 ml с етанол, освободен от естери, и се допълва до марката при температура 20°С; провеждат се серия от разреждания на два етапа, така че да се получат 20 контролни разтвора със съдържание от 0,1 до 2,0 mg етилов ацетат на 100 ml разтвор; с помощта на тези контролни разтвори се определят стойностите на екстинкциите съгласно т. 6.2 и се изготвя крива.

6.2. Определяне съдържанието на естер: С пипета се вземат 10 ml от пробата и се поставят в епруветка, снабдена с шлифована запушалка; добавят се 2 ml от разтвора на хидроксиламин хидрохлорида; едновременно се приготвя контрола с 10 ml химически чист етанол при 96 об.% с 2 ml хидроксиламин хидрохлорид; след това се добавят всеки път по 2 ml натриев хидроксид в епруветки с шлифована запушалка и се разклащат силно; държат се в термостатична вана при 20°C в продължение на 15 min; добавят се по 2 ml солна киселина във всяка епруветка и се разклаща за кратко време; добавят се 2 ml разтвор на железен трихлорид и се размесва добре; съдържанието се излива в кювети и се определя стойността на екстинкцията при 525 nm.

7. Изразяване на резултатите

7.1. Изчисление

Построява се стандартна крива на оптичните плътности и концентрацията на еталонните разтвори. Съдържанието на естери, изразено като етилацетат = А, в зависимост от абсорбцията се отчита върху кривата и е

100А
------- ,	g/hl абсолютен алкохол,
Т

където:

Т е алкохолното съдържание на пробата, определено по метод "3. Определяне на алкохолното съдържание" към приложение № 3.

7.2. Повторяемост

Разликата между резултатите от две определяния, извършени едновременно или непосредствено едно след друго, от един и същ анализатор, върху една и съща проба, при еднакви условия, не трябва да надвишава 0,1 g естери, изразени като етилацетат в хектолитър абсолютен алкохол.

8. Определяне съдържанието на летливи азотни вещества в спирт

1. Цел на метода

Методът се състои в определяне на съдържанието на летливи азотни вещества в неутрален алкохол, изразено като азот.

2. Определение

Съдържанието на летливи азотни вещества се изразява като азот, определен по описания метод.

3. Принцип на метода

Основава се на изпаряване на пробата до получаването на малък обем в присъствието на сярна киселина и след това се определя съдържанието на амоняк по метода на микродифузията на Conway.

4. Реактиви

4.1. Сярна киселина, един mole/l.

4.2. Разтвор индикатор на борна киселина:

В мерителна колба с обем 1000 ml се разтварят 10 g борна киселина, 8 mg зелен бромкрезол и 4 mg метил в пропанол-2 с концентрация 30 об.% и се допълва до 1000 ml чрез добавка на пропанол-2 с концентрация 30 об.%.

4.3. Разтвор на калиев хидроксид 500 g/l, свободен от карбонат.

4.4. Солна киселина, 0,02 mole/l.

5. Апаратура

5.1. Изпарителна капсула с достатъчен капацитет за получаване на проба 50 ml.

5.2. Водна баня.

5.3. Съд на Conway, оборудван с херметичен капак: вж. фигурата за описанието и препоръчителните размери.

5.4. Микробюрета с вместимост от 2 до 5 ml, градуирана през 0,01 ml.

6. Начин на работа

6.1. С пипета се вземат 50 ml от пробата (ако се предвижда съдържание на азот под 0,2 g/hl от мострата, се вземат 200 ml), които се поставят в стъклена капсула, добавя се един милилитър сярна киселина един мол на литър (т. 4.1), поставя се капсулата (т. 5.1) във водна баня (т. 5.2) и се изпарява до получаването на остатък от около един милилитър.

6.2. С пипета се взема един милилитър от разтвора индикатор на борна киселина (т. 4.2), поставя се във вътрешния съд на реактора на Conway (т. 5.3) и се изплаква течният остатък от изпаряването (т. 6.1) във външния съд. Леко се наклонява реакторът на Conway и се добавя около един милилитър разтвор на калиев хидроксид (т. 4.3) във външния съд, колкото се може по-бързо, но и възможно по-далече от цялата съдържаща се течност в този външен съд. Веднага се затваря съдът на Conway и се покрива с херметичен капак, намазан с вазелин.

6.3. Двата разтвора се смесват във външния съд, като се внимава да не проникне течност от единия съд в другия. Оставя се да престои в продължение на 2 h.

6.4. Амонякът се титрува във вътрешния съд с помощта на разтвор на солна киселина 0,02 mole/l (т. 4.4), като се използва малка стъкленица (т. 5.4) за неутрализацията. Обемът на използваната киселина трябва да бъде от порядъка от 0,2 до 0,9 ml - V1,l.

6.5. Извършва се повторно дозиране, като се повтарят описаните в т. 6.1 до 6.4 операции, като се заменят посочените в т. 6.1 50 ml от пробата със същия обем вода - V2, ml.

7. Отчитане на резултатите

7.1. Формула и метод за изчисляване

Съдържанието на летливи азотни вещества в грамове азот на хектолитър абсолютен алкохол е

(V1 - V2)2800

---------------- ,

E•T

където:

V₁ е обемът на солната киселина, необходим за неутрализиране на пробата, ml;

V₂ - обемът на солната киселина, използвана при празната проба, в ml;

Т - алкохолното съдържание, определено по метода "3. Определяне алкохолното съдържание" на приложение № 3;

Е - обемът на използваната проба, ml.

7.2. Повторяемост

Разликата между резултатите от две определяния, извършени едновременно или непосредствено едно след друго от един и същ анализатор, върху една и съща проба, при еднакви условия, не трябва да надвишава 0,05 g/hl абсолютен алкохол.

Фиг. 1. Реактор на Conway

9. Определяне на съдържанието на метанол

1. Цел на метода

Методът се състои в определяне на съдържанието на метанол в неутралния алкохол.

2. Определение

Съдържанието на метанол се определя по описания метод.

3. Принцип

Концентрацията на метанол се определя чрез директно впръскване на пробата в хроматограф при газообразно състояние.

4. Начин на работа

Подходящ е всеки метод на газово-течна хроматография, при положение че хроматографската колона в газообразно състояние позволява да се получи, при възприетите условия на действие, ясно отделяне на различните съставки: метанол, ацеталдехид, етанол и етилов ацетат. Лимитът за наличие на метанол в етанола трябва да бъде под 2 g/hl.

5. Повторяемост

Разликата между резултатите от две определяния, извършени едновременно или непосредствено едно след друго, от един и същ анализатор, върху една и съща проба, при еднакви условия, не трябва да надвишава 2 g метанол на хектолитър абсолютен алкохол.

10. Определяне на сух екстракт

1. Цел на метода

Методът се състои в определяне на сухия екстракт в неутрален алкохол.

2. Определение

Съдържание на сух екстракт е съдържанието на сухо вещество, определено по описания метод.

3. Принцип

Част от пробата се изсушава при температура 103°С и се определя концентрацията на остатъка по метода на гравиметрията.

4. Апаратура

4.1. Водна баня, вряща.

4.2. Изпарителна капсула с достатъчен капацитет.

4.3. Апарат за изсушаване, съдържащ прясно активиран силициев гел (или еквивалентен сикатив), съоръжен с хигрометричен индикатор.

4.4. Аналитична везна.

4.5. Камера за сушене, с регулираща се температура от 103 ± 2°C.

5. Начин на работа

Чиста и суха изпарителна капсула (т. 4.2) се измерва с точност до една десета от милиграма (М₀); с пипета се поставя неколкократно подходящ обем от пробата в капсулата (от 100 до 250 ml) (V₀ ml); поставя се капсулата, съдържаща пробата, във вряща водна баня (т. 4.1) и се оставя да се изпари; поставя се в камерата за изсушаване (т. 4.5), регулирана при температура 103 ± 2°С, в продължение на 30 min, после в апарат за изсушаване (т. 4.3) се поставя капсулата, съдържаща остатъка; капсулата се оставя да се охлади в продължение на 30 min в ексикатор, след което се измерва с точност до една десета от милиграма капсулата, съдържаща остатъка (М₁).

6. Отчитане на резултатите

6.1. Формула и метод за изчисляване

Съдържанието на сух остатък, изразено в грамове на хектолитър етанол при 100 об.%, е

където:

M₀ е масата на чистата и суха капсула, g;

M₁ - масата на капсулата, съдържаща остатъка след изсушаване, g;

V₀ - обемът на мострата, подложена на изсушаване;

T - алкохолното съдържание на пробата, определено по метода "3. Определяне алкохолно съдържание" на приложение № 3.

6.2. Повторяемост

Разликата между резултатите от две определяния, извършени едновременно или непосредствено едно след друго, от един и същ анализатор, върху една и съща проба, при еднакви условия, не трябва да надвишава 0,5 грама на хектолитър абсолютен алкохол.

11. Установяване на отсъствието на фурфурал в спирт

1. Цел на метода

Методът цели откриването на наличие на фурфурал в неутралния алкохол.

2. Определение

Граничната стойност на определения фурфурал е тази, определена по описания метод.

3. Принцип

Алкохолната проба се смесва с анилин и ледена оцетна киселина. Появата на бледорозово оцветяване в рамките на 20 min след смесването показва наличието на фурфурал.

4. Реактиви

4.1. Прясно дестилиран анилин.

4.2. Ледена оцетна киселина.

5. Апаратура - епруветки с шлифовани запушалки.

6. Начин на работа. В епруветка (т. 5) с пипета се вкарват 10 ml от пробата, добавят се 0,5 ml анилин и 2 ml ледена оцетна киселина; епруветката се разклаща, за да се смесят реактивите.

7. Отчитане на резултатите

7.1. Интерпретиране на опита

Ако до 20 min се появи бледорозово оцветяване, опитът се счита за положителен, т.е. пробата съдържа фурфурал.

7.2. Повторяемост

Резултатите от два опита, извършени едновременно или непосредствено един след друг, от един и същ анализатор, върху една и съща проба, при еднакви условия, трябва да бъдат идентични.

12. Тест за абсорбиране на ултравиолетова светлина

1. Цел на метода

Този метод позволява да се определи оптичната пропускливост на неутралния алкохол.

2. Принцип

Оптичната пропускливост на пробата във вълновия обхват 220 - 270 nm се измерва по отношение на определено контролно вещество, притежаващо голяма оптична пропускливост.

3. Апаратура

3.1. Спектрофотометър UV-VIS.

3.2. Кювети от кварц с дебелина 10 mm за идентична спектрална трансмисия

4. Реактиви - n-хексан за спектроскопия.

5. Начин на работа. Предварително се изплакват чистите кювети с разтвор на пробата, после се пълни пробата и кюветите се изсушават отвън; контролната кювета (n) се третира с n-хексан по същия начин и се напълва; определя се стойността на гасене и се построява графика.

6. Отчитане на резултатите

Стойностите на гасене, констатирани при 270, 240, 230 и 220 nm, не трябва да надвишават стойностите: 0,02, 0,08, 0,18 и 0,3. Кривата на гасенето трябва да има гладък и правилен контур.

13. Определяне на съдържанието на C¹⁴ в спирта

1. Процедура за определяне на естеството на алкохола

Определянето на съдържанието на C¹⁴ в етанола позволява да се направи разграничение между синтетичния алкохол и алкохола, получен чрез ферментация на суровини от земеделски произход.

2. Определение

Под съдържание на C¹⁴ в етанола се разбира съдържанието на C14, определено по описания метод.

Естественото съдържание в атмосферата на C¹⁴ (контролна стойност), който се асимилира от живите растения, не е постоянна величина. Поради това контролната стойност се определя на базата на етанола, получаван само от суровини в крайните фази на растеж. Тази контролна стойност, наречена годишна контролна стойност, се определя ежегодно чрез съвместни анализи, организирани от Бюрото за контрол на Общността и Изследователския център в Испра.

3. Принцип

Съдържанието на C¹⁴ се определя директно чрез броене посредством течна сцинтилация на пробите, съдържащи алкохол с най-малко 85 тегловни процента етанол.

4. Реактиви

4.1. Сцинтилатор с толуол - 5,0 g 2,5-дифенилоксазол (РРО); 0,5 g p-bis [4-метил-5-фенилоксазол (2)]-бензен (диметил-РОРОР) в един литър чист толуол, химически чист за анализ.

Сцинтилатори с рафиниран толуол с този състав, предлагани в търговската мрежа и готови за употреба, също могат да бъдат използвани.

4.2. C¹⁴ - еталон.

C14 n-хексадекан с активност около 1•10⁶ dpm/g [около 1,67•10⁶ сBq/g (стотни от бекерела на грам)] и с гарантирана точност на определената активност от ± 2 % отн.

4.3. Етанол, свободен от C¹⁴.

Синтетичен алкохол на база изкопаеми суровини с минимум 85 масови процента етанол за определяне на нулевия ефект.

4.4. Алкохол от земеделски произход, с минимум 85 тегловни процента етанол, в качеството му на сравнителен разтвор.

5. Апаратура

5.1. Спектрометър за течна сцинтилация с множество канали с компютър, автоматична външна стандартизация и показания на условията на канала външен стандарт (обикновена конструкция с три измервателни канала и два канала външни стандарти).

5.2. Флакони за броене със слабо съдържание на калий, пригодени за апаратурата, снабдени с тъмни винтови тапи с вътрешно защитно покритие от полиетилен.

5.3. Пипети за обемен анализ 10 ml.

5.4. Автоматичен дозатор 10 ml.

5.5. Облодънна колба 250 ml с шлифт.

5.6. Апаратура за дестилация на алкохол, оборудвана с купол, например от типа Micko.

5.7. Микролитрова спринцовка 50 ml.

5.8. Фуния за пикнометър, пикнометри 25 и 50 ml.

5.9. Термостат за постоянна температура с отклонение ± 0,01°С.

5.10. Практически алкохолометрични таблици (метод "3. Определяне алкохолното съдържание" към приложение № 3).

6. Начин на работа

6.1. Настройване на апаратурата

Апаратурата трябва да се настройва съобразно инструкциите на производителя. Условията за измерване са оптимални, когато стойността E₂/B, наречена значим фактор, е максимална.

Е е рандеман

B - шум от фона

Само два канала за измерване се поставят при оптимален режим. Третият измервателен канал остава напълно отворен с цел контрол.

6.2. Селекция на флаконите за контрол

По-голям брой флакони за контрол от тези, изисквани впоследствие, се напълват с по 10 ml синтетичен етанол, свободен от С¹⁴, и с по 10 ml сцинтилатор с рафиниран толуол и измерени най-малко 4 x 100 min. Флаконите, които с шум от фона се отклоняват с повече от ± 1 отн.% от средната стойност, трябва да се отстранят. При селекцията трябва да се използват единствено нови флакони за контрол, произхождащи от една и съща партида.

6.3. Определяне на съотношението канал - външен стандарт (RCSE)

При регулиране на канала, извършено съгласно т. 6.1, едновременно с изчисляването на коефициента за ефективност с помощта на съответна програма за изчисление се определя и съотношението канал - външен стандарт (RCSE). За външността е целесъобразно да се използва цезий 137, който вече е поставен от производителя.

6.4. Изготвяне на пробата

За целите на измерването се прибягва до проби със съдържание на етанол от минимум 85 тегловни %, без примеси и показващи абсорбиране под 450 nm. Незначителният остатък от алдехиди и естери не води до отклонения. След изхвърлянето на първите милилитри дестилат дестилацията се извършва директно в пикнометър, след което с помощта на пикнометър се измерва съдържанието на алкохол. Стойностите за определяне се вземат от официалните таблици за алкохола (т. 5.10).

7. Измерване на пробите с вътрешен стандарт

7.1. Пробите със слабо абсорбиране като тези, описани в т. 6.4, със стойност около 1,8 могат да бъдат измерени посредством съотношението канал - външен стандарт (RCSE), което съставлява мярка за коефициента на ефективност.

7.2. Начин на работа

Всеки път с помощта на пипета в подбрания флакон за броене, контролиран за шум на фона, се вкарват по 10 ml от пробата, изготвена съгласно т. 6.4, след което всеки път се добавят по 10 ml от сцинтилатора с рафиниран толуол с помощта на автоматичния дозатор. Пробите се хомогенизират в контролния флакон чрез въртене, като се внимава течността да не навлажни вътрешното защитно покритие от полиетилен на винтовата тапа. За да се определи шумът на фона, се приготвя по същия начин контролен флакон със синтетичен етанол, свободен от С¹⁴. За да се провери годишната стойност на С¹⁴, се приготвя двойна доза естествен етанол, произхождащ от суровини в крайна фаза на развитие, като се смеси един флакон за броене с вътрешен стандарт съгласно т. 8.

Контролните проби, както и пробите за шум от фона трябва да се поставят в началото на серията от измервания. Серията от измервания не трябва да включва повече от 10 проби за анализ. Общата продължителност на измерванията за всяка проба е 2 x 100 min минимум, като измерванията на отделните проби се извършват на полуетапи от по 100 min всеки един, за да може да се идентифицира евентуално отклонение или друго смущение. (По този начин един цикъл включва всеки път за всяка проба интервал 100 min.) Пробите за шум от фона или контролните проби се подновяват след 4 седмици.

Тази процедура за измерване изисква малко материали и време. Тя е подходяща за лаборатории с достатъчен опит, изследващи голям брой проби.

При пробите със слабо абсорбиране (съотношение канал - външен стандарт около 1,8) рандеманът е слабо повлиян от модифицирането на тази стойност. Когато това модифициране не надвишава ± 5 тегловни %, изчисляването може да се извърши със същия рандеман. При пробите с по-силно абсорбиране, като например при денатурираните алкохоли, рандеманът може да бъде изчислен чрез т.нар. крива за корекция на абсорбирането. Ако лабораторията не разполага с подходяща програма за изчисляване, трябва да се измерва с вътрешен стандарт, който ясно определя рандемана.

8. Измерване на пробите с вътрешен стандарт хексадекан С¹⁴

8.1. Начин на работа

Контролните проби и пробите за шум от фона (естествен и синтетичен етанол), както и неизвестният материал да бъдат измерени двойно. За целта да се приготви двойна проба в неподбран флакон, към който е добавено точно дозирано количество (30 микролитра) хексадекан С¹⁴ като вътрешен стандарт (допълнителна активност около 26 269 dpm/g С (около 43 782 сBq/g C). За подготовката на другите образци и времена за измервания е целесъобразно да се процедира, както е указано в т. 7.2, като пробите с вътрешен стандарт са с време за измерване, ограничено до около 5 min чрез предварително настройване с 105 импулса. Чрез серия измервания (10 проби) да се приготвят всеки път двойни контролни проби и проби за шума от фона, които да бъдат поставяни в началото на серията от анализи.

8.2. Използване на вътрешния стандарт и контролните флакони

При измерванията с вътрешен стандарт е необходимо с цел предотвратяване на замърсяването съхранението и манипулацията на тези стандарти да се осъществяват на друго място, различно от това на приготвянето и измерването на пробите за анализ. След измерването контролираните флакони за шум от фона могат да бъдат повторно използвани. Винтовите тапи и флаконите, съдържащи вътрешните стандарти, да бъдат изхвърлени.

9. Оценка

9.1. Мерната единица за активност на едно радиоактивно вещество е бекерелът:

един Bq = един разпад/сек.(един Bq = един desintegration/sec)

Специфичната радиоактивност се изразява в бекерели спрямо един грам въглерод = Bq/g C. За да се получат стойности, близки до действителните, препоръчително е да се отчете резултатът в стотни от бекерела - cBq/g C.

Обозначенията и формулите за изчисляване, посочени досега в публикациите и които са базирани на данните dpm, могат да бъдат запазени засега. За да се получи съответната стойност в стотни от бекерела, е достатъчно резултатът dpm да се умножи с коефициент

100

---- .

9.2. Оценка с външен стандарт

9.3. Оценка с вътрешен стандарт

9.4. Означения:

- cpm_pr - средната стойност на получените резултати при броене на пробите, изчислена през цялото времетраене на измерванията;

- cpm_NE - средната стойност на получените резултати при броене на шума от фона, изчислена по същия начин;

- cpm_IS - резултатът при броенето на пробите, с наличен вътрешен стандарт;

- dpm_IS - количеството на добавения вътрешен стандарт (контролна радиоактивност dpm);

- V - обемът на използваните проби, ml;

- F - съдържанието чист алкохол, в зависимост от концентрацията му, g/ml;

- Z - коефициент за ефективност според стойността на съотношението канал - външен стандарт;

- 1,918 = грама алкохол/един грам въглерод.

10. Точност на метода

10.1. Повторяемост (r)

r = 0,632 cBq/g С; s_(r) = ± 0,223 cBq/g C

10.2. Възпроизводимост (R)

R = 0,821 cBq/g С; s_(R) = ± 0,290 cBq/g C

14. Определяне на обемното алкохолно съдържание на спиртни напитки (сравнителен метод)

Въведение

Сравнителният метод е предмет на две приложения:

Приложение I - Подготовка на дестилата.

Приложение II - Измерване плътността на дестилата.

1. Област на приложение

Методът е подходящ за определяне на реалното обемно алкохолно съдържание на спиртни напитки.

2. Нормативи: БДС EN ISO 3696:2000 Лабораторна вода за приложение при анализи. Спецификация и пробни методи.

3. Термини и определения

3.1. Сравнителна температура

Сравнителната температура за определяне на обемното алкохолно съдържание на плътността и на относителната плътност на спиртните напитки е 20°С.

Забележка 1. Запазва се изразът "при t°С" за определенията, изразени в температура, различна от сравнителната температура 20°С.

3.2. Плътност

Плътността е масата на определен обем от спиртната напитка при 20°С, разделена на обема на напитката. Тя се изразява в килограми на кубичен метър и символът ѝ е "r_20°C" или "r₂₀".

3.3. Относителна плътност

Относителната плътност (относителното тегло) е отношението, изразено като десетично число (отчита се до първия знак след запетаята) на плътността на спиртните напитки при 20°С към плътността на водата при същата температура. Тя се обозначава със символа "d_20°C/20°C" или само с "d_20/20", ако това няма да доведе до объркване. Относителната плътност се изразява в анализните свидетелства само с един от двата символа.

Забележка 2. Възможно е да се получи относителна плътност от плътността r₂₀ при 20°С:

r₂₀ = 998,203 d_20/20, или d_20/20 = r₂₀/998,203

където 998,203 е плътността на водата при 20°С.

3.4. Реално обемно алкохолно съдържание

Реалното обемно алкохолно съдържание на спиртните напитки е равно на литрите етилов алкохол, съдържащи се в 100 литра водноалкохолна смес, със същата плътност като спиртната напитка, след дестилация. Таблиците, даващи стойността на обемното алкохолно съдържание (об.%) при 20°С като функция от плътността при 20°С на водноалкохолни смеси, са таблици I, II и III на метод "3. Определяне алкохолното съдържание" на приложение № 3.

3.5. Общото уравнение, свързващо обемното алкохолно съдържание на водноалкохолните смеси с определена температура, е посочено в метод "3. Определяне алкохолното съдържание" на приложение № 3 и в Сборник за методите за анализ на Международната организация по лозата и виното (1994).

Забележка 3. В случаите на ликьори и емулсионни спиртни напитки, за които е трудно да се измери точен обем, пробата се претегля и най-напред се изчислява алкохолното съдържание по маса.

Формула за превръщане:

където:

ТАМ е тегловното алкохолно съдържание;

r₂₀ (алкохол) = 789,24 kg/m³.

4. Принцип

След дестилация обемното алкохолно съдържание на дестилата се определя пикнометрично чрез електронна денситометрия или чрез денситометрия с хидростатична везна.

Приложение I: Подготовка на дестилата

1. Област на приложение

Методът е подходящ за подготовка на дестилати, използвани за определяне на реалното обемно алкохолно съдържание на спиртните напитки.

2. Принцип

Спиртните напитки се дестилират, за да се отделят "екстрактните материали" (компоненти, които не подлежат на дестилация) на етиловия алкохол и други летливи компоненти.

3. Реактиви и материали

3.1. Гранули (перли) против изпръскване.

3.2. Концентрирана емулсия против пенене (за емулсионните спиртни напитки).

4. Апаратура и материали

Стандартно лабораторно оборудване:

4.1. Водна баня с възможност да поддържа температура 10 - 15°С. Водна баня с възможност да поддържа температура 20°С ± 0,2°С.

4.2. Мерителни колби клас А, 100 и 200 ml, сертифицирани съответно до ± 0,1 и 0,15%.

4.3. Дестилационен апарат:

4.3.1. Общи изисквания: използваният дестилационен апарат трябва да отговаря на следните характеристики:

• ограничен брой връзки за осигуряване на водонепропускливост на системата;

• приспособление за избягване увличането на вода от парата при кипене и за регулиране дебита на дестилация на парите с високоалкохолно съдържание;

• бързо и пълно кондензиране на алкохолните пари;

• улавяне на първите фракции на дестилата във водна среда.

Източникът на топлина трябва да притежава способност за дифузия на топлината за избягване преминаването на пирогени с извличаните компоненти.

4.3.2. Подходящият примерен дестилационен апарат, показан на фигурата, отговарящ на посочените изисквания, включва: облодънна колба с обем 1 l, със стандартен шлиф; ректификационна колона с височина минимум 20 cm (например колона на Vigreux); извита връзка с около 10 cm прав хладник (хладник тип West), монтиран вертикално; охлаждаща серпентина с дължина 40 cm; тръбичка с изтеглен край, довеждаща дестилата на дъното на градуирана събирателна колба, напълнена с малко вода.

Забележка. Описаният апарат е предназначен за проби най-малко от 200 ml. По-малки проби (100 ml) могат да се дестилират, като се използва по-малка дестилационна колба, снабдена с устройство против изпръскване или друго устройство, предпазващо течността от увличане.

5. Съхраняване на пробите за изпитване - при стайна температура преди анализа.

6. Начин на работа

6.1. Проверка на дестилационния апарат

Използваният апарат за дестилация трябва да отговаря на изискването. При дестилацията на 200 ml водноалкохолен разтвор с известна концентрация, близо до 50 об.%, не трябва да има загуба на алкохол над 0,1 об.%.

6.2. Спиртни напитки с алкохолно съдържание, по-ниско от 50 об.%

Проба от спиртната напитка се отмерва в мерителна колба 200 ml. Отчита се температурата на течността или се поддържа стандартна температура (20°С). Пробата се прехвърля количествено в дестилационната колба на апарата, като мерителната колба се промива с три обема дестилирана вода по около 20 ml всяка. Всяка промивка се добавя към съдържанието на дестилационната колба.

Забележка. Това разреждане от 60 ml е достатъчно за спиртни напитки, съдържащи по-малко от 250 g/l сух екстракт. В другия случай за избягване на пиролиза обемът на промивната вода е най-малко 70 ml, ако концентрацията на сухия екстракт е 300 g/l; 85 ml - за 400 g/l сух екстракт; 100 ml - за 500 g/l сух екстракт (някои плодови ликьори или емулсионни спиртни напитки). Тези обеми се определят пропорционално на обемите на отделните проби. Добавят се няколко стъклени перли и антипенител за емулсионните спиртни напитки и ликьори. В мерителната колба 200 ml, която ще се използва за приемане на дестилата, се прибавят 20 ml дестилирана вода, след това колбата се поставя в охлаждаща водна баня (4.1) (10 - 15°С за анасонови спиртни напитки). Дестилира се внимателно, като колбата се разбърква от време на време, докато нивото на дестилата достигне няколко милиметра под марката на мерителната колба.

Когато температурата на този дестилат се намали до около ± 0,5°С от началната температура на течността, колбата се долива до марката с дестилирана вода и се хомогенизира. Този дестилат се използва за определяне на обемното алкохолно съдържание (приложение II).

6.3 Спиртни напитки с алкохолно съдържание над 50 об.%

В мерителна колба 100 ml се отмерват 100 ml от спиртната напитка и се преливат в облодънната колба на дестилационния апарат. Мерителната колба се промива неколкократно с дестилирана вода за количествено прехвърляне, като съдържанието от промиването се добавя в колбата за дестилация на апарата. Използва се достатъчно количество промивна вода до довеждане на обема в дестилационната колба до около 230 ml.

В мерителната колба от 200 ml, която се използва за приемане на дестилата, се прибавят 20 ml дестилирана вода. Колбата се поставя след това в охлаждаща водна баня (4.1) (10 - 15°С за анасонови спиртни напитки). Дестилира се, разклащайки от време на време съдържанието на колбата, докато нивото на дестилата достигне няколко милиметра под калибрационната марка на мерителната колба от 200 ml. Когато температурата на този дестилат се намали до около ± 0,5°С от началната температура на течността, колбата се долива до марката с дестилирана вода и се хомогенизира. Този дестилат се използва за определяне на обемното алкохолно съдържание (приложение II).

Забележка. Обемното алкохолно съдържание на спиртната напитка е два пъти по-високо от това на дестилата.

Приложение II:

Измерване на плътността на дестилата

А.1. Принцип

Обемното алкохолно съдържание се получава на база на измерената с пикнометър плътност на дестилата.

А.2. Реактиви и материали

По време на анализа, освен ако не е предвидено друго, се използват реактиви с известна аналитична чистота и вода минимум от 3 клас, както е дефинирано в стандарт БДС EN ISO 3696:2000.

А.2.1. Разтвор на натриев хлорид [2 % (m/V)].

За приготвянето на един литър се претеглят 20 g натриев хлорид, които се разтварят до един литър във вода.

А.3. Апаратура и оборудване

Използва се обичайното лабораторно оборудване, както следва:

А.3.1. Аналитична везна с точност 0,1 mg.

A.3.2. Термометър с шлифт, градуиран в десети от градуса, в обхват 10 - 30°С. Този термометър трябва да е със сертификат или да е проверен в сравнение със сертифициран такъв.

А.3.3. Стъклен пикнометър от стъкло PYREX с обем 100 ml, снабден с подвижен термометър с шлифт (A.3.2). Пикнометърът е снабден със странична тръбичка с дължина 25 mm и вътрешен диаметър 1mm (максимум), завършваща с конична шлифована част. Могат да се използват и други пикнометри, например от 50 ml, описани в стандарт БДС ISO 3507:1995.

А.3.4. Предварително претеглено шише със същия външен обем (до 1 ml разлика) в сравнение с обема на пикнометъра и с маса, равна на масата на пикнометъра, напълнен с течност с плътност 1,01 (разтвор на натриев хлорид А.2.1).

А.3.5. Водна риза, обхващаща точно тялото на пикнометъра.

Забележка 1. Методът за определяне на плътността на спиртните напитки във вакуум изисква двублюдна везна, пикнометър и тарирано шишенце със същия външен обем с оглед елиминиране въздушното течение във всеки момент. Тази проста техника може да се приложи, използвайки едноблюдна везна, като теглото на тарираното шише многократно се измерва и се усредняват промените от въздушното течение по време на измерването.

А.4. Начин на работа

Предварителни забележки

Следващата процедура се отнася до използването на пикнометър от 100 ml за определяне на алкохолното съдържание, даваща най-голяма прецизност. Възможно е използването и на пикнометър с по-малък размер, например 50 ml.

А.4.1. Еталониране на пикнометъра

Пикнометърът се еталонира чрез определяне на параметрите:

- тара на празния пикнометър;

- обем на пикнометъра при 20°С;

- маса на пълния пикнометър с вода при 20°С.

А.4.1.1. Еталониране с едноблюдна везна

Определят се:

- масата на чист и сух пикнометър P;

- масата на пълния с вода пикнометър при t°С, P₁;

- масата на тарираното шише, Т₀.

А.4.1.1.1. Претегля се чистият и сух пикнометър P.

А.4.1.1.2. Пикнометърът се пълни с дестилирана вода със стайна температура и се поставя термометърът. Пикнометърът се поставя във водната риза. Разклаща се чрез обръщане на балона до отчитане на постоянна температура. Нивото на пикнометъра се изравнява по горния ръб на страничната тръбичка. Отчита се температурата, t°С, и при неточност в температурната скала се коригира. Претегля се пикнометърът, напълнен с вода P₁.

A.4.1.1.3. Претегля се тарираното шишенце (Т₀).

А.4.1.1.4. Изчисление

- Тарата на празния пикнометър = P - m,

където m е масата на въздуха в пикнометъра.

m = 0,0012(P₁ - P)

Забележка 2. Плътността на сухия въздух при 20°С при атмосферно налягане 760 mm Hg е 0,0012.

• Обемът на пикнометъра при 20°С V_20°С - (с точност до 0,001 ml) се определя по формулата

V_20°С = [P₁ - (P - m)]F_t,

където:

F_t е факторът, отнасящ се за температура t°С от таблица I на метод "1. Определяне плътността и относителната плътност при 20°С" към приложение № 3.

• Масата (теглото) на водата в пикнометъра при 20°С:

M_20°С = 0,998203 V_20°С,

където 0,998203 е плътността на водата при 20°C.

Забележка 3. Ако е необходимо, се използват плътността във въздуха (0,99715) и изчисленото алкохолно съдържание спрямо плътността във въздуха, посочена в таблиците на митниците и акцизите на Обединеното кралство.

А.4.1.2. Еталониращ метод с използване на двублюдна везна.

А.4.1.2.1. Тарираното шишенце се поставя върху лявото блюдо, а сухият чист пикнометър със запушалката - на дясното блюдо. Везната се уравновесява чрез поставяне на теглилки от страната на пикнометъра - p, g.

А.4.1.2.2. Пикнометърът се напълва с дестилирана вода със стайна температура и се поставя термометърът.Пикнометърът се подсушава и се поставя във водната риза. Разклаща се чрез обръщане на балона до отчитане на постоянна температура.

Нивото на пикнометъра се изравнява точно по горния ръб на страничната тръбичка. Подсушава се страничната тръбичка, поставя се запушалката, отчита се температурата t°С и при неточност в температурната скала се коригира.

Пикнометърът се претегля пълен с вода; - р', g (теглото, с което се уравновесява везната).

А.4.1.2.3. Изчисление

• Тарата на празния пикнометър = p + m,

където m е масата на въздуха в пикнометъра

m = 0,0012 (p - p')

• Обемът на пикнометъра при 20°C, който се изчислява с точност до 0,001 ml по формулата:

V_20°C = F_t(p + m - p'),

където F_t е факторът за t°С в таблица I на метод "1. Определяне плътността и относителната плътност при 20°С" на приложение № 3.

• Масата на водата в пикнометъра при 20°С:

M_20°C = 0,998203 V_20°C,

където 0,998203 е плътността на водата при 20°C.

А.4.2. Определяне на алкохолното съдържание на пробата

А.4.2.1. С използване на едноблюдна везна

А.4.2.1.1. Претегля се тарираното шишенце - T₁ (масата му).

А.4.2.1.2. Претегля се пълният с дестилат пикнометър (вж. приложение I) - P₂ (масата му при t°С).

А.4.2.1.3. Изчисление

- dT = T₁ - T₀

• Масата на празния пикнометър в момента на измерване = P - m + dT

• Масата на течността, съдържаща се в пикнометъра при t°С = P₂ - (P - m + dT)

• Плътността при t°С, в g/ml

- Плътността при t°С се изразява в kg/m³, като се умножи r_t°С по 1000. Тази стойност се означава катo r_t.

- r_t се коригира с помощта на таблиците за плътностите r_t на водноалкохолни смеси (таблица II от приложение II на Сборника за методите за анализ на OIV - Международната организация за лозата и виното 1994, стр. 17 до 29). В хоризонталния ред на тази таблица, съответстващ на температурата Т (изразена като цяло число), непосредствено под температурата t°С, се на мира най-ниската плътност, по-голяма от r_t. Отчита се табличната разлика, непосредствено под тази плътност, за да се изчисли плътността r_t на спиртната напитка при тази температура, изразена в цели градуси. В реда на температурата Т се намира плътността r' непосредствено по-висока от r_t, и се изчислява разликата между плътностите r_t и r'. Тази разлика се разделя на табличната разлика, вдясно от плътността r'. Частното дава десетичната част от алкохолното съдържание, а цялата част на алкохолното съдържание е посочена отгоре на колоната, в която се намира плътността r' (алкохолното съдържание е D_t).

Забележка 4. Възможно е също така да се запази пикнометърът във водна баня при 20°С ± 0,2°С, за да се доведе до марката.

А.4.2.1.4. Резултат

С помощта на плътността r₂₀ се изчислява действителното алкохолно съдържание, като се използват таблици I, II и III на метод "3. Определяне алкохолното съдържание"към приложение № 3, даващи стойността на обемното алкохолно съдържание (об.%) при 20°С, като функция от плътността при 20°С на водноалкохолни смеси.

А.4.2.2. Метод с използване на едноблюдна везна

А.4.2.2.1. Претегля се пикнометърът, пълен с приготвения дестилат (вж. част I) - р'' (масата при t°С).

А.4.2.2.2. Изчисление

• Масата на течността, съдържаща се в пикнометъра, при t°С =p + m - p''

• Плътността при t°С, в g/ml

• Плътността при t°С се изразява в kg/m³ и температурата се коригира, за да се изчисли алкохолното съдържание при 20°С при използване на едноблюдна везна.

А.5 Характеристики на точността на метода.

А.5.1 Статистически резултати от междулабораторни изпитвания

Посочените в таблицата данни са резултат от международно изпитване на точността на метода, проведено при съблюдаване на международно установените начини на работа (1) и (2).

Година на вземане на междулабораторни	1997
проби
Брой лаборатории	20
Брой проби	6

Тип проби:

А - плодов ликьор; двойни с различно съдържание*

В - бренди; двойни произволни

C - уиски; двойни произволни

D - гроздова ракия; двойни с различно съдържание*

Е - ракия; двойни с различно съдържание*

F - ром; двойни с различно съдържание

Метод В: Определяне на действителното обемно алкохолно съдържание на спиртните напитки чрез определяне на плътността по електронен път (измерване на резонансната честота на осцилация на пробата в осцилираща кювета)

В.1. Принцип

Плътността на течността се определя чрез електронно измерване на трептенето на вибрираща U-образна тръбичка. За извършване на измерването пробата се поставя в осцилираща система, чиято специфична честота на осцилация се променя в резултат на прибавената маса.

В.2. Реактиви и материали

По време на анализа, ако не е посочено друго, се използват само реактиви с известна аналитична чистота и вода минимум от клас 3, както е дефинирано в стандарт БДС EN ISO 3696:2000.

В.2.1. Ацетон (или абсолютен алкохол).

В.2.2. Сух въздух.

В.3. Апаратура и оборудване

Обичайно лабораторно оборудване и в частност следното:

В.3.1. Електронен денситометър, отчитащ резултата от измерването в g/ml до петия знак след десетичната запетая.

Забележка 1. Денситометърът трябва да е поставен върху изключително стабилен постамент, изолиран от всякакви вибрации.

В.3.2. Регулиране на температурата

Оптималният режим на работа на денситометъра се постига само при свързване на измервателната кювета към вграден регулатор на температурата, постигащ стабилност на температурата от ± 0,02°С или по-добра.

Забележка 2. Прецизното установяване и контролът на температурата в измерващата кювета е много важно, тъй като грешка от 0,1°С може да доведе до промяна в плътността от 0,1 kg/m³.

В.3.3. Спринцовки за инжектиране на проба или уред за автоматично въвеждане на проби.

В.4. Начин на работа

В.4.1. Еталониране на денситометъра

Апаратът трябва да е еталониран в съответствие с инструкциите на производителя още при въвеждането му в експлоатация. Трябва да се рекалибрира редовно и да се проверява със сертифициран еталон или вътрешен лабораторен разтвор, приготвен на базата на сертифициран сравнителен стандарт.

В.4.2. Определяне на плътността на пробата

В.4.2.1. Преди измерването кюветата се почиства и подсушава с ацетон или абсолютен алкохол и сух въздух. Преди инжектиране кюветата се промива с пробата.

В.4.2.2. Пробата се инжектира в кюветата (като се използва спринцовка или уред за автоматично въвеждане на проби), така че тя да е изцяло запълнена. При пълненето се елиминират всякакви въздушни мехурчета. Пробата трябва да е хомогенна и да не съдържа твърди частици. Всякакви суспендирани частици преди анализа чрез филтруване се отстраняват.

В.4.2.3. След като се стабилизират показанията на денситометъра, се отчитат плътността r₂₀ или алкохолното съдържание.

В.4.3. Резултат

С помощта на плътността r₂₀ се изчислява действителното обемно алкохолно съдържание, като се използват таблици I, II и III на метод "3. Определяне алкохолното съдържание" към приложение № 3, даващи стойността на обемното алкохолно съдържание (об.%) при 20°С, като функция от плътността при 20°С на водоалкохолни смеси.

В.5. Характеристики на възпроизводимостта (точността) на метода

В.5.1. Статистически резултати от междулабораторния тест

Данни, получени по международно разработен метод за пручване на точността, осъществени в съответствие с международно възприетите процедури (1) и (2).

Година на вземане на междулабораторни	1997
проби
Брой лаборатории	16
Брой проби	6

Тип проби:

А - плодов ликьор; двойни с различно съдържание*

В - бренди; двойни произволни

C - уиски; двойни произволни

D - гроздова ракия; двойни с различно съдържание*

Е - ракия; двойни с различно съдържание*

F - ром; двойни с различно съдържание*

Метод С: Определяне действителното обемно алкохолно съдържание на спиртните напитки чрез денситометрия, използваща хидростатична везна

С.1. Принцип

Алкохолното съдържание на спиртните напитки може да бъде определено денситометрично с помощта на хидростатична везна въз основа на принципа на Архимед, съгласно който всяко тяло, потопено в течност, е обект на противоналягане в посока отдолу нагоре, равно на теглото на изместената течност.

С.2. Реактиви и материали

По време на анализа, ако не е предписано друго, да се използват само реактиви с познато аналитично качество и вода, минимум от клас 3, както е определено в БДС EN ISO 3696:2000.

С 2.1. Разтвор за почистване на поплавъка (натриев хидроксид 30% m/V).

За приготвяне на 100 ml разтвор се измерват 30 g натриев хидроксид и до марката се допълва с 96 % етанол.

С.3. Апаратура и оборудване

Обичайно лабораторно оборудване, в частност:

С.3.1. едноблюдна хидростатична везна с чувствителност един милиграм;

C.3.2. поплавък с обем най-малко 20 ml, специално пригоден за везната, снабден с нишка с диаметър непревишаващ 0,1 mm;

C.3.3. мерителен цилиндър, притежаващ марка, поплавъкът трябва да може да бъде напълно потопен в обема на цилиндъра, ограничен под марката; над нивото на течността може да е само нишката, мерителният цилиндър трябва да има вътрешен диаметър най-малко с 6 mm по-голям от този на поплавъка;

С.3.4. термометър (или температурен датчик), градуиран в градуси и десети от градуса, от 10°С до 40°С, калибриран до 0,05°С;

С.3.5. теглилки, проверени от оторизиран сертифициращ орган.

Забележка 1. Използването на двублюдна везна е също възможно; начинът е описан в метод "1. Определяне плътността и относителната плътност при 20°С" към приложение № 3.

С. 4. Начин на работа

Преди всяко измерване поплавъкът и мерителният цилиндър трябва да се почистват с дестилирана вода, да се подсушат с мека филтърна хартия, неоставяща влакна, и след това се промиват с разтвора, чието относително тегло ще бъде определяно. Измерванията трябва да се извършват максимално бързо, след като уредът влезе в стабилен режим на работа, за да се избегне в максимална степен загубата от изпарение на алкохол.

С.4.1. Калибриране на везната

Въпреки че по принцип везните са снабдени със система за вътрешно калибриране, хидростатичната везна да може да се калибрира с теглилки, проверени от оторизирания орган по сертификация и метрология.

С.4.2. Калибриране на поплавъка

С.4.2.1. Мерителният цилиндър се напълва до марката с бидестилирана вода [или вода с еквивалентна чистота, например вода, филтрирана през микропорест филтър с проводимост 18,2 (mS/cm)(микросименса на сантиметър)] с температура 15 - 25°С, но за предпочитане е да бъде 20°С.

С.4.2.2. Потапят се поплавъкът и термометърът, разбърква се, отчита се плътността на течността от апарата и ако е необходимо, отчитането се коригира, така че да бъде еднакво с това на водата при температурата на измерването.

С.4.3. Контрол с използване на водноалкохолен разтвор

С.4.3.1. С водноалкохолен разтвор с известно съдържание на алкохол, чиято температура е между 15 - 25°С, като за предпочитане е да е 20°С, мерителният цилиндър се напълва до марката.

С.4.3.2. Потапят се поплавъкът и термометърът, разбърква се, отчита се плътността на течността от апарата (или алкохолното съдържание, ако е възможно). Така определеното алкохолно съдържание трябва да бъде равно на определеното преди това.

Забележка 2. Този разтвор с известно алкохолно съдържание може да се използва и за калибриране на поплавъка вместо това да се извърши с бидестилирана вода.

С.4.4. Измерване на плътността на дестилат (или на алкохолното му съдържание, ако апаратурата го позволява).

С.4.4.1. Изпитваната проба се внася в мерителния цилиндър и се довежда до марката.

С.4.4.2. Потапят се поплавъкът и термометърът, разбърква се, отчита се плътността на течността от апарата (или алкохолното съдържание, ако е възможно). Отчита се температурата, ако плътността r_t е измерена при t°С.

С.4.4.3. Коригира се r_t с помощта на таблиците за определяне на плътностите r_t на водноалкохолните смеси (таблица II от приложение II на Сборника за методите за анализ на Международната организация за лозата и виното OIV, 1994).

С.4.5. Почистване на поплавъка и мерителния цилиндър

С.4.5.1. Потопя се поплавъкът в течността за почистване, налята в мерителния цилиндър.

С.4.5.2. Да се накисне за един час, като периодично се завъртва.

С.4.5.3. Да се промие обилно с чешмяна вода, след това с дестилирана вода.

С.4.5.4. Да се подсуши с мека филтърна хартия, неоставяща влакна.

Тази процедура да се направи преди първата употреба, след това редовно.

С.4.6. Резултати

С помощта на плътността r₂₀ се изчислява действителното алкохолно съдържание, като се използват таблици I, II и III от метод "3. Определяне алкохолното съдържание" към приложение № 3, даващи стойността на обемното алкохолно съдържание (об.%) при 20°С като функция от плътността при 20°С на водноалкохолни смеси.

С.5. Характеристики на възпроизводимостта (точността) на метода

С.5.1. Статистически резултати от междулабораторния тест

Посочените резултати са получени от международно изпитване за определяне точността на метода в съответствие на международно утвърдените процедури.

Година на вземане на междулабораторни	1997
проби
Брой лаборатории	12
Брой проби	6

Тип проби:

А - плодов ликьор; двойни с различно съдържание*

В - бренди; двойни произволни

C - уиски; двойни произволни

D - гроздова ракия; двойни с различно съдържание*

Е - ракия; двойни с различно съдържание*

F - ром; двойни с различно съдържание*

1. Еднолитрова колба с нормален сферичен шлиф

2. Ректификационна колона на Вигрьо с дължина 20 cm.

3. Хладник на West с прави стени с дължина 10 cm.

4. Хладник със серпентина - 40 cm.

Фиг. Дестилационен апарат за определяне на обемния алкохолен градус на алкохолните напитки

15. Гравиметрично определяне на общия сух екстракт на спиртните напитки (сравнителен метод)

1. Поле на приложение

Този метод се прилага само в случаите, когато сухият екстракт е до 15 g/l.

2. Нормативи

БДС EN ISO 3696:2000. Вода за лабораторни аналитични анализи - спецификации и методи за изпитване

3. Определение

Общият сух екстракт или общото сухо вещество включва всички вещества, които при определени физически условия са нелетливи.

4. Принцип

Претегляне на утайката след изпаряване на спиртната напитка на кипяща водна баня и изсушаване на утайката в лабораторна сушилня.

5. Апаратура и оборудване

5.1. Цилиндрично изпарително блюдо с диаметър 55 mm

5.2. Кипяща водна баня

5.3. Пипета от 25 ml клас А

5.4. Сушилня

5.5. Ексикатор

5.6. Аналитична везна с точност 0,1 mg

6. Вземане на проби

Пробите се съхраняват при стайна температура до извършване на анализа.

7. Начин на работа

7.1. Отпипетират се 25 ml от спиртната напитка, съдържаща по-малко от 15 g/l сухо вещество, в предварително претегленото плоскодънно изпарително блюдо с диаметър 55 mm. По време на първия час от изпаряването блюдото се поставя върху капака на кипяща водна баня, така че течността да не кипи, което може да доведе до загуба вследствие на изкипяване. Оставя се още един час в директен контакт с парите от кипящата водна баня.

7.2. Изсушаването се завършва, като блюдото се постави в сушилня при 105°С ± 3°С за два часа. Оставя се блюдото да изстине в ексикатор, след което то се претегля със съдържанието.

8. Изчисление

Масата на утайката, умножена по 40, е равна на сухия екстракт, съдържащ се в спиртната напитка, който се изразява в грамове на литър.Закръглява се до първия знак след десетичната запетая.

9. Точност на метода

9.1. Статистически резултати от междулабораторен тест

9.2. Посочените данни са получени по международно разработен метод за проучване на точността, осъществени в съответствие с международно възприетите процедури (1)(2).

Година на вземане на междулабораторни	1997
проби
Брой лаборатории	10
Брой проби	4

Тип проби:

А - бренди; двойни произволни

В - ром; двойни с различно съдържание

С - гроздова ракия; двойни произволни

D - ракия; двойни с различно съдържание

16. Определяне съдържанието на летливи съединения и на метанол в спиртни напитки (сравнителни методи)

16.1 Общи бележки

1. Определения

Летливите съединения в спиртните напитки включват всички летливи компоненти с изключение на етанол и метанол. Обикновено това са:

• летливи киселини, изразени като оцетна киселина;

• алдехиди, изразени като етанал (ацеталдехид) и фракцията етанал, съдържаща се в 1,1-диетоксиетан (ацетал);

• следните висши алкохоли: пропан-1-ол, бутан-1-ол, бутан-2-ол, метилпропан-1-ол, изразени като индивидуален алкохол, и 2-метилбутан-1-ол и 3-метилбутан-1-ол, изразени като индивидуален алкохол или чрез сумата от двата алкохола;

• етилацетат.

Конвенционалните методи, позволяващи определянето на летливите съединения, са следните:

• летливи киселини, чрез определяне на летливата киселинност;

• алдехиди (етанал и ацетал), етилацетат и висши алкохоли посредством газова хроматография.

2. Газово-хроматографски анализ на летливи съединения

Чрез газово-хроматографския метод могат да се определят и летливи съединения, характеризиращи изходната суровина за дестилация, условията на самата дестилация и характерни ароматни компоненти на спиртните напитки.

16.2. Газово-хроматографско определяне на летливи съединения: алдехиди, висши алкохоли, етилацетат и метанол

1. Област на приложение

Този метод е приложим за определянето на:

1,1-диетоксиетан (ацетал), 2-метилбутан-1-ол (амилов алкохол), 3-метилбутан-1-ол(изоамилов алкохол), метанол (метилов алкохол), етил етаноат(етил ацетат), бутан-1-ол (n-бутанол), бутан-2-ол (сек бутанол), 2-метилпропан-1-ол (изобутилов алкохол), пропан-1-ол (n-пропанол) и етанал (ацеталдехид) в спиртните напитки посредством газова хроматография. Той използва вътрешен стандарт, например пентан-3-ол. Концентрациите на определяемия компонент са изразени в грамове на 100 l абсолютен алкохол; алкохолното съдържание на продукта се определя преди анализа. Спиртните напитки, които могат да бъдат изследвани по този метод, включват: уиски, бренди, ром, винена ракия, плодова ракия и гроздова ракия от джибри.

2. Нормативна справка

БДС EN ISO 3696:2000. Лабораторна вода за аналитични цели - спецификации и методи за изпитване

3. Определения

Производни съединения са летливите съединения, които се получават едновременно с етанола при ферментацията, дестилацията и зреенето (отлежаването) на спиртните напитки.

4. Принцип

Производните съединения в спиртните напитки се определят чрез директно впръскване в газово-хроматографска система на спиртната напитка или подходящо разредена спиртна напитка. Преди впръскването на спиртната напитка се добавя подходящ вътрешен стандарт. Производните съединения се разделят на подходяща колона чрез температурна програма и се детектират с помощта на пламъчно-йонизационен детектор (FID). Концентрацията на всяко едно от тях се определя спрямо вътрешен стандарт с помощта на риспонс-фактори, които се получават при калибриране при хроматографски условия, идентични с тези, при които е осъществен анализът на спиртната напитка.

5. Реактиви и материали

Ако няма други указания, следва да се използват само сертифицирани стандартни образци за газово-хроматографски анализ и вода от клас минимум 3, съгласно изискванията на БДС ЕN ISO 3696:2000. Използваните при газово-хроматографския анализ сертифицирани стандартни образци обикновено са:

5.1. абсолютен алкохол

5.2. метанол

5.3. пропан-1-ол

5.4. 2-метилпропан-1-ол

5.5. подходящи вътрешни стандарти: пентан-3-ол, пентан-1-ол, 4-метилпентан-1-ол

5.6. 2-метилбутан-1-ол

5.7. 3-метилбутан-1-ол

5.8. етилацетат

5.9. бутан-1-ол

5.10. бутан-2-ол

5.11. ацеталдехид

5.12. ацетал

Ацеталът и ацеталдехидът трябва да се съхраняват на тъмно и при температура, по-ниска от 5°С. Всички други реактиви могат да се съхраняват при стайна температура.

5.13. За приготвяне на стандартните разтвори се използва 40% ( v/v) разтвор на етанол. За да се приготви разтвор на етанол с концентрация 400 ml/l, следва в мерителна колба с обем един литър да се прибавят 400 ml етанол (5.1), да се долее до марката с дестилирана вода и да се разбърка.

5.14. Приготвяне и съхранение на стандартните разтвори (процедура, използвана за валидиран метод).

Всички стандартни разтвори трябва да се съхраняват при температура, по-ниска от 5°С, и да се подновяват всеки месец. Масата на компонентите и на разтворите трябва да бъде записвана с точност 0,1 mg.

5.14.1. Стандартен разтвор А

За да се сведе до минимум изпаряването на компонентите, в мерителна колба от 100 ml, съдържаща около 60 ml разтвор на етанол (5.13), се отпипетират посочените реактиви, допълва се до марката с етанолов разтвор (5.13) и се хомогенизира добре. Записват се теглото на колбата, теглото на всяко прибавено съединение, както и общото тегло на съдържанието.

Компоненти (съединения)	Обем (ml)
Метанол (5.2)	3,0
Пропан-1-ол(5.3)	3,0
2-метилпропан-1-ол (5.4)	3,0
2-метилбутан-1-ол (5.6)	3,0
3-метилбутан-1-ол (5.7)	3,0
Етилацетат (5.8)	3,0
Бутан-1-ол (5.9)	3,0
Бутан-2-ол (5.10)	3,0
Ацеталдехид (5.11)	3,0
Ацетал (5.12)	3,0

Забележка 1. Препоръчва се да се добавя ацетал и ацеталдехид най-накрая, за да се сведат до минимум загубите при изпаряването.

5.14.2. Стандартен разтвор В

В мерителна колба от 100 ml, съдържаща около 80 ml разтвор на етанол (5.13), с пипета се прибавят 3 ml пентан-3-ол или друг подходящ вътрешен стандарт (5.5), добавя се етанолов разтвор до марката и се разбърква добре.

Записват се теглото на колбата и на пептан-3-ол или на добавения друг вътрешен стандарт, както и крайното общо тегло на съдържанието.

5.14.3. Стандартен разтвор С

Взема се с пипета 1 ml от разтвор А (5.14.1) и 1 ml от разтвор В (5.14.2) и се прибавят в мерителна колба от 100 ml, съдържаща около 80 ml разтвор на етанол (5.13), добавя се етанолов разтвор (5.13) до марката и се разбърква добре. Записват се теглото на колбата и на всяка добавена съставка, както и крайното общо тегло на съдържанието.

5.14.4. Стандартен разтвор D

За да се контролира последователността на процеса на анализ, се приготвя стандарт за контролиране на качеството с помощта на приготвения вече стандарт А (5.14.1). В мерителна колба 100 ml, съдържаща около 80 ml разтвор на етанол (5.13), с пипета се добавя един милилитър от разтвор А (5.14.1), добавя се разтвор на етанол (5.13) до марката и се разбърква добре. Записват се теглото на колбата и на всеки добавен компонент, както и на крайното общо тегло на съдържанието.

5.14.5. Стандартен разтвор Е

В мерителна колба 100 ml, съдържаща около 80 ml етанолов разтвор (5.13), с пипета се прибавят10 ml от разтвор А (5.14.2), долива се до марката с етанолов разтвор (5.13) и се разбърква добре. Записват се теглото на колбата и на всеки добавен компонент, както и на крайното общо тегло на съдържанието.

5.14.6. Стандартни разтвори за контрол върху линейността на отговор на FID

В отделни мерителни колби с обем 100 ml, съдържащи около 80 ml етанол (5.13), се прибавя с пипета съответно по 0, 0,1, 0,5, 1,0 и 2,0 ml разтвор А (5.14.1) и по един милилитър от разтвор В (5.14.2), долива се с етанолов разтвор (5.13) до марката и се разбърква добре. Записват се теглото на колбата и на всеки добавен компонент, както и на крайното общо тегло на съдържанието.

5.14.7. Стандартен разтвор за контрол на качеството CQ

В претеглена епруветка се прибавят с пипета 9 ml от стандартен разтвор D (5.14.4) и един милилитър от стандартен разтвор Е (5.14.5) и се разбърква добре. Записват се теглото на епруветката и на всеки добавен компонент, както и на крайното общо тегло на съдържанието.

6. Апаратура и оборудване

6.1. Апаратура за измерване на плътност и алкохолно съдържание

6.2. Аналитична везна с възможност за отчитане на резултата до 0,1 mg

6.3. Газов хроматограф с възможност за работа в температурно програмиран режим, снабден с пламъчно-йонизационен детектор и интегратор или друга система за обработка на данните, с възможности за измерване площта или височината на пиковете.

6.4. Хроматографска колона, позволяваща разделянето на определяемите компоненти, така че минималното разрешение между два компонента (освен 2-метилбутан-1-ол и 3-метилбутан-1-ол) да бъде най-малко 1,3.

Забележка 2. Посочените хроматографски колони и условия са подходящи примери:

• Предколона с дължина 1 m и вътрешен диаметър 0,32 mm, свързана с колона СР WAX-57 CB с дължина 50 m и вътрешен диаметър 0,32 mm, с дебелина на филма (стабилизиран полиетиленгликол) 0,2 mm, както и друга колона Carbowax (Карбовакс) 400 с дължина 50 m и вътрешен диаметър 0,32 mm с дебелина на филма 0,2 mm (колоните са свързани чрез връзки, без мъртъв обем).

Носещ газ и налягане:	Хелий (135 kPa)
Температура на колоната -	начална температура 35°С,
	задържане 17 min, стъп-
	ка 12°С/min до 70°С,
	задържане при 70°С за
	25 min
Температура на инжектора	- 150°С
Температура на детектора	- 250°С
Количество на пробата за	един микролитър......split 20
инжектиране -	до100:1

• Предколона с дължина 1 m и вътрешен диаметър 0,32 mm, свързана с колона CP-WAX 57 СВ с дължина 50 m и вътрешен диаметър 0,32 mm, дебелина на филма (стабилизиран полиетиленгликол) 2 mm (колоните са свързани чрез връзки, без мъртъв обем).

Носещ газ и налягане -	Хелий(65 kPa)
Температура на колоната -	начална температура 35°С,
	задържане 10 min, стъп-
	ка: 5°С/min до 110°С,
	- 30°С/min от 110°С
	до 190°С, задържане при
	190°С за 2 min
Температура на инжектора	- 260°С
Температура на детектора	- 300°С
Количество на пробата	един микролитър......split 55:1
за инжектиране

• Колона с пълнеж [5% CW 20 M,Carbopak B(Карбопак В)] с дължина 2 m и вътрешен диаметър 2 mm.

Температура на колоната -	начална температура 65°С,
	задържане 4 min, от 65
	до 140°С стъпка
	10°С/min, задържане при
	140°С - 5 min, от 140°С
	до 150°С, стъпка 5°С/min,
	задържане - 3 min
Температура на инжектора:	65°С
Температура на детектора:	200°С
Количество на пробата	един микролитър
за инжектиране

7. Проби и вземане на проби

7.1. Лабораторна проба

Алкохолното съдържание на всяка проба се измерва още при получаването ѝ (6.1).

8. Процедура (използвана за валидирания метод)

8.1. Вземане на проба за изпитване

8.1.1. Претегля се един затворен съд, подходящ за измерване, и се записва неговото тегло.

8.1.2. Добавят се 9 ml лабораторна проба в съда и се записва теглото на пробата (M_проба).

8.1.3. Добавя се един милилитър стандартен разтвор E (5.14.5) и се записва теглото (M_IS).

8.1.4. Разклаща се пробата (поне 20 пъти). Преди анализа пробите се съхраняват при температура, по-ниска от 5°С, за да се избегнат до минимум загубите от изпарението.

8.2. Празна проба

8.2.1. С помощта на везна съгласно т.6.2 се претегля затворен съд, подходящ за теглене, и се отбелязва теглото с отчитане до четвъртия десетичен знак.

8.2.2. В съда с пипета се добавят 9 ml от разтвор на етанол (5.13) и се записва теглото.

8.2.3. Добавя се един милилитър стандартен разтвор Е (5.14.5) и се записва теглото.

8.2.4. Пробата се разклаща (поне 20 пъти). Преди анализа пробата се съхранява при температура, по-ниска от 5°С, за да се избегнат до минимум загубите от изпарението.

8.3. Предварителен тест

Инжектира се стандартен разтвор С (5.14.3), за да се уверим, че всички вещества са добре разделени (с изключение на 2-метилбутан-1-ол и 3-метилбутан-1-ол).

8.4.Калибриране

Калибрирането се проверява чрез следната процедура. Извършва се трикратно инжектиране на всеки от стандартните разтвори, съдържащи вътрешен стандарт (IS). За всяко инжектиране от площите или височините на пиковете на интегратора се изчислява съотношението R за всеки компонент и графично се представя като функция от стойността на концентрацията на тези компоненти по отношение на вътрешния стандарт (IS). Получава се линейна графика с коефициент на корелация минимум 0,99.

	Площ или височина на пика на отделния компонент
R =	----------------------------------------------------------------
	Площ или височина на пика на вътрешния стандарт (IS)

	Концентрация на отделния компонент (μg/g)
С =	----------------------------------------------------------------
	Концентрация на вътрешния стандарт (IS) (μg/g)

8.5. Определяне

В хроматографа се инжектира стандартен разтвор С (5.14.3) и два стандартни разтвора CQ (5.14.7). След това се инжектира с неизвестните проби (подготвени съобразно точки 8.1 и 8.2), като се внася стандартният разтвор за контрол на качеството на всеки 10 проби, за да се осигури аналитична стабилност. На всеки 5 проби се инжектира стандартен разтвор С (5.14.3).

9. Изчисление

Възможно е да се прилага автоматизирана система за управление на данните с оглед те да могат да бъдат контролирани съгласно принципите на описания метод. Измерват се площта или височината на пиковете на отделните компоненти и на вътрешния стандарт.

9.1. Изчисление на риспонс фактора

От хроматограмата на инжектирания стандартен разтвор С (5.14.3) се изчисляват риспонс факторите за всеки отделен компонент чрез уравнението:

където:

IS е вътрешният стандарт;

концентрация на отделния компонент = концентрацията на отделния компонент в разтвор С (5.14.3);

концентрация IS - концентрацията на вътрешния стандарт в разтвор С (5.14.3).

9.1.2. Анализ на пробите

С помощта на уравнение (2) се изчислява концентрацията на всеки компонент в пробите.

Концентрации на отделните компоненти в mg/g = (Площ или височина на пика на отделния компонент)/(Площ или височина на пика на вътрешния стандарт)

където:

М_пр e теглото на пробата (8.1.2);

М_IS - теглото на вътрешния стандарт (8.1.3);

концентрация IS = концентрацията на вътрешния стандарт в разтвор Е (5.14.5);

RF = риспонс факторът, изчислен с уравнение (1).

9.1.3.Анализ на стандартен разтвор за контрол на качеството.

Аналитичният добив на търсената стойност за всеки отделен компонент, съдържащ се в стандартите CQ (5.14.7), се изчислява с формулата:

% аналитичен добив на отделните компоненти, съдържащи се в

	Концентрация на компонента в стандарта CQ
еталоните СQ =	---------------------------------------------------	• 100 (3)
	Концентрация на компонента в разтвор D

Концентрацията на анализирания компонент в стандартния разтвор CQ се изчислява чрез използване на уравнения (1) и (2).

9.2. Крайно представяне на резултатите

За пробите резултатите се превръщат от микрограма на грам в грама за 100 литра абсолютен алкохол с помощта на уравнението:

където:

r е плътността, kg/m³.

Резултатите се изразяват с три цифри и най-много с една цифра след десетичния знак, например 11,4 g/100 l абсолютен алкохол.

10. Осигуряване и контрол на качеството (използвани за валидиран метод)

Чрез уравнение (2) се изчислява концентрацията на всеки определяем компонент в стандартните разтвори за контрол на качеството, приготвени съгласно процедурата, описана в т. 8.1.1 до т. 8.1.4. За изчисляване на аналитичния добив на планираната стойност се използва уравнение (3). Ако получените резултати са в границите ± 10% от теоретичните им стойности за всеки определяем компонент, анализът може да бъде извършен. В противен случай се препоръчва да се открие причината за неточността и да се предприемат необходимите коригиращи действия.

11. Характеристики на ефективността (точността) на метода.

Статистически резултати от междулабораторни сравнителни изпитвания: следващите таблици представляват стойности за следните анализирани съединения: етанал, етилацетат, ацетал, общ етанал, метанол, бутан-2-ол, пропан-1-ол, бутан-1-ол, 2-метилпропан-1-ол, 2-метилбутан-1-ол, 3-метилбутан-1-ол.

Данните са получени от международно проучване върху ефективността (точността) на метода, осъществени в съответствие с международно възприетите процедури.

Година на вземане на междулабораторни	1997
проби
Брой лаборатории	32
Брой проби	5
Определяемо съединение	етанал

Тип проби:

А - бренди; двойни произволни;

В - вишновка; двойни произволни;

C - гроздова ракия; двойни произволни;

D - уиски; двойни с различно съдържание*;

E - ром; двойни с различно съдържание*;

Година на международните проби	1997
Брой лаборатории	32
Брой проби	5
Определяемо съединение	етилацетат

Тип проби:

A - бренди; двойни произволни;

B - вишновка; двойни произволни;

C - гроздова ракия; двойни произволни;

D - уиски; двойни с различно съдържание*;

E - ром; двойни с различно съдържание*.

Година на международните проби	1997
Брой лаборатории	32
Брой проби	5
Определяемо съединение	ацетал

Тип проби:

A - бренди; двойни произволни;

B - вишновка; двойни произволни;

C - гроздова ракия; двойни произволни;

D - уиски; двойни с различно съдържание*;

E - ром; двойни с различно съдържание*.

Година на международните проби	1997
Брой лаборатории	32
Брой проби	5
Определяемо съединение	oбщ етанал

Тип проби:

A - бренди; двойни произволни;

B - вишновка; двойни произволни;

C - гроздова ракия; двойни произволни;

D - уиски; двойни с различно съдържание*;

E - ром; двойни с различно съдържание*.

Година на международните проби	1997
Брой лаборатории	32
Брой проби	5
Определяемо съединение	метанол

Тип проби:

A - бренди; двойни произволни;

B - вишновка; двойни произволни;

C - гроздова ракия; двойни произволни;

D - уиски; двойни с различно съдържание*;

E - ром; двойни с различно съдържание*.

Година на международните проби	1997
Брой лаборатории	32
Брой проби	4
Определяемо съединение	бутан-2-ол

Тип проби:

A - бренди; двойни произволни;

B - вишновка; двойни произволни;

C - гроздова ракия; двойни произволни;

E - ром; двойни с различно съдържание*.

Година на международните проби	1997
Брой лаборатории	32
Брой проби	5
Определяемо съединение	пропан-1-ол

Тип проби:

A - бренди; двойни произволни;

B - вишновка; двойни произволни;

C - гроздова ракия; двойни произволни;

D - уиски; двойни с различно съдържание*;

E - ром; двойни с различно съдържание*.

Година на международните проби	1997
Брой лаборатории	32
Брой проби	5
Определяемо съединение	бутан-1-ол

Тип проби:

A - бренди; двойни произволни;

B - вишновка; двойни произволни;

C - гроздова ракия; двойни произволни.

Година на международните проби	1997
Брой лаборатории	32
Брой проби	5
Определяемо съединение	2-метилпропан-1-ол

Тип проби:

A - бренди; двойни произволни;

B - вишновка; двойни произволни;

C - гроздова ракия; двойни произволни;

D - уиски; двойни с различно съдържание*;

E - ром; двойни с различно съдържание*.

Година на международните проби	1997
Брой лаборатории	32
Брой проби	5
Определяемо съединение	2-метилбутан-1-ол

Тип проби:

A - бренди; двойни произволни;

B - вишновка; двойни произволни;

C - гроздова ракия; двойни произволни;

D - уиски; двойни с различно съдържание*;

E - ром; двойни с различно съдържание*.

Година на международните проби	1997
Брой лаборатории	32
Брой проби	5
Определяемо съединение	3-метилбутан-1-ол

Тип проби:

A - бренди; двойни произволни;

B - вишновка; двойни произволни;

C - гроздова; двойни произволни;

D - уиски; двойни с различно съдържание*;

E - ром; двойни с различно съдържание*.

17. Определяне на захари

Захарите в спиртни напитки се определят след инверсия съгласно БДС 6410 (Вина и спиртни напитки. Методи за определяне на захарите).

Сиела Евро

Европейското законодателство в превод на български език. Пълна информационна двуезична система с текстовете на английски и официалните преводи от Брюксел.

Новини

27 септември 2024

Нов Финансов регламент на ЕС

В правно-информационната система "Сиела Евро" е публикуван Регламент (ЕС, Евратом) 2024/2509 на Европейския парламент и на Съвета от 23 септември 2024 година за финансовите правила, приложими за общия бюджет на Съюза.

Виж повече

Изпрати статията по email

Държавен вестник, брой 9 от 30.I

НАРЕДБА ЗА КОНТРОЛА И КООРДИНАЦИЯТА НА КОНТРОЛА ВЪРХУ ВИНАТА, СПИРТА, ДЕСТИЛАТИТЕ И СПИРТНИТЕ НАПИТКИ

Новини

Нов Финансов регламент на ЕС

Сиела Офиси